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Foreign gene transfer into Chinese shrimps (Penaeus chinensis) with gene gun 被引量:1
1
作者 LIU Zhiyi XIANG Jianhai +1 位作者 ZHOU Guoying GONG Zuxun 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2001年第9期766-770,794,共6页
Plasmids pG DNA-RZ1 with a GFP (green fluorescent protein) reporter gene and a ribozyme gene incising penaeid white spot baculovirus (WSBV) were first introduced into the fertilized eggs of Chinese shrimps by gene gun... Plasmids pG DNA-RZ1 with a GFP (green fluorescent protein) reporter gene and a ribozyme gene incising penaeid white spot baculovirus (WSBV) were first introduced into the fertilized eggs of Chinese shrimps by gene gun. The treated and control samples of different development stages were observed with a fluorescent microscope. The transient expression of GFP gene was high in nauplius and zoea larvae. Results from RT-PCR and PCR for adults showed that the foreign genes had been transferred into the shrimps and had expressed the corresponding proteins. This work has established a transgenic method for penaeid shrimps, which will set base for the application of genetic engineering breeding into industry. 展开更多
关键词 gene gun GFP TRANSGENIC shrimps.
原文传递
Novel DNA vaccine based on hepatitis B virus core gene induces specific immune responses in Balb/c mice 被引量:7
2
作者 Yi-Ping Xing Zu-Hu Huang +4 位作者 Shi-Xia Wang Jie Cai Jun Li Te-Hui W Chou Shan Lu 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2005年第29期4583-4586,共4页
AIM: To investigate the immunogenidty of a novel DNA vacoine, pSW3891/HBc, based on HBV core gene in Balb/c mice. METHODS: A novel DNA vaccine, pSW3891/HBc, encoding HBV core gene was constructed using a vector plas... AIM: To investigate the immunogenidty of a novel DNA vacoine, pSW3891/HBc, based on HBV core gene in Balb/c mice. METHODS: A novel DNA vaccine, pSW3891/HBc, encoding HBV core gene was constructed using a vector plasmid pSW3891. Balb/c mice were immunized with either pSW3891/HBc or empty vector DNA via gene gun. IgG anti-HBc responses in mouse sera were demonstrated by ELISA. Specific cytotoxicity