睾丸酮丛毛单胞菌的分离和鉴定及3α-羟类固醇脱氢酶在大肠杆菌中的克隆表达

目的:从自然界中分离鉴定产 3α 羟类固醇脱氢酶(3α hydroxysteroiddehydrogenase, 3α HSD)的睾丸酮丛毛单胞菌,并在大肠杆菌(E.coli.)中克隆表达 3α HSD。方法:将池塘泥浆样品接种到以雄酮为唯一碳源的培养基中,对分离到的菌株根据形态学和生理生化特征进行初步鉴定。为进一步鉴定该菌株,根据睾丸酮丛毛单胞菌中的 3α HSD的基因设计引物,PCR扩增细菌基因组DNA,将扩增片段插入到载体pET15b中,构建重组质粒pET15b,并在E.coli. BL21 (DE3 )pLysS中进行诱导表达,对表达得到的蛋白进行鉴定并测定其酶活力。结果:一系列生化反应和培养特征证实,该菌与睾丸酮丛毛单胞菌的符合率为 85%,最适生长pH值为 7. 0,最佳生长温度为 30℃。在E.coli. BL21 (DE3 )pLysS中经诱导表达得到了相对分子质量约为 29×103具有酶活性的融合蛋白,可催化雄酮(3α 羟类固醇)脱氢。结论:从池塘泥浆中分离到一株产 3α HSD的睾丸酮丛毛单胞菌,并在E.coli.中表达得到了具有酶活性的融合 3α HSD。这为利用金属螯和亲和层析纯化融合 3α HSD,并进一步建立以其为工具酶的血清总胆汁酸酶循环测定方法奠定了基础。

17β-羟基类固醇脱氢酶3基因插入/缺失与公猪睾丸表型性状关联研究

17β-羟基类固醇脱氢酶3(Hsd17b3)基因主要表达于哺乳动物睾丸间质细胞(LCs)中,是合成睾酮和维持雄性生殖功能的关键基因之一。为进一步推进猪产业的分子标记辅助育种,该研究探究Hsd17b3基因遗传变异位点与公猪睾丸表型性状的相关性,以期丰富该基因多态位点与公猪繁殖的遗传关联。利用PCR技术在大白猪(n=257)和长白猪(n=62)中检测到Hsd17b3基因第2内含子和第4内含子的两个indel位点,通过琼脂糖凝胶电泳及测序技术验证了该基因L3-10-bp和L11-11-bp的indel突变。关联分析结果表明:L3-10-bp的indel位点与40日龄长白猪的睾丸长轴长、睾丸短轴长和睾丸重均呈显著相关(P<0.01)。该结果与雄性睾丸的早期发育阶段和初始快速发育阶段睾丸发育过程相吻合,提示该indel位点可作为猪标记辅助选择的潜在DNA标记,为Hsd17b3基因在猪遗传育种中的研究和应用提供指导。

环腺苷一磷酸对人Ⅰ型17β羟类固醇脱氢酶在绒癌细胞系中表达的调节作用

由HSD17B1基因编码的人Ⅰ型17β-羟类固醇脱氢酶(17β-hydroxysteroid dehydrogenasetype 1,简称Ⅰ型17HSD)催化雌酮与雌二醇之间的转化。本文研究环腺苷一磷酸简称(cAM-P)对该酶在培养的绒癌细胞系(JAR和JEG-3)中表达的调节作用。用8-bromo-cAMP处理两种绒癌细胞后,观察到在伴随1.3 kbⅠ型17 HSDmRNA表达的同时,Ⅰ型17 HSD蛋白浓度也显著上升。标记基因分析表明,cAMP可诱导HSD 17 B1基因启动子在JAR和JEG-3细胞系中的转录活性,参与调节这一诱导作用的区域位于HSD 17 B1基因编码区上游-659至-550处。凝胶阻滞实验显示这一区域可同JAR、JEG-3、T-47 D和HeLa细胞核抽提物形成特异的DNA-蛋白复合物。本结果首次证实cAMP激活HSD 17 B1基因启动子在绒癌细胞中的转录。

