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The Analysis of Human Papillomavirus Type 16 E6/E7 Genetic Variability in Jingjiang, Jiangsu Province, China
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作者 Xiaoyue Dai Yunling Zhu +4 位作者 Wen Xia Longkun Ding Yue Xi Liang Wu Chengxue Yi 《Journal of Biosciences and Medicines》 2020年第3期89-103,共15页
Human papillomavirus 16 (HPV-16) is a major high-risk type causing cervical cancer. The E6 and E7 genes in HPV-16 are the major virulent genes in HPV, and we wanted to investigate the polymorphism of E6 and E7 genes o... Human papillomavirus 16 (HPV-16) is a major high-risk type causing cervical cancer. The E6 and E7 genes in HPV-16 are the major virulent genes in HPV, and we wanted to investigate the polymorphism of E6 and E7 genes of HPV-16 originated from Jingjiang, Jiangsu province. In research, HPV-16 sample was collected, and the E6 and E7 genes fragments were amplified by PCR assay. The sequences of E6 and E7 genes were used for phylogenetic analysis by Mega 5.0 software. By comparison, the major mutations of E6 gene were T178G (41.67%) and G658A (17%), as well as C58G, T61A and G188C (14%), T61C and C656A (11%). The mutation of E7 gene was mainly C491A and T935A (23%);G514C, G937C and G519C (11%). The 68 nucleotide site deficiency (69.4%) of E6 and 535 nucleotide site deficiency (23%) of E7 were dominant. In our study, we did not find the relevance between the E6 and E7 genes mutations and pathologic severity. But we think the E6 and E7 genes mutation of HPV-16 might affect vaccine prevention and treatment effect. 展开更多
关键词 Human PAPILLOMAVIRUS E6 e7 gene Mutation PHYLOgeneTIC ANALYSIS
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吉林省宫颈病变患者人乳头瘤病毒16型E6、E7基因变异分析
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作者 苑飞艳 张立会 《长春中医药大学学报》 2024年第4期437-441,共5页
目的通过调查吉林省人乳头瘤病毒16型(HPV16)的E6、E7基因变异,评估HPV16基因变异与吉林省地区宫颈癌前病变及宫颈癌发生的相关风险。方法收集129例HPV16感染的宫颈癌及癌前病变患者的宫颈脱落细胞,提取细胞DNA,以特异性引物用聚合酶链... 目的通过调查吉林省人乳头瘤病毒16型(HPV16)的E6、E7基因变异,评估HPV16基因变异与吉林省地区宫颈癌前病变及宫颈癌发生的相关风险。方法收集129例HPV16感染的宫颈癌及癌前病变患者的宫颈脱落细胞,提取细胞DNA,以特异性引物用聚合酶链反应法(PCR)扩增E6-E7基因序列,再将E6-E7基因序列与标准的HPV16型基因序列比对,寻找E6-E7基因的突变位点。结果共发现8个E6突变位点,其中错义突变6个,无义突变位点2个,突变发生率较高的突变位点为:T178G(59/129,45.74%),A131C(10/129,7.75%),T350G(6/129,4.65%),T178A(6/129,4.65%)。