of cytotoxic T lymphocytes (CTLs) of mice was quantitatively measured by lactate dehydrogenase release assay. RESULTS: HBcAg was expressed effectively in 293T cell line transiently transfected with pSW3891/HBc. Strong IgG anti-HBc responses were elicited in mice immunized with pSW3891/HBc. The end-point titers of anti-HBc reached the highest 1:97 200, 4 wk after the third immunization. The specific CTL killing with the highest specific lysis reached 73.25% at effector:target ratio of 20:1 in mice that received pSW3891/HBc DNA vaccine. CONCLUSION: pSW3891/HBc vaccination elicits specific anti-HBc response and induces HBc-specific CTL response in immunized Balb/c mice. 展开更多
关键词 DNA vaccine Hepatitis B virus core antigen IMMUNOGENICITY gene gun CTL HBV
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Advances in Genetic Transformation of Tea(Camellia sinensis)
3
作者 Ya-Ping Yang Yue-Rong Liang Xin-Qiang Zheng 《茶叶》 2013年第4期287-293,共7页
Long-term fertility cycle,low self-compatibility and short flowering period limited the tea breeding by conventional method.It is necessary to apply biotechnology,especially genetic transformation method,to obtain new... Long-term fertility cycle,low self-compatibility and short flowering period limited the tea breeding by conventional method.It is necessary to apply biotechnology,especially genetic transformation method,to obtain new mutants and to accelerate tea breeding.This paper reviews the status and progress in genetic transformation and related influencing factors.It has been noticed that tea genetic transformation has advantages in getting useful target mutants.The genetic transformation by Agrobacterium-mediated and gene gun methods are usually used.However,further research should be focused on improvement of plant regeneration. 展开更多
关键词 遗传转化方法 茶树育种 茶叶 农杆菌介导 生育周期 生物技术 影响因素 植株再生
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龙牙百合的植株再生与遗传转化 被引量:37
4
作者 刘菊华 金志强 +2 位作者 徐碧玉 郑思乡 刘志敏 《分子植物育种》 CAS CSCD 2003年第4期465-474,共10页