男性假两性畸形——17β-羟类固醇脱氢酶3型缺陷症研究

目的本研究通过对一例17β-羟类固醇脱氢酶（17β-HSD）3型缺陷症的临床诊断及基因检测，探讨其病理生理及发病机制。方法总结分析该家系临床资料，通过激素测定和hCG兴奋试验确认其临床诊断；收集该家系先证者及其父母的外周血，通过PCR扩增产物直接测序和亚克隆方法检测其基因突变，确认其基因诊断。结果该患者社会性别为女性，以“原发性闭经”就诊；染色体核型为46，XY，双侧腹股沟隐睾，呈男性假两性畸形。激素测定显示睾酮合成前体物质如硫酸脱氢表雄酮、雄烯二酮明显升高，而睾酮却低于正常。hCG兴奋试验提示雄烯二酮转化为睾酮过程受阻，即17β-HSD3活性缺陷。基因诊断证实HSD1783基因第一外显子存在4个碱基缺失（172—175del）。结论青春期出现男性化表现伴乳腺发育时应考虑该症可能，hCG试验可提供临床依据，基因诊断可进一步确诊。

一个17β-羟类固醇脱氢酶3型缺乏症家系的HSD17B3基因变异分析

目的对1个家系中两同胞17β-羟类固醇脱氢酶3型缺乏症患儿的HSD17B3基因进行变异分析,明确其可能的致病原因,为临床诊断提供依据。方法提取2例患儿(先证者和其妹妹)及父母外周血DNA,对性发育相关基因进行panel检测,对可疑变异进行Sanger测序验证及生物信息学分析。结果测序结果显示2例患儿(先证者和妹妹)的HSD17B3基因均存在c.839T>C(p.Leu280Pro)和c.239G>T(p.Arg80Leu)复合杂合变异,两个变异位点均为未报道过的错义变异,Sanger测序验证结果显示其父亲携带c.239G>T杂合变异,母亲携带c.839T>C杂合变异,因此患儿的变异分别来自父母。经PolyPhen2、MutationTaster等在线软件预测均显示c.239G>T和c.839T>C变异均为有害变异。根据美国医学遗传学与基因组学学会遗传变异标准与指南,c.839T>C(p.Leu280Pro)和c.239G>T(p.Arg80Leu)变异均判定为可能致病(PM2+PP1+PP2+PP3+PP4,PM2+PM5+PP1+PP2+PP3+PP4)。结论HSD17B3基因c.239G>T和c.839T>C复合杂合变异可能为该家系患儿的致病原因,17β-HSD3缺乏症临床表现及实验室检查缺乏特异性,基因检测结果可以为临床诊断提供依据。

一例17β-羟类固醇脱氢酶3型缺陷症病例家系的基因研究

分析1例17β-羟类固醇脱氢酶3型缺陷症病例家系的HSD17B3基因序列变化。先证者社会性别女性,15岁,因“原发性闭经”就诊,双侧腹股沟区可扪及睾丸,激素检查高雄烯二酮、低睾酮,妇科超声未探及子宫卵巢,染色体核型46,XY。其妹8岁,因“家族史”就诊,查染色体核型46,XY。 HSD17B3基因测序显示姐妹二人为c.852G〉A（p. W284X）纯合突变,父母为相应的杂合突变。

低氧对雄性大鼠睾酮分泌及其合成相关蛋白和酶表达的影响

目的研究低氧对雄性大鼠睾酮分泌及其合成相关蛋白和酶表达的影响。方法36只雄性Wistar大鼠随机分为常氧、低氧5 d、低氧15 d和低氧30 d组。运用放射免疫测定法和反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,研究了模拟海拔5000 m高度低氧5 d、15 d、30 d对雄性Wistar大鼠血中睾酮浓度的影响,以及对睾丸组织中睾酮合成相关的类固醇急性调节蛋白(STAR)、胆固醇侧链裂解酶(P450scc)以及3β-羟甾脱氢酶(3β-HSD)mRNA表达的影响。结果模拟海拔5000 m高度低氧15 d,大鼠血中睾酮浓度显著高于常氧组(P＜0．05),低氧30 d,大鼠血中睾酮浓度显著低于对照组(P＜0．05);低氧不引起雄性大鼠睾丸组织StAR mRNA表达改变;低氧15 d、30 d,大鼠睾丸组织P450scc mRNA和3β-HSD mRNA表达分别显著低于常氧组(P＜0．05)。结论慢性低氧抑制了睾酮的分泌,并抑制了睾丸组织睾酮合成相关酶P450scc mRNA和3β-HSD mRNA的表达。低氧15 d大鼠血中睾酮浓度升高的机制需进一步研究。