共发现11个E7基因突变位点,其中错义突变位点6个,无义突变位点5个,突变率较高的位点为A647G(57/129,44.19%),T846C(55/129,42.64%),G666A(34/129,26.36%),T843C(20/129,15.50%)。E6、E7常见的突变位点在宫颈癌组和癌前病变组分布均差异无统计学意义。本研究中仅发现了亚洲变异型和欧洲变异型。经统计学分析发现,吉林省HPV16原型、As、Eur在宫颈癌和癌前病变中的分布差异有统计学意义(P=0.02),其中以亚洲变异型为主。结论本研究中吉林省仅发现HPV16的As、Eur2种变异型,且以As变异型为主;在吉林省HPV16 E6、E7常见的变异位点与宫颈病变的进展无关。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 基因变异 E6基因 e7基因 宫颈癌
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TCT、HPV E6/E7 mRNA、hTERC基因扩增对子宫颈癌的筛查价值 被引量:1
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作者 王俐娜 史宁宁 《中国卫生标准管理》 2023年第9期41-45,共5页
目的 探究薄层液基细胞学检测(liquid-based thinprep cytologic test,TCT)、人乳头状瘤病毒(human papilloma virus,HPV)E6/E7 mRNA、人端粒酶RNA(human telomerase RNA component,hTERC)基因扩增对子宫颈癌的筛查价值。方法 对2019年... 目的 探究薄层液基细胞学检测(liquid-based thinprep cytologic test,TCT)、人乳头状瘤病毒(human papilloma virus,HPV)E6/E7 mRNA、人端粒酶RNA(human telomerase RNA component,hTERC)基因扩增对子宫颈癌的筛查价值。方法 对2019年1月—2022年5月于山东电力中心医院就诊的68例疑似子宫颈癌患者进行TCT、HPV E6/E7 mRNA、h TERC基因扩增检测,均行阴道检查及病理检查(金标准)。对比各种方法诊断结果,并比较诊断价值。结果 根据金标准,阳性52例,阴性16例;TCT检查结果中阳性40例,阴性28例;联合检测结果中阳性48例,阴性20例;h TERC基因扩增结果表明子宫颈癌患者49例,非子宫颈癌患者19例;联合诊断的AUC值为0.849,95%CI为0.735~0.962,灵敏度为86.50%,特异度为85.00%。结论 TCT、HPV E6/E7 mRNA、hTERC基因扩增联合诊断对子宫颈癌患者具有较好的筛查价值。 展开更多
关键词 TCT HPV E6/e7 mRNA hTERC基因扩增 子宫颈癌 联合诊断 诊断价值
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人乳头瘤病毒16型E6、E7反义RNA对人宫颈癌SiHa细胞的恶性逆转作用 被引量:21
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作者 司马妮 王薇 +5 位作者 徐茜 田训 罗爱月 卢运萍 王世宣 马丁 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第1期26-31,共6页
背景与目的:人乳头瘤病毒16型(humanpapillomavirus16,HPV16)的早期基因E6、E7可分别诱导p53的泛素化降解和pRb的高磷酸化失活,与宫颈癌的发生发展关系密切。本研究通过真核表达载体介导HPV16型E6、E7基因反义RNA在SiHa细胞中的表达,探... 背景与目的:人乳头瘤病毒16型(humanpapillomavirus16,HPV16)的早期基因E6、E7可分别诱导p53的泛素化降解和pRb的高磷酸化失活,与宫颈癌的发生发展关系密切。本研究通过真核表达载体介导HPV16型E6、E7基因反义RNA在SiHa细胞中的表达,探讨反义RNA能否降低E6、E7基因的表达和诱导细胞凋亡。方法:利用pEGFP构建HPV16型E6、E7基因反义RNA的真核表达载体并转染SiHa细胞,利用RT-PCR和Westernblot技术检测转染后E6、E7基因的mRNA和蛋白的变化,利用MTT法检测SiHa细胞转染后细胞增殖活性,利用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测转染后细胞的凋亡情况。结果:转染携带HPV16型E6、E7反义基因的质粒后,SiHa细胞的E6、E7基因的mRNA和蛋白表达均明显下调;MTT结果显示转染后细胞的增殖活性(0.50±0.05)与转染空载体细胞(1.01±0.06)和未转染细胞(1.28±0.06)比较明显降低(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示转染后细胞凋亡率(59.3±11.3)%与转染空载体细胞(9.4±1.8)%和未转染细胞(2.1±0.4)%比较有显著性差异(P<0.05)。激光共聚焦显微镜结果示转染后细胞凋亡明显增多。结论:HPV16型E6、E7基因反义RNA可降低宫颈癌细胞中E6、E7癌基因的表达,诱导宫颈癌细胞凋亡。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 人乳头瘤病毒16型 E6基因 e7基因 反义基因 EGFP 凋亡
