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RT-cDNA克隆-PCR法获取犬瘟热病毒融合蛋白基因(F)
1
作者
江国托
卢景良
+3 位作者
刘长明
阎庆生
刘思国
刘滨东
《生物技术》
CAS
CSCD
1996年第1期8-9,共2页
纯化鸡胚成纤维细胞培养的犬瘟热病毒(CanineDistemperVirus,CDV),获得病毒基因组RNA后,反转录合成双链病毒F基因cDNA。将此双链cDNA平端插入PUC19质粒SamⅠ位点构建重组质粒,进行c...
纯化鸡胚成纤维细胞培养的犬瘟热病毒(CanineDistemperVirus,CDV),获得病毒基因组RNA后,反转录合成双链病毒F基因cDNA。将此双链cDNA平端插入PUC19质粒SamⅠ位点构建重组质粒,进行cDNA克隆。以重组克隆质粒为模板PCR扩增,获得CDV全长F基因。将此F基因插入表达载体PBV220,在大肠杆菌中表达,通过对表达产物的最终鉴定,可确认所获片段为CDV全长F基因.
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关键词
犬瘟热病毒
融合蛋白基因
反转录
CDNA克隆
PCR
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职称材料
猪带绦虫TS045W-4B—TSOL18融合基因在大肠埃希菌ArcticExpress(DE3)中的表达、纯化和兔抗血清的制备
被引量:
10
2
作者
周泠
周必英
+2 位作者
刘美辰
刘晖
贺莉芳
《中华地方病学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第6期619-624,共6页
目的构建猪带绦虫pGEX—TS045W-4B-TSOL18重组质粒,纯化重组融合蛋白及制备兔抗重组蛋白血清。方法用疏水甘氨酸接头(Gly,Ser),连接TS045W-4B和TSOL18编码基因,通过全基因合成猪带绦虫TS045W-4B—TSOL18融合基因。将融合基因定向...
目的构建猪带绦虫pGEX—TS045W-4B-TSOL18重组质粒,纯化重组融合蛋白及制备兔抗重组蛋白血清。方法用疏水甘氨酸接头(Gly,Ser),连接TS045W-4B和TSOL18编码基因,通过全基因合成猪带绦虫TS045W-4B—TSOL18融合基因。将融合基因定向克隆到pGEX—1λT表达载体上,构建重组质粒pGEX—TS045W-4B—TSOL18,再用重组质粒转化大肠埃希菌(E.col)ArcticExpress(DE3)。用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导其表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)分析表达情况,亲和层析纯化获得重组融合蛋白。用纯化的重组蛋白按0.5mg/只与弗氏完全佐剂(CFA)混合,于兔后腿肌肉及背部皮下多点免疫注射;2周后再用相同剂量的重组蛋白与弗氏不完全佐剂(IFA)混合加强免疫,此后每隔10d按第2次免疫法重复加强免疫,第4次免疫后6d,采集兔心脏血并分离血清,立即纯化及制备抗血清。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定抗血清的效价,采用蛋白印迹(Western blot)法鉴定抗血清的特异性。结果全基因合成的TS045W-4B—TSOL18融合基因片段长度为789bp。酶切证实pGEX—TS045W-4B—TSOL18重组质粒成功构建,测序结果获得的基因片段大小为789bp,与预期大小相符。SDS—PAGE分析和亲和层析后显示,重组质粒在转化E.col ArcticExpress(DE3)后,获得了相对分子质量约为55×10。的重组融合蛋白,纯度为85%。EUSA测定兔抗血清的效价为1:512000,Westernblot证实抗血清能与重组融合蛋白发生特异性反应,在相对分子质量约为55×10^3处出现1条与预期大小-致的特异性条带。结论成功地构建猪带绦虫重组质粒pGEX—TS045W-4B—TSOL18及制备了高纯度的TS045W-4B—TSOL18重组融合蛋白和高滴度的兔抗重组蛋白血清。
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关键词
猪带绦虫
TS045W-4B—TSOL18编码基因
重组融合蛋白
抗血清
原文传递
题名
RT-cDNA克隆-PCR法获取犬瘟热病毒融合蛋白基因(F)
1
作者
江国托
卢景良
刘长明
阎庆生
刘思国
刘滨东
机构
哈尔滨兽医生物技术国家重点实险室
出处
《生物技术》
CAS
CSCD
1996年第1期8-9,共2页
文摘
纯化鸡胚成纤维细胞培养的犬瘟热病毒(CanineDistemperVirus,CDV),获得病毒基因组RNA后,反转录合成双链病毒F基因cDNA。将此双链cDNA平端插入PUC19质粒SamⅠ位点构建重组质粒,进行cDNA克隆。以重组克隆质粒为模板PCR扩增,获得CDV全长F基因。将此F基因插入表达载体PBV220,在大肠杆菌中表达,通过对表达产物的最终鉴定,可确认所获片段为CDV全长F基因.
