CDA-G208A基因多态性对吉西他滨一线治疗肺鳞癌的疗效影响

目的:探讨CDA-G208A基因多态性对吉西他滨一线治疗肺鳞癌疗效和安全性的影响。方法:回顾性筛选皖南医学院第一附属医院收治的局部晚期或转移性肺鳞癌患者65例,其中G208A基因GG型组(A组)纳入进行CDA-G208A基因检测结果为GG(野生纯合型)患者31例,G208A基因状态未知组(B组)纳入未行检测患者34例,两组患者均接受“吉西他滨+铂类”方案化疗至少2个周期。参照RECIST 1.1标准和NCI-CTC 5.0标准评估疗效和安全性。主要研究终点为无进展生存期(PFS)、总生存时间(OS)。次要研究终点包括客观有效率(ORR)、疾病控制率(DCR)、不良反应和PFS的影响因素。结果:A组和B组DCR为74.5%和50%(P=0.045);A组和B组m PFS分别为6.1个月和5.0个月(P=0.034);A组和B组m OS分别为13.3个月和12.0个月(P=0.388);A组和B组出现Ⅲ-Ⅳ级中性粒细胞减少病例数分别为2例和10例(P=0.017);多因素分析发现Ⅲ-Ⅳ级中性粒细胞减少是影响患者PFS的独立预后因素(P=0.045);G208A基因状态未知组发生Ⅲ-Ⅳ级中性粒细胞的可能更大(P=0.029)。绘制ROC表明CDA-G208A基因的多态性对化疗导致的中性粒细胞减少预测的AUC=0.756。结论:CDAG208A基因非GG型可以通过减慢吉西他滨在体内的代谢率,造成化疗后中性粒细胞减少,严重情况可间接降低吉西他滨的临床疗效。治疗前检测CDA-G208A基因状态对吉西他滨化疗导致的中性粒细胞减少具有一定的预测作用。

应用MALDI-TOFMS检测5种白血病细胞株DCK和CDA基因部分单核苷酸多态性

目的:检测5种白血病细胞株中脱氧胞苷激酶(deoxycytidine kinase,DCK)和胞苷脱氨酶(cytidine deaminase,CDA)基因的单核苷酸多态性。方法:培养人红白血病细胞株K562,人慢性粒细胞白血病细胞株Ka,人急性髓系白血病细胞株HL-60、U937,人Burkkit淋巴瘤细胞株Raji。采用QIAamp DNA Blood Mini Kit提取基因组DNA,设计引物,PCR扩增相应目的片段,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOFMS)检测DCK基因A674G(rs111454937)、C1644T(rs72552079),CDA基因A79C(rs2072671)、G208A(rs60369023)的单核苷酸多态性。结果:5种细胞株DCK基因A674G(rs111454937)均为A/A纯合子型,C1644T(rs72552079)均为C/C纯合子型。HL-60、U937、Raji细胞株CDA基因A79C(rs2072671)为A/A纯合子,K562、Ka细胞株为C/A杂合子;5种细胞株CDA基因G208A(rs60369023)均为G/G纯合子型。结论:CDA基因的A79C(rs2072671)SNPs位点基因型在5株血液系统肿瘤细胞株中不尽相同,余所测3个SNPs位点基因型在各细胞株中均相同。

空间飞行对水稻CDA基因甲基化的诱变效应

为了研究空间飞行对植物CDA基因甲基化的影响,以第21颗返回式卫星搭载的水稻种子和地面对照为试验材料,采用亚硫酸盐处理测序的方法对水稻胞嘧啶脱氨基酶(RCDA)基因CpG簇以及第一外显子区域胞嘧啶甲基化进行检测。与地面对照相比,空间飞行导致RCDA基因第一外显子发生可遗传的高甲基化变化。半定量PCR检测显示空间飞行后RCDA基因表达水平下降。另外采用药物5-氮杂胞苷处理水稻使RCDA基因甲基化水平降低,同时检测到基因表达水平上升。结果说明,空间飞行能够对RCDA基因产生甲基化诱变效应,并且甲基化水平的变化与基因表达相关。本研究从表观遗传学角度探讨了空间飞行环境对植物诱变效应的机制。