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HPV16型E6、E7变异与宫颈癌发生发展的研究进展 被引量:22
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作者 杨丽娟 姚宇峰 +1 位作者 严志凌 杨宏英 《现代肿瘤医学》 CAS 2016年第11期1829-1832,共4页
宫颈癌是全球15~44岁女性中第二常见的恶性肿瘤,每年的死亡人数约为265 653人,在中国,宫颈癌的发生率及死亡率仍较高。高危型人乳头状瘤病毒(HPV)持续感染是宫颈癌前病变及宫颈癌发生的必要条件,HPV16是最常见的高危人乳头瘤病毒。HPV1... 宫颈癌是全球15~44岁女性中第二常见的恶性肿瘤,每年的死亡人数约为265 653人,在中国,宫颈癌的发生率及死亡率仍较高。高危型人乳头状瘤病毒(HPV)持续感染是宫颈癌前病变及宫颈癌发生的必要条件,HPV16是最常见的高危人乳头瘤病毒。HPV16编码的E6和E7蛋白在HPV相关的肿瘤中起关键作用。近年来的研究揭示了HPV16 E6、E7基因的变异引起氨基酸变化可影响E6、E7蛋白与p53、pRb的结合,进而与宿主细胞恶性转化相关。本文将对近年来HPV16 E6、E7变异在宫颈癌发生发展中的作用作一综述。 展开更多
关键词 人乳头状瘤病毒(HPV) HPV16 宫颈癌 E6基因/蛋白 e7基因/蛋白 变异
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小干扰RNA抑制宫颈癌Hela细胞株HPV18 E6、E7基因的表达 被引量:4
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作者 王雪莲 逯晓波 +2 位作者 安春丽 姜晶 尹香菊 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2007年第6期545-549,共5页
目的:以人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)18型E6基因为靶点,研究小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对宫颈癌Hela细胞株HPV18基因组中恶性转化基因E6、E7的抑制作用及对细胞内P53蛋白表达的影响。方法:实验分细胞培养液阴... 目的:以人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)18型E6基因为靶点,研究小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对宫颈癌Hela细胞株HPV18基因组中恶性转化基因E6、E7的抑制作用及对细胞内P53蛋白表达的影响。方法:实验分细胞培养液阴性对照组(阴性对照组),无关序列siRNA对照组(无关序列对照组)及转染HPV18 E6-siRNA实验组(siRNA实验组)。设计并合成HPV18 E6-siRNA及无关序列siRNA,转染Hela细胞后,RT-PCR检测转染后48、120 h细胞内HPV18E6、E7mRNA的变化,Western blotting检测转染后48 h细胞内HPV18 E7和P53蛋白的变化。结果:siRNA转染Hela细胞的效率约为85%。siRNA转染后48 h,实验组细胞内HPV18E6、E7mRNA及E7蛋白含量降低,其含量分别为阴性对照组的33.33%、36.78%及33.84%;实验组细胞内P53蛋白含量增加,其含量为阴性对照组的2.194倍。siRNA转染后120 h,实验组细胞HPV18E6、E7mRNA含量恢复为阴性对照组的90.91%、101.60%。结论:HPV18 E6-siRNA体外能明显抑制宫颈癌Hela细胞HPV18E6、E7基因的表达,增加细胞内肿瘤抑制因子P53蛋白的水平。 展开更多
关键词 小干扰RNA 宫颈癌细胞 人乳头瘤病毒 E6基因 e7基因 P53
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宫颈癌组织中HPV16型E6/E7序列突变分析 被引量:3
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作者 张志珊 庄建良 +1 位作者 李爱禄 蒋燕成 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期607-611,共5页