以龙牙百合鳞片叶切块为外植体 ,通过多种培养基的比较试验 ,得出MS +2 ,4 -D 2mg/L +6 -BA0 2mg/L是诱导愈伤的最佳培养基 ,MS +6 -BA 1mg/L +NAA 0 0 5mg/L是不定芽诱导及伸长的适宜培养基。MS +NAA 2mg/L是生根的最佳培养基。本试... 以龙牙百合鳞片叶切块为外植体 ,通过多种培养基的比较试验 ,得出MS +2 ,4 -D 2mg/L +6 -BA0 2mg/L是诱导愈伤的最佳培养基 ,MS +6 -BA 1mg/L +NAA 0 0 5mg/L是不定芽诱导及伸长的适宜培养基。MS +NAA 2mg/L是生根的最佳培养基。本试验已建立了适用于龙牙百合遗传转化的快速高频再生系统。用携带有几丁质酶基因和 β - 1、 3葡聚糖酶基因的工程菌 ,通过农杆菌介导法和基因枪转化法转化龙牙百合 ,经PCR和点杂交检测证明外源基因已经整合到植物染色体中。同时对农杆菌介导法和基因枪法进行比较 ,发现农杆菌介导法的转化率为 16 7% ,基因枪法的转化率为 5 0 % ,因此可能基因枪转化法更适于龙牙百合的遗传转化。 展开更多
关键词 龙牙百合 植株再生 遗传转化 外植体 培养基 基因枪法 蔬菜
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棉花基因枪茎尖转化研究 被引量:13
5
作者 刘传亮 于娅 +2 位作者 王玉芬 耿立召 李付广 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2003年第6期361-366,共6页
对棉花茎尖轰击转化的多种因素进行了分析,建立了较为完善的基因枪茎尖转化体系,使抗性转化率达到4.7%~9.4%,转化周期缩短至2~3个月,改进了抗性筛选程序,建立了4次筛选法,获得91株抗生素抗性植株;同时对部分植株目的基因的表达量进... 对棉花茎尖轰击转化的多种因素进行了分析,建立了较为完善的基因枪茎尖转化体系,使抗性转化率达到4.7%~9.4%,转化周期缩短至2~3个月,改进了抗性筛选程序,建立了4次筛选法,获得91株抗生素抗性植株;同时对部分植株目的基因的表达量进行了初步的遗传分析。结果表明,茎尖的轰击状态与抗性筛选程序对转化周期与转化率具有决定性作用。 展开更多
关键词 棉花 茎尖 基因枪 遗传转化 抗性 抗生素 植株 表达量 遗传分析 筛选程序 转化周期 转化率
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基因枪介导的西瓜遗传转化研究 被引量:25
6
作者 任春梅 董延瑜 +1 位作者 洪亚辉 赵燕 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 2000年第6期432-435,共4页
为了建立基因枪介导的西瓜遗传转化系统 ,以西瓜顶芽为受体 ,p BI12 1为供体 ,采用正交试验设计 ,研究了基因枪的扩散腔类型、轰击次数、受体的预培养和高渗处理对转化率的影响 .经方差分析与差异显著性测验 ,预培养时间与轰击次数对转... 为了建立基因枪介导的西瓜遗传转化系统 ,以西瓜顶芽为受体 ,p BI12 1为供体 ,采用正交试验设计 ,研究了基因枪的扩散腔类型、轰击次数、受体的预培养和高渗处理对转化率的影响 .经方差分析与差异显著性测验 ,预培养时间与轰击次数对转化率影响显著 ,而扩散腔类型和甘露醇处理质量浓度对转化率的影响不显著 .经组织化学检测 ,有 33.3%抗 Kan试管苗为 展开更多
关键词 西瓜 顶芽 转化 基因枪介导
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抗虫、抗除草剂转基因玉米的获得及遗传研究 被引量:22
7
作者 朱常香 宋云枝 +3 位作者 张杰道 温孚江 梁新明 汤国民 《山东农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2002年第2期120-125,共6页
利用PIG基因枪 ,将cryIA(b)基因和bar基因 ,采用共转化法导入玉米自交系的幼胚中 ,经PPT筛选 ,获得抗性愈伤组织并再生植株。除草剂抗性检测、点杂交和Southern杂交分析表明 ,在多数转基因植株中cryIA(b)基因和bar基因共整合 ,且呈孟德... 利用PIG基因枪 ,将cryIA(b)基因和bar基因 ,采用共转化法导入玉米自交系的幼胚中 ,经PPT筛选 ,获得抗性愈伤组织并再生植株。除草剂抗性检测、点杂交和Southern杂交分析表明 ,在多数转基因植株中cryIA(b)基因和bar基因共整合 ,且呈孟德尔单位点显性基因连锁遗传。Northern杂交及ELISA检测表明 ,cryIA(b)基因在转录和翻译水平进行了有效的表达。 展开更多
关键词 抗性试验 遗传性 抗虫性 抗性愈伤组织 再生植株 转基因 玉米
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用绿色荧光蛋白进行转基因蚕研究 被引量:12
8
作者 赵昀 张峰 +4 位作者 陈秀 徐安英 冯晓黎 黄君霆 陆长德 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1999年第6期16-19,共4页