阿糖胞苷代谢关键酶基因在儿童恶性血液肿瘤中的表达

目的通过检测儿童急性白血病(AL)及非霍奇金淋巴瘤(NHL)骨髓细胞内阿糖胞苷(Ara-C)代谢关键酶———脱氧胞苷激酶(DCK)和胞苷脱氨酶(CDA)的基因表达及酶活性水平,探索DCK和CDA表达与临床疗效的关系。方法共计31例患儿,其中初诊27例(ALL20例,AML3例,NHL4例),复发4例(ALL2例,AML、NHL各1例),采集患儿骨髓细胞,采用荧光定量PCR检测细胞内DCK、CDA基因表达,核素液闪法检测细胞内DCK、CDA酶活性,统计分析各组患儿的检测结果。结果 (1)DCK:ALL和NHL患儿DCK mRNA与酶活性水平均明显高于AML患儿(P<0.05);初治患儿均明显高于复发患儿(P<0.05);(2)CDA:AML和复发患儿的CDA酶活性水平明显高于ALL、NHL和初治患儿(P<0.05),但各组病例间的CDA mRNA表达差异无显著性(P>0.05)。(3)DCK和CDAmRNA表达与酶活性水平呈高度正相关。结论 AML以及某些复发的血液肿瘤患儿,其总体DCK酶活性及基因表达水平降低,CDA酶活性水平增高。DCK和CDA酶活性可能与儿童恶性血液肿瘤疗效相关。

尿多酸肽诱导乳腺癌细胞凋亡及相关基因表达的实验研究

目的:研究癌细胞分化诱导剂尿多酸肽(CDA-II)诱导乳腺癌细胞凋亡以及对凋亡抑制基因bcl-2表达的影响。方法:将CDA-II与不同生物学特性的乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231进行体外培养,同时以维甲酸为对照,观察CDA-II对乳腺癌细胞生长曲线、细胞凋亡、凋亡抑制基因bcl-2表达及形态学等方面的影响。结果:CDA-II可减缓两株乳腺癌细胞的生长和增殖能力,诱导乳腺癌细胞凋亡,减少乳腺癌细胞bcl-2表达。结论:CDA-II可抑制不同生物学特性的两株乳腺癌细胞的生长和增殖能力,诱导乳腺癌细胞凋亡,减少乳腺癌细胞bcl-2表达,为CDA-II治疗乳腺癌提供了一定的实验依据。

人肺腺癌A549细胞株上皮钙黏素基因甲基化及尿多酸肽干预的研究

目的探讨尿多酸肽(CDA-Ⅱ)对人肺腺癌A549细胞的作用,检测人肺腺癌A549细胞株抑癌基因上皮钙黏素(E-cadherin)甲基化状态及尿多酸肽对其干预的结果,寻找肺癌治疗的新靶点。方法检测不同浓度CDA-Ⅱ作用下,A549细胞的存活率(MTT法)及E-cadherin基因甲基化程度(甲基化特异PCR,MSP)。结果 CDA-Ⅱ抑制A549细胞生长;伴随CDA-Ⅱ剂量、作用时间增加,E-cadherin基因甲基化程度逐渐减弱(P<0.05)。结论 A549细胞存在部分甲基化,CDA-Ⅱ可使E-cadherin基因甲基化程度下降,且有剂量依赖性和时间依赖性。

尿多酸肽对高危组骨髓增生异常综合征细胞株p15^(INK4B)基因的去甲基化作用

目的探讨尿多酸肽(CDA-2)对高危组骨髓增生异常综合征(MDS)细胞株p15INK4B基因的去甲基化作用。方法检测不同浓度CDA-2作用下,MDS-RAEB细胞株MuTz-1的细胞存活率(MTT法);p15INK4B基因、甲基转移酶(DNMT1、DNMT3A、DNMT3B)基因mRNA表达(RT-PCR);p15INK4B基因甲基化程度(甲基化特异PCR,MSP)。结果CDA-2呈剂量依赖性抑制MuTz-1细胞生长;伴随CDA-2剂量增加,p15INK4B基因甲基化程度逐渐减弱,其mRNA表达逐渐增加;且CDA-2可显著降低MuTz-1细胞中DNMT1和DNMT3BmRNA的表达。结论CDA-2可能通过下调DNMT1和DNMT3BmRNA表达使p15INK4B基因甲基化程度下降,恢复其在细胞周期中的调节作用,进而抑制MDS细胞的过度增殖。