目的分析泉州地区宫颈癌患者HPV16型E6/E7序列突变情况,探讨其与宫颈癌发生的相关性。方法取35例HPV16阳性的宫颈癌组织标本,采用PCR法扩增E6、E7全长基因。PCR产物直接测序,并与野生型序列进行比对。分析E6、E7基因的变异情况。结果 E6... 目的分析泉州地区宫颈癌患者HPV16型E6/E7序列突变情况,探讨其与宫颈癌发生的相关性。方法取35例HPV16阳性的宫颈癌组织标本,采用PCR法扩增E6、E7全长基因。PCR产物直接测序,并与野生型序列进行比对。分析E6、E7基因的变异情况。结果 E6、E7基因的突变率分别为91.4%和89.2%。E6基因中有10个位点为错义突变,2个位点为无义突变。氨基酸突变频率最高的是D25E(77.1%)。E7基因中共发现5个突变位点,有2个位点为错义突变,3个位点为无义突变,突变频率最高是N29S和无义突变T846C(均为75.0%)。结论 HPV16E6、E7基因中最常见突变位点D25E、N29S和T846C可能与宫颈癌的发生密切相关,可为研究针对中国人群的HPV疫苗提供一定的线索。 展开更多
关键词 人乳头状瘤病毒 宫颈癌 16型 E6基因 e7基因
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云南HPV-16型E6、E7基因的突变分析 被引量:5
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作者 张晓琳 刘峰 +5 位作者 姚月婷 李亚东 周竞贤 易力 姚宇峰 俞建昆 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2014年第2期17-23,共7页
人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)16型(HPV-16)是引起宫颈癌的一种主要高危型病毒,其2个致癌基因E6和E7的核酸序列变异可能会影响其对宿主细胞的致癌性,已有研究表明其序列突变呈现地域差异性。因此,研究不同地域HPV-16这2个基... 人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)16型(HPV-16)是引起宫颈癌的一种主要高危型病毒,其2个致癌基因E6和E7的核酸序列变异可能会影响其对宿主细胞的致癌性,已有研究表明其序列突变呈现地域差异性。因此,研究不同地域HPV-16这2个基因的变化情况是宫颈癌流行病学调研的主要内容,也可为研究E6和E7的致癌性积累数据。研究以NCBI登录号为NC_001526.2的HPV-16型病毒的序列为参照,采用Neighbor-joining方法对云南地区74例HPV-16样本的E6、E7的DNA序列构建进化树,结果显示:只有亚洲和欧洲变异亚型,而没有发现非洲1、非洲2、亚-美洲和北美洲这4种变异亚型。DNA序列分析显示:E6的碱基突变以T178G(D25E,59.46%)和T350G(L83V,8.11%)为主,E7的碱基突变主要以A647G(N29S,59.46%)和T846C(同义突变,60.81%)为主。发现E6的新突变有A95G(同义突变,1.35%)和A135G(K11R,1.35%);E7的新突变有C625T(L22F,1.35%)、C627T(同义突变,12.16%)、G689A(G43E,1.35%)、T748G(S63A,1.35%)。此外还发现有一个共突变现象:T178G(D25E,59.46%)-A647G(N29S,59.46%)-T843C(同义突变,21.62%)-T846C(同义突变,60.81%)。 展开更多
关键词 HPV-16 E6基因突变 e7基因突变
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人乳头瘤病毒HPV16 E7蛋白基因在沙门氏菌疫苗菌株X4072中的表达 被引量:6
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作者 金顺钱 陆士新 +5 位作者 彭琼 谭文 陈瑞红 周春晓 杨晓 黄翠芬 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期38-44,共7页
采用PCR方法,从HPV16型质粒中分离出HPV16E7基因片段,用EcoRI和SalI双酶解后,定向插入到表达质粒pYA3332(asd+)的Ptrc启动子下游,构建成pYA3332-HPV16-E7重组表达质粒。... 采用PCR方法,从HPV16型质粒中分离出HPV16E7基因片段,用EcoRI和SalI双酶解后,定向插入到表达质粒pYA3332(asd+)的Ptrc启动子下游,构建成pYA3332-HPV16-E7重组表达质粒。在大肠杆菌X6212上筛选出重组质粒后,通过中间菌株X3730的转化过渡,将重组质粒导入鼠伤寒沙门氏减毒疫苗菌株X4072(asd-),构建成宿主和载体之间具有平衡致死结构的HPV16型重组疫苗。SDS-PAGE染色和Westernblot法分析证实。 展开更多