绿色荧光蛋白(GreenFluorescentProtein,GFP)基因用基因枪和压力渗透法导入蚕卵,它的表达由家蚕核多角体病毒(BmNPV)的即刻早期(immediatelyearlystage,IE)蛋白基因启... 绿色荧光蛋白(GreenFluorescentProtein,GFP)基因用基因枪和压力渗透法导入蚕卵,它的表达由家蚕核多角体病毒(BmNPV)的即刻早期(immediatelyearlystage,IE)蛋白基因启动子控制。在紫外灯下能观察到少数5龄幼虫身上显示绿色荧光斑点,PCR实验证实部分蚕染色体DNA中含有GFP基因。 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白 转基因蚕 基因枪 压力渗透法
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基因枪转化玉米愈伤组织参数的优化 被引量:9
9
作者 贾炜珑 杨丽莉 +2 位作者 周小梅 王景雪 孙毅 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2001年第4期77-80,共4页
以玉米愈伤组织为受体 ,借助GUS基因的短暂表达 ,优化了PDS 10 0 0 /He型基因枪和自制基因枪的基因枪转化参数。PDS 10 0 0 /He型基因枪转化玉米愈伤组织的最佳轰击参数为 135 0psi压力 ,2 5In·Hg真空度 ,6cm射击距离。自制基因枪... 以玉米愈伤组织为受体 ,借助GUS基因的短暂表达 ,优化了PDS 10 0 0 /He型基因枪和自制基因枪的基因枪转化参数。PDS 10 0 0 /He型基因枪转化玉米愈伤组织的最佳轰击参数为 135 0psi压力 ,2 5In·Hg真空度 ,6cm射击距离。自制基因枪转化玉米愈伤组织的最佳轰击参数为0 6MPa 。 展开更多
关键词 玉米 愈伤组织 基因枪 GUS基因短暂表达率 GUS基因短暂表达单位 轰击参数 优化
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基因枪轰击不同剂量小鹅瘟病毒VP3基因疫苗在雏鹅体内的动态分布 被引量:6
10
作者 黎敏 程安春 +5 位作者 汪铭书 韩新锋 刘晓东 卢菲 车茜 陈孝跃 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1204-1210,共7页
本文开展了检测小鹅瘟病毒(GPV)VP3基因的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法的建立和基因枪轰击不同剂量(1、3和6μg)GPV-VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)在30日龄四川白鹅体内(心、肝、脾、肺、肾、法氏囊、胸腺、哈氏腺、十二指肠、空肠、回肠... 本文开展了检测小鹅瘟病毒(GPV)VP3基因的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法的建立和基因枪轰击不同剂量(1、3和6μg)GPV-VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)在30日龄四川白鹅体内(心、肝、脾、肺、肾、法氏囊、胸腺、哈氏腺、十二指肠、空肠、回肠、直肠、盲肠、胰腺、血液、脑及注射部位皮肤)分布规律的研究。结果表明:①建立的FQ-PCR特异性强、灵敏度高、重复性好,核酸模板数与FQ-PCR测定的Ct值相关系数达到0.999,具有很好的直线相关性;②pcDNA-GPV-VP3各剂量免疫雏鹅1 h即可在各组织中检测到,其中注射部位含量最高,肝、肾、淋巴器官(脾、法氏囊、胸腺、哈氏腺)含量较高;③到免疫后217 d时,1μg组免疫雏鹅各个组织器官内仍检测到pcDNA-GPV-VP3的存在,但多数组织器官中的含量比1 h时约少了4个数量级,其中免疫部位减少了7个数量级;④血液中pcDNA-GPV-VP3的含量较少,且免疫后1 h^217 d各时间点的差异不显著(P≥0.05);⑤不同剂量pcDNA-GPV-VP3免疫雏鹅各组织中的含量呈现的总体规律为6μg组>3μg组>1μg组,但差异不显著(P≥0.05)。因此,FQ-PCR是定量检测pcDNA-GPV-VP3在免疫雏鹅体内含量的可靠方法,pcDNA-GPV-VP3免疫雏鹅后1 h时可分布至雏鹅体内各组织器官中并持续存在217 d以上。 展开更多
关键词 FQ-PCR pcDNA-GPV-VP3 基因枪 雏鹅 动态分布
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基因枪注射BALB/c小鼠制备Graves病模型 被引量:5
11
作者 余毅恺 张木勋 +2 位作者 胡蜀红 林梅 帅红霞 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期737-741,共5页
