EB病毒核抗原3C提高Gemin3基因的表达

目的探讨EB病毒核抗原(EBNA)3C对Gemin3基因表达的影响。方法共转染EBNA3C和Gemin3基因至HEK293细胞。依靠慢病毒载体介导发卡RNA干涉敲减EBNA3C基因的表达,并经嘌呤霉素筛选获得稳定的EBNA3C低表达细胞系,采用Western blot检测EBNA3C对Gemin3蛋白表达的影响。结果 Gemin3基因的表达随着EBNA3C表达量的增加而增加,呈剂量依赖性,在EBNA3C基因敲减细胞中Gemin3的表达减少。结论 EBNA3C可提高Gemin3基因表达水平。

Gemin3抑制p53介导的细胞凋亡(英文)

目的探讨Gemin3基因表达在细胞增殖中的作用及其途径。方法采用免疫共沉淀、谷胱苷肽-S转移酶共沉淀实验确定Gemin3与p53两种蛋白在体内、体外相互结合及相互作用的结构域。荧光素酶报告基因检测转染Gemin3基因对p53基因的影响,依靠慢病毒载体介导发卡RNA干涉敲减Gemin3基因的表达并经嘌呤霉素筛选获得稳定的Gemin3低表达细胞系,实时PCR检测Gemin3敲减对p53及其下游基因在转录水平的影响,流式细胞检测Gemin3敲减对细胞增殖的影响。结果 Gemin3的C端与p53的中部DNA结合部位相互结合,Gemin3在转录水平抑制p53基因的表达,敲减Gemin3基因的表达导致细胞凋亡的增加。结论 Gemin3与p53相互结合并通过抑制p53的表达促进细胞的增殖。

EBNA3C与Gemin3两种蛋白形成复合物及相互作用的结构域

探讨EB病毒核抗原3C(EBNA3C)与Gemin3的相互结合及其作用区域。用Flag-EBAN3C与GFPGemin3共转染HEK 293细胞,采用免疫共沉淀、谷胱苷肽-S转移酶共沉淀及免疫荧光蛋白共存实验确定EBNA3C与Gemin3两种蛋白在体内、体外相互结合及相互作用的结构域。EBNA3C与Gemin3两种蛋白在体内外相结合,二者通过各自的C端相互结合。EBNA3C与Gemin3两种蛋白形成稳定复合物。

EBNA3C combines with Gemin3 and up-regulates its expression

Objective To investigate the combination of Epstein-Barr virus nuclear protein 3C (EBNA3C) with Gemin3 and its effect on Gemin3 expression. Methods Co-immunoprecipitation, GST pull-down and immunofluorescent assay were used to determine the combination of EBNA3C and Gemin3 and their combining domain. Stable EBNA3C knockdown cell lines were made by lentivirus-delivered small hairpin RNA and then puromycin selection. Western blot was used to check the effect of EBNA3C on Gemin3 expression. Results EBNA3C and Gemin3 combined with each other in vivo and in vitro through their C-terminals. EBNA3C up-regulated Gemin3 gene expression. Conclusion EBNA3C forms complex with Gemin3 and up-regulates its expression.

Gemin3基因通过抑制p53表达阻碍细胞凋亡

目的探讨Gemin3基因表达在细胞凋亡中的作用及途径。方法采用免疫共沉淀、谷胱甘肽-S转移酶共沉淀实验确定Gemin3与p53两种蛋白在体内、体外相互结合及相互作用的结构域。荧光素酶报告基因检测转染Gemin3基因对p53基因的影响，依靠慢病毒载体介导小干扰RNA敲低Gemin3基因的表达，并经嘌呤霉素筛选获得稳定的Gemin3低表达细胞系，实时定量PCR检测Gemin3敲低对p53及其下游基因在转录水平的影响，流式细胞术检测Gemin3敲低对细胞凋亡的影响。结果Gemin3的C端与p53的中部DNA部位相互结合。将p53报告基因、p53蛋白基因以及逐渐增量的Gemin3基因共转染Saos-2细胞，随着Gemin3质粒转染浓度的增高，p53介导的报告基因表达水平逐渐降低，Gemin3在转录水平抑制p53基因的表达。实时定量PCR结果显示，与对照细胞比较，Gemin3敲低细胞中，p53、p21和BaxmRNA的表达水平明显增高。Western blot检测结果显示，Gemin3敲低细胞中，p53的表达明显升高。流式细胞术检测结果显示，敲低Gemin3基因的表达导致细胞凋亡的增加。结论Gemin3与p53相互结合并通过抑制p53的表达阻碍细胞凋亡。

MicroRNA生物合成相关基因在肝癌中的表达及其意义

目的通过检测肝癌和癌旁组织中microRNA(miRNA)合成相关基因的mRNA表达,分析其与肝癌恶性行为的关系。方法运用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测肝癌组织及其配对癌旁组织中miRNA生物合成相关基因的mRNA表达水平,比较分析其表达水平差异及其与肝癌预后的关系。结果 RT-PCR结果显示,与相应的癌旁组织相比,肝癌组织中细胞核内miRNA生物合成相关基因Drosha、DGCR8、DBR1、ADAR、Exportin 5的mRNA表达水平显著升高(P<0.0001),而细胞质内miRNA生物合成相关基因Dicer、AGO2、GEMIN3、GEMIN4的mRNA表达水平显著下降(P<0.0001)。肝癌组织中DBR1和Exportin 5 mRNA高表达患者的总生存率高于低表达患者(P<0.05),癌旁组织中DGCR8mRNA高表达患者的总生存率高于低表达患者(P<0.05)。结论 Dicer的表达可能在肝癌发生发展过程中起重要作用。DBR1、Exportin 5和DGCR8可以作为肝癌治疗的潜在干预靶点。

MicroRNA生物合成通路中Gemin 3基因单核苷酸多态性与非霍奇金淋巴瘤风险及预后相关性

目的:评估miRNA生物合成过程中Gemin 3基因位点rs197412的单核苷酸多态性与患非霍奇金淋巴瘤(NHL)风险及预后的相关性。方法:在230名NHL患者组和120名健康对照者组中采用聚合酶链反应-连接酶检测反应进行MiR-SNP基因分型。利用Kaplan-Meier法计算患者生存曲线,曲线之间的比较采用对数秩检验。多因素生存分析采用Cox比例风险模型进行。结果:rs197412基因分型在NHL组及对照组中分布无差异。患者携带rs197412 TT基因型比患者携带CC+CT基因型生存时间长(P=0.007)。此外,该rs197412 SNP也被确定为NHL预后的独立预测因子(相对危险度:2.138;95%可信区间:1.303-3.508;P=0.003)。结论:miRNA生物合成通路中Gemin 3基因位点rs197412的单核苷酸多态性与患NHL风险无关,但可能影响NHL的生存。