关键词 HPV16 e7 鼠伤寒沙门氏菌 疫苗 重组
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人乳头瘤病毒E6/E7 mRNA在不同程度宫颈病变中的应用价值 被引量:2
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作者 廖焕兰 陈富 +3 位作者 王丽娜 周妙姬 冯辉 邱峰 《检验医学与临床》 CAS 2014年第23期3258-3259,3262,共3页
目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7mRNA水平在不同程度宫颈病变中的应用价值。方法选取2011年4月至2013年4月广东省中医院妇科门诊收治的HPV感染患者430例,将HPV-DNA阳性标本根据病理资料分为炎症组、CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组和宫颈癌... 目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7mRNA水平在不同程度宫颈病变中的应用价值。方法选取2011年4月至2013年4月广东省中医院妇科门诊收治的HPV感染患者430例,将HPV-DNA阳性标本根据病理资料分为炎症组、CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组和宫颈癌组。用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组标本的HPV E6/E7mRNA水平,比较不同宫颈病变组间HPV-DNA病毒载量及HPV E6/E7mRNA阳性检出率的差异情况。结果随着宫颈病变程度增加,HPV-DNA病毒载量未呈现逐级递增的趋势,各病变组间的病毒载量两两比较差异无统计学意义(P>0.05);而HPV E6/E7mRNA阳性检出率则逐级递增,除炎症组与CINⅠ组的检出率比较差异无统计学意义(P>0.05)之外,其余各组之间的检出率两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 HPV E6/E7mRNA与宫颈病变程度有高度的相关性,可作为宫颈疾病筛查的重要检测指标。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 E6基因 e7基因 信使RNA
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宫颈癌及癌前病变组织中含HPV16E7基因转录本分析 被引量:4
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作者 季红薇 朱华 +4 位作者 林丛 张文淼 陈俊 朱雪洁 邹阮敏 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1183-1188,共6页
目的:探讨宫颈癌发生发展过程中不同病变时期人乳头瘤病毒16型(HPV16)E7相关转录本的变化。方法:乳头瘤病毒癌基因转录本扩增(APOT)检测15例低度鳞状上皮内病变(LSIL)、20例高度鳞状上皮内病变(HSIL)、18例宫颈癌及9例HPV阴性正常宫颈... 目的:探讨宫颈癌发生发展过程中不同病变时期人乳头瘤病毒16型(HPV16)E7相关转录本的变化。方法:乳头瘤病毒癌基因转录本扩增(APOT)检测15例低度鳞状上皮内病变(LSIL)、20例高度鳞状上皮内病变(HSIL)、18例宫颈癌及9例HPV阴性正常宫颈组织中的E7基因转录本;对转录本进行测序和序列比对分析;Southern blot验证E7相关转录本在宫颈癌组织中的表达。结果:与LSIL组织比较,HSIL及宫颈癌组织存在更加复杂、多样的E7基因转录本,但未见特征的转录本。宫颈组织共获得5种HPV16 E7的转录模式,模式A、C和E是本研究首次报道;在5种转录模式中,模式A与B在所有HPV16阳性的宫颈组织中都能检测到,是HSIL组织的主要转录模式;模式C主要在宫颈癌组织中检测到,其次为HSIL组织;而模式D和E却只在宫颈癌组织中被发现;模式D和E转录都含E4序列,部分宫颈癌标本未能检测到含E4转录本,且不同宫颈癌标本检测的含E4转录本也存在明显差异条带。结论:HPV16 E7的转录模式在宫颈癌变各时期中的差异都较大;随着细胞癌变程度的加深,病毒的某些特定转录模式会逐渐增多而形成优势转录。 展开更多
关键词 宫颈癌 HPV16 e7基因 转录本 癌前病变
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人乳头瘤病毒16型修饰后E6E7基因免疫原性增强 被引量:1
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作者 许雪梅 朱明昭 +2 位作者 张明策 刘晓娟 宋国兴 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2003年第3期269-273,共5页