目的:探讨基因枪注射和普通质粒肌肉注射两种不同方法对甲亢动物模型的差异。方法:将45只小鼠随机分成4组,分别用基因枪金颗粒包裹质粒免疫、普通质粒肌肉注射免疫。加强免疫后第4周后处死小鼠,RIA法测定血清FL、FT4、TSH水平。RIA... 目的:探讨基因枪注射和普通质粒肌肉注射两种不同方法对甲亢动物模型的差异。方法:将45只小鼠随机分成4组,分别用基因枪金颗粒包裹质粒免疫、普通质粒肌肉注射免疫。加强免疫后第4周后处死小鼠,RIA法测定血清FL、FT4、TSH水平。RIA法测定血清与hTSHR-CHO孵育后上清cAMP浓度以计算TRAb活性,RIA法测定脾脏培养后IL-4的浓度,ELISA法测定血清TSAb浓度,取甲状腺做石蜡HE切片观察组织学变化。结果:基因枪免疫组(GGI)动物4周后血清FT4(0.34±0.11)pg/ml高于质粒肌肉注射组(PLS)(0.21±0.06)pg/ml和基因枪免疫空质粒组(GG0)(0.17±0.08)pg/ml(F=14.34,P=0.002)。GGI组TRAb活性(167.27±117.37)%高于PLS组(113.81±65.50)%和GG0组(98.27±14.80)%(Hc=35.198,P=0.007)。GGI组脾脏培养上清液IL-4产量(0.244±0.092)pmol/L明显高于PLS组(0.173±0.039)pmol/L和GG0组(0.151±0.041)pmol/L(F=7.0403,P=0.005)。GGI组TRAb浓度(29.3±1.2)U/L明显高于GG0组(13.3±0.2)U/L(F=9.02,P〈0.001),但和PLS组(24.3±0.9)U/L比无显著性差异(q=-1.32,P=0.423)。HE切片观察造模成功小鼠甲状腺滤泡细胞高柱状排列,未出现甲状腺细胞破坏甲状腺炎的嗜酸性变。结论:基因枪免疫雌性BALB/c鼠是一种可行的复制Gmves动物模型,在免疫第2~4周可以观察到FT4升高和自身抗体改变等理想的免疫效果。 展开更多
关键词 TRAB 基因枪 GRAVES病 动物模型
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基因枪法获得转cry1Ac基因甘蔗的研究 被引量:6
12
作者 高世武 郭晋隆 +2 位作者 许莉萍 陈如凯 傅华英 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期142-148,共7页
根据定向克隆原则,以pGreenⅡ0229为载体骨架,cry1Ac为目的基因,bar为筛选标记基因,构建了大小为8602bp的植物表达载体pUBCG0229-cry1Ac。酶切结果表明,构建的载体pUBCG0229-cry1Ac结构完全正确。用基因枪轰击法将pUBCG0229-cry1Ac质粒... 根据定向克隆原则,以pGreenⅡ0229为载体骨架,cry1Ac为目的基因,bar为筛选标记基因,构建了大小为8602bp的植物表达载体pUBCG0229-cry1Ac。酶切结果表明,构建的载体pUBCG0229-cry1Ac结构完全正确。用基因枪轰击法将pUBCG0229-cry1Ac质粒DNA转化甘蔗(Saccharum Complex)品种福农95-1702和桂糖94-119的胚性愈伤组织,使用PPT(phosphinothricin)对轰击后的材料进行继代、分化和生根筛选,移栽成活后使用Basta溶液喷洒进行初步筛选,共获得86株抗性植株,通过PCR检测、Dot-Southern检测及PCR产物测序,证明已将cry1Ac基因整合到其中22株甘蔗基因组中。 展开更多
关键词 甘蔗 CRY1AC基因 BAR基因 遗传转化 基因枪 抗螟虫
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叶绿体遗传转化:植物导入外源基因的新途径 被引量:11
13
作者 张景昱 张中林 +1 位作者 苏宁 宋艳茹 《植物学通报》 CSCD 北大核心 2001年第3期288-294,共7页
叶绿体转化系统 ,独立于传统的核转化 ,为植物导入外源基因提供了新途径。它有如下优点 :超量表达目的基因 ;以定点整合方式导入外源基因从而消除了位置效应及基因沉默 ;具原核表达方式 ,能以多顺反子的形式表达多个基因 ;母系遗传方式... 叶绿体转化系统 ,独立于传统的核转化 ,为植物导入外源基因提供了新途径。它有如下优点 :超量表达目的基因 ;以定点整合方式导入外源基因从而消除了位置效应及基因沉默 ;具原核表达方式 ,能以多顺反子的形式表达多个基因 ;母系遗传方式可防止基因扩散 ;基因产物区域化并能提供适于某些产物发挥功能的小环境等。随着这项技术在越来越多的领域发挥作用 ,其优越性逐渐得到认同。本文着重对此技术的特点、发展及应用作一综述。 展开更多
关键词 叶绿体转化 基因枪转化法 定点整合 植物 外源基因
