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携带人livin α基因腺病毒载体的构建及其在树突状细胞的表达
被引量:
1
1
作者
谢军平
李环羽
+3 位作者
高亭
王石生
颜春松
况九龙
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第6期493-496,511,共5页
目的:本研究旨在利用AdMax系统构建携带人抗凋亡基因livinα的重组腺病毒载体(rAd-livinα),并感染树突状细胞(Dendritic cells,DCs),制成DCs疫苗,为下一步用此疫苗抗肿瘤实验奠定基础。方法:以质粒pIRES2-EGFP-livinα为模板,通过PCR...
目的:本研究旨在利用AdMax系统构建携带人抗凋亡基因livinα的重组腺病毒载体(rAd-livinα),并感染树突状细胞(Dendritic cells,DCs),制成DCs疫苗,为下一步用此疫苗抗肿瘤实验奠定基础。方法:以质粒pIRES2-EGFP-livinα为模板,通过PCR扩增出人livinα基因cDNA序列,再将livinα基因cDNA亚克隆于穿梭质粒pDC316-EGFP-cmv,获得重组质粒pDC316-EGFP-cmv-livinα。将鉴定后的重组穿梭质粒pDC316-EGFP-cmv-livinα与腺病毒辅助质粒pBHGlox(delta)E1,3Cre共转染HEK293细胞,同源重组获得重组腺病毒rAd-livinα。用重组腺病毒rAd-livinα感染人DCs后,Western blot方法分析livinα蛋白表达,流式细胞仪检测DCs的表型变化。结果:在HEK293细胞内能观察到重组腺病毒rAd-livinα绿色荧光蛋白的表达。rAd-livinα经PCR鉴定特异性地扩增出符合预期大小的片段。rAd-livinα感染的DCs中可检测到livinα蛋白的表达,并且感染的DCs与未感染DCs比较,可明显提高了细胞表面分子CD83、CD86和HLA-DR的表达(P<0.05)。结论:通过AdMax系统成功构建了重组腺病毒rAd-livinα,使livinα蛋白有效表达于DCs中,并且重组腺病毒感染的DCs的成熟度得到提高。
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关键词
基因转移
livin
α
重组腺病毒
增强的绿色荧光蛋白
树突状细胞
下载PDF
职称材料
增强型绿色荧光蛋白基因转染小鼠骨髓间充质干细胞的研究
被引量:
5
2
作者
宁昌
胡锴勋
余长林
《中国美容医学》
CAS
2011年第2期257-260,共4页
目的:以重组腺病毒(Ad)为载体,将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因转染至小鼠骨髓间充质干细胞(mMSCs)中,为MSCs体内示踪提供实验基础。方法:用全骨髓细胞贴壁法分离纯化小鼠MSCs并体外扩增、鉴定,以重组绿色荧光蛋白基因的腺病毒(Ad-EGFP...
目的:以重组腺病毒(Ad)为载体,将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因转染至小鼠骨髓间充质干细胞(mMSCs)中,为MSCs体内示踪提供实验基础。方法:用全骨髓细胞贴壁法分离纯化小鼠MSCs并体外扩增、鉴定,以重组绿色荧光蛋白基因的腺病毒(Ad-EGFP)转染,并用荧光显微镜和流式细胞仪检测转染率,CCK-8法检测转染细胞的增殖活性。结果:转染后10h MSCs开始表达荧光,6~8天达高峰,转染率可达92.3%,28天仍有表达;转染细胞的增殖活性和未转染细胞无统计学差异。结论:Ad-EGFP能高效、安全的转染mMSCs。
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关键词
骨髓间充质干细胞
增强型绿色荧光蛋白
重组腺病毒
基因转染
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职称材料
题名
携带人livin α基因腺病毒载体的构建及其在树突状细胞的表达
被引量:
1
1
作者
谢军平
李环羽
高亭
王石生
颜春松
况九龙
机构
南昌大学第二附属医院呼吸内科
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第6期493-496,511,共5页
基金
国家自然科学基金资助(No.81160294)
文摘
目的:本研究旨在利用AdMax系统构建携带人抗凋亡基因livinα的重组腺病毒载体(rAd-livinα),并感染树突状细胞(Dendritic cells,DCs),制成DCs疫苗,为下一步用此疫苗抗肿瘤实验奠定基础。方法:以质粒pIRES2-EGFP-livinα为模板,通过PCR扩增出人livinα基因cDNA序列,再将livinα基因cDNA亚克隆于穿梭质粒pDC316-EGFP-cmv,获得重组质粒pDC316-EGFP-cmv-livinα。将鉴定后的重组穿梭质粒pDC316-EGFP-cmv-livinα与腺病毒辅助质粒pBHGlox(delta)E1,3Cre共转染HEK293细胞,同源重组获得重组腺病毒rAd-livinα。用重组腺病毒rAd-livinα感染人DCs后,Western blot方法分析livinα蛋白表达,流式细胞仪检测DCs的表型变化。结果:在HEK293细胞内能观察到重组腺病毒rAd-livinα绿色荧光蛋白的表达。rAd-livinα经PCR鉴定特异性地扩增出符合预期大小的片段。rAd-livinα感染的DCs中可检测到livinα蛋白的表达,并且感染的DCs与未感染DCs比较,可明显提高了细胞表面分子CD83、CD86和HLA-DR的表达(P<0.05)。结论:通过AdMax系统成功构建了重组腺病毒rAd-livinα,使livinα蛋白有效表达于DCs中,并且重组腺病毒感染的DCs的成熟度得到提高。
关键词
基因转移
livin
α
重组腺病毒
增强的绿色荧光蛋白
树突状细胞
Keywords
gene transfer; livin α; recombinant adenovirus; enhancer green fluorescent protein; dendritic cell
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
增强型绿色荧光蛋白基因转染小鼠骨髓间充质干细胞的研究
被引量:
5
2
作者
宁昌
胡锴勋
余长林
机构
军事医学科学院附属
出处
《中国美容医学》
CAS
2011年第2期257-260,共4页
文摘
目的:以重组腺病毒(Ad)为载体,将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因转染至小鼠骨髓间充质干细胞(mMSCs)中,为MSCs体内示踪提供实验基础。方法:用全骨髓细胞贴壁法分离纯化小鼠MSCs并体外扩增、鉴定,以重组绿色荧光蛋白基因的腺病毒(Ad-EGFP)转染,并用荧光显微镜和流式细胞仪检测转染率,CCK-8法检测转染细胞的增殖活性。结果:转染后10h MSCs开始表达荧光,6~8天达高峰,转染率可达92.3%,28天仍有表达;转染细胞的增殖活性和未转染细胞无统计学差异。结论:Ad-EGFP能高效、安全的转染mMSCs。
关键词
骨髓间充质干细胞
增强型绿色荧光蛋白
重组腺病毒
基因转染
Keywords
bone marrow mesenchymal stem
cell
s
enhanc
ed
green
fluorescent
protein
gene
recombinant
adenovirus
gene
transfection
分类号
R394.2 [医药卫生—医学遗传学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
携带人livin α基因腺病毒载体的构建及其在树突状细胞的表达
谢军平
李环羽
高亭
王石生
颜春松
况九龙
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
1
下载PDF
职称材料
2
增强型绿色荧光蛋白基因转染小鼠骨髓间充质干细胞的研究
宁昌
胡锴勋
余长林
《中国美容医学》
CAS
2011
5
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职称材料
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