利用突变修饰后消除转化活性并保留抗原性的中国山东地方株人乳头瘤病毒 16型 (humanpapillomavirustype16 ,HPV16 )E6E7融合基因 (fmE6E7) ,研制治疗HPV16相关疾病的DNA疫苗。用PCR扩增fmE6E7基因后 ,插入真核表达质粒获得pVR10 12 fm... 利用突变修饰后消除转化活性并保留抗原性的中国山东地方株人乳头瘤病毒 16型 (humanpapillomavirustype16 ,HPV16 )E6E7融合基因 (fmE6E7) ,研制治疗HPV16相关疾病的DNA疫苗。用PCR扩增fmE6E7基因后 ,插入真核表达质粒获得pVR10 12 fmE6E7,瞬时转染Cos 7细胞 ,免疫荧光法检测证实其表达后 ,在C5 7BL 6小鼠后腿肌肉进行裸DNA免疫 ,5 1Cr释放法体外分析免疫鼠的细胞毒性T淋巴细胞活性 (cytotoxicTlymphocyte,CTL) ,间接ELISA法检测免疫鼠血清中E7特异性抗体。研究表明修饰后的中国地方株E6E7融合基因可诱导机体产生特异的抗体反应和CTL反应 ,与单独野生型E7基因免疫相比 ,E6E7融和基因可更好的活化CTL反应。表明修饰后消除转化活性的中国地方株E6E7融合基因可作为HPV16治疗性DNA疫苗的靶基因。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒16型 基因修饰 E6e7基因 免疫原性增强 DNA疫苗 宫颈癌 癌前病变
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人乳头瘤病毒6b型E7基因的克隆和表达 被引量:5
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作者 周强 程浩 +3 位作者 高锦程 岑建萍 叶俊 曾凤英 《中国皮肤性病学杂志》 CAS 北大核心 2003年第5期294-296,300,共4页
目的 克隆人乳头瘤病毒 6b型E7(humanpapillomavirus 6bE7)基因 ,构建原核表达载体 ,并进行蛋白表达和纯化。方法 将HPV 6bE7基因经PCR扩增和亚克隆 ,与GST原核表达载体pGEX 4T 2重组 ,转化E .coliP2 3 92 菌表达蛋白 ,经GlutathioneS... 目的 克隆人乳头瘤病毒 6b型E7(humanpapillomavirus 6bE7)基因 ,构建原核表达载体 ,并进行蛋白表达和纯化。方法 将HPV 6bE7基因经PCR扩增和亚克隆 ,与GST原核表达载体pGEX 4T 2重组 ,转化E .coliP2 3 92 菌表达蛋白 ,经GlutathioneSepharose 4B亲和层析纯化GST HPV 6bE7融合蛋白。结果 限制性酶切和DNA测序表明 ,HPV 6bE7DNA正确克隆于 pGEX 4T 2多克隆位点。经IPTG诱导表达的GST HPV 6bE7融合蛋白主要存在于可溶性上清。经亲和层析 ,每升诱导菌回收 8.4mg融合蛋白 ,10 %SDS PAGE分析融合蛋白表观分子量约 3 7kDa。结论 成功构建了HPV 6bE7基因原核表达载体 ,并大量表达和纯化了GST HPV 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒6b型e7基因 克隆 基因表达 尖锐湿疣
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外源性HPV16 E7癌基因表达对宫颈癌HeLa细胞Cyclin E表达的影响 被引量:2
14
作者 田甜 戴淑真 +2 位作者 孔守芳 黄丽丽 罗兵 《青岛大学医学院学报》 CAS 2007年第3期210-211,214,共3页
目的研究重组腺病毒介导人乳头状瘤病毒(HPV)16型E7病毒癌基因感染对人宫颈癌HeLa细胞周期蛋白E(Cyclin E)表达的影响,探讨HPV16 E7癌基因以及Cyclin E在宫颈癌发生发展中的作用。方法用含有HPV16 E7病毒癌基因的重组腺病毒载体感染体... 目的研究重组腺病毒介导人乳头状瘤病毒(HPV)16型E7病毒癌基因感染对人宫颈癌HeLa细胞周期蛋白E(Cyclin E)表达的影响,探讨HPV16 E7癌基因以及Cyclin E在宫颈癌发生发展中的作用。方法用含有HPV16 E7病毒癌基因的重组腺病毒载体感染体外培养的人宫颈癌HeLa细胞。免疫荧光染色后激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测感染前后Cyclin E表达的差异。结果HPV16 E7感染后Cyclin E表达较感染前明显增加。结论HPV16 E7基因的表达促进Cyclin E的表达,对宫颈肿瘤细胞有增殖促进的作用。 展开更多
关键词 乳头状瘤病毒 基因 e7 感染 宫颈肿瘤 细胞周期蛋白E
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外源性tRNAser对人乳头瘤病毒E7基因表达的影响 被引量:1