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利用Bt基因和Xa21基因转化获得抗螟虫、白叶枯病的转基因水稻 被引量:6
14
作者 王爱菊 姚方印 +5 位作者 温孚江 朱常香 李广贤 杨磊 朱其松 张洪瑞 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期857-860,共4页
利用水稻的愈伤组织作受体 ,采用 PIG基因枪法 ,首先成功地将 Bt基因 [cry IA(b) ]连同抗除草剂 bar基因导入栽培水稻品种中国 91,选育出纯合稳定的株系 T91系。然后将 T91系与黄淮区主栽品种豫粳 6号杂交 ,并辅以标记基因选择 ,选育出... 利用水稻的愈伤组织作受体 ,采用 PIG基因枪法 ,首先成功地将 Bt基因 [cry IA(b) ]连同抗除草剂 bar基因导入栽培水稻品种中国 91,选育出纯合稳定的株系 T91系。然后将 T91系与黄淮区主栽品种豫粳 6号杂交 ,并辅以标记基因选择 ,选育出纯合稳定、综合性状优良的转 Bt基因株系 C48。利用农杆菌介导的转化系统将 X a2 1基因转入 C48,根据标记基因测定 ,转基因植株的 PCR和 Southern分析 ,田间抗病虫性鉴定 ,获得了双抗 (螟虫、白叶枯病 ) 展开更多
关键词 BT基因 XA21基因 螟虫 白叶枯病 水稻 遗传转化 基因枪
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鹅细小病毒VP3基因疫苗两种不同免疫方式对细胞免疫的影响 被引量:5
15
作者 车茜 程安春 +5 位作者 汪铭书 黎敏 韩新锋 卢菲 刘晓东 陈孝跃 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期401-405,共5页
将构建的鹅细小病毒(GPV)VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)转染鹅胚成纤维细胞(GEF),每隔12h检测VP3蛋白的表达情况,同时以不同剂量分别通过基因枪轰击和肌肉注射免疫28日龄健康雏鹅,于免疫后第3、7、14、21、28、35、49、63、77和1... 将构建的鹅细小病毒(GPV)VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)转染鹅胚成纤维细胞(GEF),每隔12h检测VP3蛋白的表达情况,同时以不同剂量分别通过基因枪轰击和肌肉注射免疫28日龄健康雏鹅,于免疫后第3、7、14、21、28、35、49、63、77和105d采血,进行淋巴细胞增殖试验(MTT法)。结果,转染后第24h即可在GEF中检测到GPVVP3蛋白,第60h表达量达到高峰。试验组鹅外周血T淋巴细胞D490nm值在免疫后第35d达到最大。肌肉注射组和基因枪组免疫后第14~63d、第7~63d的D490nm值分别与PBS对照组差异板显著;肌肉注射组及基因枪组免疫后第21~49d的D490nm值显著高于弱毒疫苗对照组;肌肉注射组及基因枪组免疫后第14~63d的D490nm值板显著高于空质粒对照组。表明,基因枪轰击和肌肉注射pcDNA—GPV—VP3均能诱导雏鹅产生良好的细胞免疫应答。 展开更多
关键词 鹅细小病毒VP3基因疫苗 细胞免疫 基因枪轰击 肌肉注射
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玉米优良自交系转基因受体系统建立及转化后的筛选与再生 被引量:27
16
作者 付凤玲 张莉萍 朱祯 《四川农业大学学报》 CSCD 2000年第2期97-99,共3页
通过对培养基和培养条件的筛选和改进 ,提高了诱导玉米优良自交系幼胚产生胚性愈伤组织 ,建立转基因受体系统的效率。通过比较试验 ,确定了潮霉素筛选的浓度和方法。PCR检测证明 ,目的基因已整合到玉米基因组中。
关键词 玉米 优良自交系 转基因受体系统 基因枪 潮霉素
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外源钾通道基因在水稻中的表达及其钾吸收特征研究 被引量:25
17
作者 施卫明 王校常 +5 位作者 严蔚东 汤利 安志装 何锶洁 田文忠 曹志洪 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期375-378,共4页
通过基因枪导入法 ,将外源钾通道基因导入水稻中花 8号、中花 9号、中花 13以及 870 6中表达 ,获得了转基因植株。经 PCR和 Southern检测 ,共获得 4 2个表达了钾通道基因的转基因株系。通过二代的筛选并获得了部分株系的纯合系。转基因... 通过基因枪导入法 ,将外源钾通道基因导入水稻中花 8号、中花 9号、中花 13以及 870 6中表达 ,获得了转基因植株。经 PCR和 Southern检测 ,共获得 4 2个表达了钾通道基因的转基因株系。通过二代的筛选并获得了部分株系的纯合系。转基因植株对钾的吸收累积试验表明 ,与对照相比 ,供试转基因株系的吸钾速率和对钾的累积能力都有明显提高。研究表明钾离子通道在植物体内的表达也能改良植物的钾素营养性状。同时也表明植物营养遗传工程与植物的抗病。 展开更多
