动物乳汁“人源化”的研究进展

动物乳腺生物反应器通过转基因技术将外源基因导入动物基因组中并定位表达于动物乳腺,进而利用动物乳腺天然、高效合成并分泌蛋白的能力,在动物乳汁中生产具有重要价值的产品,尤其是一些人源化蛋白。这项技术具有成本低、质量高、生物活性高、无污染、产量高等优点,开创了生物制药的新途径,发展前景广阔。本文主要对动物乳汁“人源化”在生物制药领域和改善乳成分方面的研究进展及应用前景进行综述和展望。

动物乳腺生物反应器的现状和趋势

利用转基因家畜的乳腺生产人类重组蛋白 ,可以高效获得安全、足量的药用蛋白。本文针对乳腺生物反应器的成功研制 ,从目的基因的选择、载体构建、转基因技术等方面探讨了动物乳腺生物反应器的研究现状。分析了提高转基因效率和外源蛋白表达水平的技术途径 ,提出了降低总体成本的战略措施。特别探讨了利用Cre loxP系统发展“体细胞打靶 体细胞核移植技术体系” 。

乳腺生物反应器的研究现状和产业化前景

转基因动物乳腺生物反应器是伴随转基因动物技术而发展起来的一项高新生物技术。利用这项技术,我们可以从动物乳汁中源源不断地获取用于医疗或保健目的的有生物活性的基因产物。这是一种全新的蛋白质生产模式,它将成为许多国家的重要支柱产业之一。本文介绍了乳腺生物反应器的基本概念和基本原理;概述了制备过程中的目的基因选择、载体构建、转基因等技术环节的研究现状;分析了乳腺生物反应器的优势及存在的问题,并就其产业化前景进行了展望。

ht-PAm基因在山羊β-酪蛋白基因座定位整合的研究

利用体细胞基因打靶与核移植技术制备动物乳腺生物反应器是当今转基因定位整合表达的一种新技术。分别克隆山羊的 β_酪蛋白基因 5′调控区的 6 3kb片段 ,外显子 7、外显子 8和 9三个基因片段 ,并与克隆的人tPA突变体cDNA一起构建了含有neo和tk正负筛选标记基因的 β_酪蛋白基因打靶载体PGBC4tPA,并验证了neo基因、tk基因以及Cre_LoxP系统的有效性。将线性化的PGBC4tPA通过电转染整合到山羊胎儿成纤维细胞基因组中 ,利用G4 18和GANC进行抗性细胞克隆的药物筛选 ,初步获得抗性细胞克隆 2 4 4个 ,PCR检测后获得阳性细胞克隆 31个 ,其中初步验证 2个细胞克隆转植基因整合位点重组后的基因序列正确 ,并且该细胞克隆能够有效扩增。这为下一步基因打靶体细胞核移植制备山羊乳腺生物反应器奠定了基础。

利用多重筛选机制提高山羊乳腺上皮细胞基因打靶的效率

构建了山羊β 酪蛋白基因座基因打靶载体pGBC GFP neo,载体包含了正负筛选标记基因neo和tk,以及无启动子的GFP基因。打靶载体线性化后用脂质体包裹转染山羊乳腺上皮细胞,利用G418和GANC进行抗性细胞克隆的药物筛选,共得到抗性细胞克隆 51个,对抗性克隆利用激素诱导β 酪蛋白基因启动子指导GFP表达,得到GFP表达阳性细胞克隆 17个,对其中 4个生长状态良好的克隆PCR检测验证后用于核移植,克隆胚发育率为 59 5%,部分发育到桑椹胚或囊胚。

体细胞基因打靶制备动物乳腺生物反应器的策略与应用

在转基因动物研究中 ,由于基因表达调控元件的人工拼接和外源基因在动物基因组中随机整合所带来的“位置效应” ,致使转基因动物外源基因的表达水平不高并且差异较大。为此 ,利用定位整合优势 ,对以基因同源重组为基础的基因打靶技术进行了大量研究。介绍了就利用体细胞基因打靶和核移植技术制备动物乳腺生物反应器的策略和应用情况做一综述 ,并对提高基因打靶效率的各种策略 ,打靶细胞的选择 ,转基因细胞核移植的低融合事件以及基因打靶制备乳腺生物反应器的优越性进行分析。