尿多酸肽对急性早幼粒细胞白血病细胞系凋亡作用的实验研究

目的探讨尿多酸肽(CDA-Ⅱ)对NB4、NB4-R1细胞的凋亡效应。方法应用细胞计数法、流式细胞术、DNA ladder实验、RT-PCR观察CDA-Ⅱ处理前后NB4、NB4-R1细胞生长增殖状况、凋亡情况及survivin基因表达的变化。结果实验组NB4、NB4-R1细胞生长、增殖均受到不同程度的抑制,细胞倍增时间延长。Annexin V联合PI法细胞早期凋亡实验检测结果显示,随着作用时间的延长,活细胞数量逐渐减少,加药24 h后细胞即明显凋亡,随后凋亡细胞进入死亡阶段,死亡细胞比例增加。DNA Ladder实验显示,加药96 h后DNA断裂片断明显增多。RT-PCR实验证明,随着加药时间的延长,survivin基因在mRNA水平上的表达渐弱。结论 CDA-Ⅱ可以通过降低survivin基因表达的途径达到促进NB4、NB4-R1细胞凋亡的目的 。

Lag-3基因rs870849多态性和CD_4基因rs2515733多态性与ITP易感性之间的联系

目的分析CD4基因rs2515733多态性和Lag-3基因rs870849多态性与特发性血小板减少性紫癜(ITP)易感性之间的关系。方法采用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)分析157例ITP患者和136例正常人的基因分型。结果CD4基因rs2515733多态性位点基因频率和Lag-3基因rs870849多态性位点基因频率在患者组与对照组之间无显著差异。结论ITP患者和正常人CD4基因rs2515733多态性和Lag-3基因rs870849多态性基因频率的分布类似,这两个基因的多态性与ITP易感性无关。

CDA基因多态性与晚期非小细胞肺癌患者含吉西他滨化疗疗效的研究

为了探讨胞苷脱氨酶(CDA)基因多态性与晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者含吉西他滨化疗疗效的关系。在试验中120例患者均接受含吉西他滨化疗,采用直接测学法检测化疗前CDA A79C和G208A的基因多态性,比较不同基因型与疗效的关系。结果表明CDA G208A位点中,基因型及等位基因与化疗有效率的差异无统计学意义,携带突变等位基因的基因型相对于野生型纯合子化疗无效的风险未升高(p=0.768);CDA A79C AA、AC、CC基因型的有效率依次为41.3%、20.0%和6.7%,A、C等位基因的有效率分别为37.8%和13.3%,差异均有统计学意义(p<0.05);以野生型AA型为参照,突变基因型AC和CC化疗无效的风险均升高,且C等位基因相对于A等位基因化疗无效的风险也升高,差异均有统计学意义(p<0.05)。CDA A79C多态性与化疗疗效有关,且携带突变等位基因患者化疗无效的风险较高,可以为临床个体化用药提供参考。

胞苷脱氨酶基因多态性与阿糖胞苷敏感性关系的研究

目的探讨人类胞苷脱氨酶（CDA）基因编码区单核苷酸多态性（cSNP）与儿童急性白血病（AL）患者阿糖胞苷（Ara—C）敏感性的关系。方法采集87例AL患儿骨髓及199例对照儿童的外周血，制备cDNA，采用变性梯度凝胶电泳及DNA测序进行CDA基因cSNP分析。将人类CDA基因分别转人大肠杆菌和酵母细胞，利用高效液相色谱分析确定不同等位型CDA的催化活性；应用生长抑制实验检测酵母转化体对Ara—C处理的敏感性。结果在对286例中国儿童进行CDA基因cSNP检测中发现了3个已知的cSNP，即79A／C（K27Q）、208G／A（A70T）和435T／C，其等位基因频率分别为12．1％、0．5％和76．2％。这些多态性与白血病的易感性无相关性。携带人类CDATOT的大肠杆菌转化体的胞苷及Ara—C脱氨活性分别较CDA70A降低53％和63％（P值均〈0．01），Ara-C对携带人类CDATOT的酵母转化体作用15h的细胞半数抑制浓度（IC50）值[（735±31）μmol／L]也显著低于Wt转化体[（973±61）μmol／L]（P〈0．05），降低25％。结论确定了中国人CDA基因中3种cSNP以及各自的基因型分布和等位基因频率。证实了一个人类CDA208A基因型，其对Ara—C的敏感性高于CDA208G基因型，提供了一个对脱氧胞苷同系物潜在敏感的亚群。