关键词 外源钾通道基因 水稻 钾吸收特征 甲通道基因
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非病毒基因递送技术研究进展 被引量:7
18
作者 李鹏 尚明美 宋海峰 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期809-814,共6页
基因递送是生物学和医学研究中一项重要且常用的技术,分为病毒感染法和非病毒转染法两大类。病毒载体具有较高转染效率,但产生不良反应等缺陷限制了其应用。非病毒载体具有低细胞毒性、低免疫原性、生物相容性好、可以生物降解等优点,... 基因递送是生物学和医学研究中一项重要且常用的技术,分为病毒感染法和非病毒转染法两大类。病毒载体具有较高转染效率,但产生不良反应等缺陷限制了其应用。非病毒载体具有低细胞毒性、低免疫原性、生物相容性好、可以生物降解等优点,而且不受基因大小的限制,具有很好的应用前景,但转染效率不高是其主要的瓶颈,目前研究人员正致力于寻找和开发高效率的非病毒转染方法。文中阐述了几种主要的生化转染法(阳离子多聚物、阳离子脂质体、磷酸钙)及物理转染法(电穿孔、超声/微气泡、显微注射和基因枪)的原理、优缺点以及研究进展。 展开更多
关键词 基因递送 非病毒载体 阳离子多聚物 阳离子脂质体 磷酸钙 电穿孔 超声 显微注射 基因枪
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植物瞬时表达技术的主要方法与应用进展 被引量:24
19
作者 赵文婷 魏建和 +1 位作者 刘晓东 高志晖 《生物技术通讯》 CAS 2013年第2期294-300,共7页
瞬时表达技术是一种获得目的基因短暂的高水平表达的技术。与稳定表达相比,瞬时表达所需时间短,但因未将外源基因整合到宿主植物染色体中,不能稳定遗传给下一代。我们简要综述了植物瞬时表达技术的各种方法,介绍了各方法的原理、技术流... 瞬时表达技术是一种获得目的基因短暂的高水平表达的技术。与稳定表达相比,瞬时表达所需时间短,但因未将外源基因整合到宿主植物染色体中,不能稳定遗传给下一代。我们简要综述了植物瞬时表达技术的各种方法,介绍了各方法的原理、技术流程、影响因素及其应用。关于其应用,主要分析了生物制剂的合成、转录元件和转录因子的克隆与分析、基因沉默、亚细胞定位、蛋白互作分析、抑制子功能鉴定、选择性剪接调控、植物品种的改良和选育等方面。 展开更多
关键词 瞬时表达 基因枪 农杆菌 聚乙二醇 植物病毒载体
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基因枪介导人精子顶体膜相关蛋白32基因疫苗在小鼠骨骼肌中的表达 被引量:3
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作者 臧卫东 陈雪梅 +2 位作者 任秀花 石冰涛 郝莉 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2006年第5期867-870,共4页
目的:观察pcDNA3.1(+)-人精子顶体膜相关蛋白32(hSAMP32)基因疫苗经基因枪介导肌肉接种后在小鼠体内的表达。方法:BALB/c雌性小鼠6只,实验组鼠(4只)经后腿股内侧肌以基因枪多点注射重组质粒pcDNA3.1(+)-hSAMP325μg,空载体对照组(1只)注... 目的:观察pcDNA3.1(+)-人精子顶体膜相关蛋白32(hSAMP32)基因疫苗经基因枪介导肌肉接种后在小鼠体内的表达。方法:BALB/c雌性小鼠6只,实验组鼠(4只)经后腿股内侧肌以基因枪多点注射重组质粒pcDNA3.1(+)-hSAMP325μg,空载体对照组(1只)注射pcDNA3.1(+)载体5μg,空白对照组(1只)注射无菌生理盐水200μl。接种后第7d取小鼠股内侧肌注射部位肌肉,RT-PCR和原位杂交法检测目的基因mRNA的表达,以自制抗血清进行免疫组织化学染色检测目的基因蛋白的表达。取小鼠心、肝、脾、脑、肾、胚胎组织,PCR扩增,行基因疫苗的安全性检测。结果:RT-PCR和原位杂交检测结果显示实验组小鼠注射部位肌肉组织有目的基因及其蛋白的表达,对照组未见表达。实验组小鼠心、肝、脾、脑、肾、胚胎的基因组DNA均未扩增出目的基因条带,说明外源性基因没有整合到宿主染色体。结论:该基因疫苗可在小鼠骨骼肌内有效、安全地表达。 展开更多
关键词 hSAMP32 基因疫苗 基因枪 骨骼肌 避孕
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