利用动物乳腺生物反应器生产药用蛋白

动物乳腺生物反应器是利用动物乳腺特异性启动子调控元件指导外源基因在乳腺中特异性表达 ,并从转基因动物奶液中获取重组蛋白。应用动物乳腺生物反应器生产药用蛋白具有生产方式简单 ,产量大 ,蛋白能进行翻译后修饰等优点 ,是具有广阔前景的生物医药产业。本文仅就动物乳腺生物反应器的建立、检测、目的蛋白的分离纯化以及存在的问题等作一综述。

基因打靶方法制备乳腺生物反应器

基因打靶技术制备乳腺生物反应器 ,克服了显微注射法的众多缺陷 ,并随着第一例基因打靶家畜的诞生而成为这一研究领域的热点。本文从制备乳腺生物反应器过程中基因打靶策略、打靶细胞到打靶位点的选择等各个方面 ,详细分析了其中的技术难点、解决问题的对策、国内外研究进展以及应用前景。

乳腺生物反应器的研究和产业化进展

随着转基因技术的发展,利用乳腺生物反应器生产珍贵药用蛋白已成为一种极具潜力的生物技术,它为商业化前景广阔的药用蛋白提供了高产量、低成本的生产方式,开创了基因工程制药的新途径。目前,应用乳腺生物反应器已表达百余种药用蛋白,其中近30种进入临床试验不同阶段,用于治疗抗凝血酶缺乏症的抗凝血酶Ⅲ(ATryn)已上市,乳腺生物反应器生产重组蛋白显示出广阔的产业化前景。作者概述了乳腺生物反应器的原理、优点、国内外研究进展和产业化进程,讨论了其目前存在问题和应对策略。

小鼠β-酪蛋白基因序列调控人-tPA突变体基因在小鼠乳腺的表达

为验证克隆的小鼠 β -酪蛋白基因序列调控外源基因表达的能力 ,将人t PA突变体基因的信号肽 -前肽编码序列用小鼠 β -酪蛋白的信号肽编码序列替换 ,人t PA突变体成熟肽cDNA融合到小鼠 β -酪蛋白基因的第 2外显子中 ,从而构建成旨在应用小鼠 β -酪蛋白基因序列调控人t PA突变体基因在小鼠乳腺中表达的载体。融合基因经显微注射至小鼠的受精卵中 ,2 85枚注射的受精卵移植到 13只受体小鼠。经PCR和Southern杂交鉴定 ,4 2只出生小鼠中有 12只为转基因阳性鼠。 7只转基因阳性鼠乳汁中表达人t PA突变体 ,最高表达水平为 3.6 5 93μg/ml,证明小鼠 β-酪蛋白基因序列能够调控人t PA突变体基因在转基因小鼠的乳汁中表达出具有生物活性的人t PA突变体 ,为进一步制备人t PA突变体基因敲入小鼠模型提供了理论和实验依据。

动物乳腺生物反应器研究进展

针对利用动物乳腺生物反应器技术生产重组蛋白,具有生产效率高和经济效益明显的特点。综述了制备乳腺生物反应器时表达载体构建和基因转移两个关键环节的研究现状,并就基因打靶和体细胞克隆技术的结合探讨了乳腺生物反应器的发展趋势。

动物乳腺生物反应器研究进展

动物乳腺生物反应器拥有巨大的开发价值,利用转基因家畜的乳腺生产人类重组蛋白,可以获得安全而有效的药用蛋白。在此,在阐述乳腺生物反应器概念的基础上,探讨了乳腺生物反应器医用蛋白产品、载体构建以及转基因技术等方面的研究现状,并指出了乳腺生物反应器存在的主要问题,展望了发展前景,特别是指出了利用体细胞克隆技术生产乳腺生物反应器的优势及可能性。