关键词
犬瘟热病毒
融合蛋白基因
反转录
CDNA克隆
PCR
Keywords
gene encoding fusion protein of cdv
RT
cDNA cloning
PCR
分类号
S852.655 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
猪带绦虫TS045W-4B—TSOL18融合基因在大肠埃希菌ArcticExpress(DE3)中的表达、纯化和兔抗血清的制备
被引量:
10
2
作者
周泠
周必英
刘美辰
刘晖
贺莉芳
机构
遵义医学院寄生虫学教研室
遵义医学院附属第一医院中医科
出处
《中华地方病学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第6期619-624,共6页
基金
国家自然科学基金(81160206)
文摘
目的构建猪带绦虫pGEX—TS045W-4B-TSOL18重组质粒,纯化重组融合蛋白及制备兔抗重组蛋白血清。方法用疏水甘氨酸接头(Gly,Ser),连接TS045W-4B和TSOL18编码基因,通过全基因合成猪带绦虫TS045W-4B—TSOL18融合基因。将融合基因定向克隆到pGEX—1λT表达载体上,构建重组质粒pGEX—TS045W-4B—TSOL18,再用重组质粒转化大肠埃希菌(E.col)ArcticExpress(DE3)。用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导其表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)分析表达情况,亲和层析纯化获得重组融合蛋白。用纯化的重组蛋白按0.5mg/只与弗氏完全佐剂(CFA)混合,于兔后腿肌肉及背部皮下多点免疫注射;2周后再用相同剂量的重组蛋白与弗氏不完全佐剂(IFA)混合加强免疫,此后每隔10d按第2次免疫法重复加强免疫,第4次免疫后6d,采集兔心脏血并分离血清,立即纯化及制备抗血清。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定抗血清的效价,采用蛋白印迹(Western blot)法鉴定抗血清的特异性。结果全基因合成的TS045W-4B—TSOL18融合基因片段长度为789bp。酶切证实pGEX—TS045W-4B—TSOL18重组质粒成功构建,测序结果获得的基因片段大小为789bp,与预期大小相符。SDS—PAGE分析和亲和层析后显示,重组质粒在转化E.col ArcticExpress(DE3)后,获得了相对分子质量约为55×10。的重组融合蛋白,纯度为85%。EUSA测定兔抗血清的效价为1:512000,Westernblot证实抗血清能与重组融合蛋白发生特异性反应,在相对分子质量约为55×10^3处出现1条与预期大小-致的特异性条带。结论成功地构建猪带绦虫重组质粒pGEX—TS045W-4B—TSOL18及制备了高纯度的TS045W-4B—TSOL18重组融合蛋白和高滴度的兔抗重组蛋白血清。
关键词
猪带绦虫
TS045W-4B—TSOL18编码基因
重组融合蛋白
抗血清
Keywords
Taenia solium
TSO45W-4B-TSOL18
encoding
gene
Recombinant
fusion
protein
Antiserum
分类号
R373.2 [医药卫生—病原生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
RT-cDNA克隆-PCR法获取犬瘟热病毒融合蛋白基因(F)
江国托
卢景良
刘长明
阎庆生
刘思国
刘滨东
《生物技术》
CAS
CSCD
1996
0
下载PDF
职称材料
2
猪带绦虫TS045W-4B—TSOL18融合基因在大肠埃希菌ArcticExpress(DE3)中的表达、纯化和兔抗血清的制备
周泠
周必英
刘美辰
刘晖
贺莉芳
《中华地方病学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013
10
原文传递
已选择
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