乳腺生物反应器的产业化进展与展望

进入21世纪,伴随着转基因技术的快速发展,转基因动物的研究已经从方法学研究步入了应用性研究阶段。外源基因在转基因动物的特异性表达,尤其是在乳腺的表达,可将转基因动物用作生物反应器进行生物活性蛋白的生产而应用于商业生产。生产出来的药用蛋白具有纯化简单,投资少,成本低,对环境没有任何污染等优点。用转基因动物生产药用蛋白可获得巨大的经济利益,因此成为国内外研究的热点。

转基因动物乳腺生物反应器研究进展

转基因动物乳腺生物反应器是利用动物乳腺特异性启动子调控元件指导外源基因在乳腺中特异性表达 ,并从转基因动物乳汁中获取重组蛋白。近年来 ,生物学和分子生物学研究领域的成就促进了该技术的蓬勃发展 ,并在生产药用蛋白领域展现出广阔前景。本文简要概述了转基因动物乳腺生物反应器的基本概念、原理、特点及应用 ,并重点阐述其研究现状及前景 。

转基因克隆动物的发展及其应用

转基因克隆动物是在获得转基因细胞系的基础上进行克隆,生产具有特定性状、特别功能或者一定目的的克隆动物群,是转基因动物技术与克隆动物技术的有机结合。论文针对转基因克隆动物的发展,及其在异种器官移植、抗病育种和乳腺生物反应器方面的应用,存在的问题与安全性评价等方面做了较系统的阐述,并预测了转基因克隆动物应用的发展前景及其给社会带来的深远影响。

人组织型纤溶酶原激活剂牛乳腺生物反应器的研究

目的构建组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)乳腺定位表达载体,使其在牛乳汁中高效表达,从而建立牛乳腺生物反应器。方法RT-TD-PCR法克隆目的基因,通过酶切、连接、分离、纯化等方法构建含t-PA-cDAN的乳腺定位表达载体;采用显微注射法和乳腺注射法将融合基因转入小鼠的受精卵和小鼠及牛的乳腺组织中。结果显微注射法和乳腺注射法转基因后,t-PA可在小鼠和牛的乳汁中表达。结论所构建的乳腺定位表达载体可有效地使t-PA基因在小鼠和牛乳汁中表达,t-PA基因的表达不受转基因方法的影响,但t-PA在牛乳汁中的表达量明显高于小鼠的表达量,提示不同动物的乳蛋白调控系统有一定的差异,可能受着不同的因素或调控系统的影响。

动物乳腺生物反应器研究进展

介绍了动物乳腺生物反应器的优点,论述了其研究及应用概况,并对其发展趋势进行了展望。

核移植技术生产乳腺生物反应器的研究进展

乳腺生物反应器的研制带来了转基因制药业的兴起。但十几年来 ,显微注射技术一直是生产乳腺生物反应器的唯一实用手段 ,由于它本身固有的缺点 ,使得乳腺生物反应器未能有长足的进步。基因打靶与核移植相结合很可能成为生产乳腺生物反应器更有效的途径 ,它在外源基因定点整合 ,消除位点效应、降低生产成本、节省时间方面具有明显的优势。

外源基因在转基因动物乳腺中的特异性表达研究

动物基因工程研究最大的突破就是转基因动物研究的进展．自八十年代初第一批转基因小鼠问世以来，转基因动物的研究已从方法学研究步入了应用性研究阶段．转基因动物除作为研究工具广泛地应用于发育生物学、免疫学、遗传学以及医学等生命科学领域外，外源基因在转基因动物的特异性表达，尤其是在乳腺的表达，又可将转基因动物用作生物反应器进行生物活性蛋白的生产而应用于商业生产．在转基因动物乳腺的特异性表达研究中，寻找乳蛋白基因调控构件是非常必要的，特别是获得高效而稳定表达的基因调控构件更为重要．迄今为止，已获得了多种乳蛋白基因调控构件．在这些构件的指导下从转基因动物乳汁中生产了不同的人体非乳蛋白，且都具有生物活性．

转基因动物研究进展

转基因动物是现代生物技术中一个极其重要的研究领域,目前已经有转基因小鼠、兔、绵羊、山羊、猪、牛、鸡和鱼等多种转基因动物问世。本文综述了转基因动物的制作方法、转基因动物的应用研究以及所取得的重要成就,并指出了转基因动物存在的主要问题,展望了其发展前景。