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作者 赵蔚明 卜淑蕊 +2 位作者 王红 刘文军 于修平 《山东大学学报(医学版)》 CAS 2004年第1期5-8,共4页
目的:探讨哺乳动物细胞中特定外源性tRNAser(CGA)的表达对HPV6bE7蛋白转译的影响,为研究HPV抗原表达的机制提供实验依据。方法:提取重组真核表达质粒pSVtRNAser(含人tR-NAsercDNA的全部序列)、pcDNA3-WtE7(含野生型HPV6bE7ORF)、pcDNA3-... 目的:探讨哺乳动物细胞中特定外源性tRNAser(CGA)的表达对HPV6bE7蛋白转译的影响,为研究HPV抗原表达的机制提供实验依据。方法:提取重组真核表达质粒pSVtRNAser(含人tR-NAsercDNA的全部序列)、pcDNA3-WtE7(含野生型HPV6bE7ORF)、pcDNA3-HuE7(含优化密码人源化HPV6bE7ORF),EcoRI酶切鉴定pSVtRNAserKpnI和EcoRI双酶切鉴定pcDNA3-HuE7和pcDNA3-WtE7。将质粒DNApSVtRNAser分别与pcDNA3-WtE7或pcDNA3-HuE7混合,脂质体介导共转染COS-1细胞。转染后48h,做免疫荧光染色。结果:重组质粒酶切鉴定结果正确。免疫荧光检测显示:与野生型E7基因单独转染组相比,pSVtRNAser与pcDNA3-WtE7共转染的COS-1细胞中,E7蛋白的表达增强。pcDNA3-HuE7质粒单独转染的COS-1细胞中优化密码E7基因可获得有效表达,共转染后,荧光阳性细胞未见明显增多。Southernblot检测结果显示,在400bp处可见特异DNA条带,说明质粒pSV2tRNAser已转入COS-1细胞。结论:补充外源性pSVtRNAser对COS-1细胞中野生型HPV6bE7基因的表达有一定程度的增强作用。 展开更多
关键词 乳头状瘤病毒 基因表达 e7 RNA 转移 丝氨酸
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人乳头瘤病毒16 E7基因的原核表达及表达条件的优化 被引量:2
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作者 许蓓妮 刘金花 +4 位作者 彭敏 解庭波 朱丽琴 伍欣星 吴承龙 《武汉大学学报(医学版)》 CAS 2006年第4期415-420,432,共7页
目的:构建pET-28a(+)-HPV16 E7原核表达质粒,并对其表达条件进行优化,为进一步研究HPV16E7致病机制及HPV疫苗提供相应的技术平台。方法:应用基因重组技术,构建pET-28a(+)与HPV16 E7(标准株和湖北株)的原核表达重组质粒,用PCR、限制性内... 目的:构建pET-28a(+)-HPV16 E7原核表达质粒,并对其表达条件进行优化,为进一步研究HPV16E7致病机制及HPV疫苗提供相应的技术平台。方法:应用基因重组技术,构建pET-28a(+)与HPV16 E7(标准株和湖北株)的原核表达重组质粒,用PCR、限制性内切酶酶切和核酸序列检测对重组质粒DNA进行鉴定,将其转入宿主菌E.coliBL21(DE 3)进行诱导以表达蛋白;SDS-PAGE及Western blot检测鉴定表达蛋白的分子量及特异性。优化诱导表达的条件,如温度、IPTG浓度、适用的培养基,探讨不同温度下蛋白的表达形式;纯化回收HPV16 E7蛋白。结果:PCR、限制性内切酶酶切和核酸序列检测证实重组质粒中插入的目的基因,其DNA大小、方向、插入位点和阅读框架均正确;HPV16 E7(标准株)蛋白得到高效原核表达,最佳表达条件:表达HPV16 E7的工程菌BL21(DE 3)的最佳诱导温度是37℃,诱导剂IPTG的浓度为0.3-0.4 mmol/L,最佳培养基为1.5倍LB。结论:pET-28a(+)-HPV16 E7标准株和湖北株重组载体构建成功,人乳头瘤病毒16 E7标准株获得高效原核表达。 展开更多
关键词 HPV16 e7基因 重组 原核表达 优化
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K14和CMV启动子驱动裸鼠体内HPV16 E6/E7基因表达的差异 被引量:2
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作者 潘巍巍 徐营 +5 位作者 曹利仙 沈忠飞 李平 郭连军 邬维娅 宋方洲 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期620-626,共7页
人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是一种无包膜的环状闭合双链DNA病毒,具有严格的嗜人组织的特性.为探讨不同启动子驱动HPVE6/E7癌蛋白在裸鼠体内不同组织的表达效率,构建了带有角蛋白(K14)启动子和带有巨细胞病毒(CMV)启动子的E... 人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是一种无包膜的环状闭合双链DNA病毒,具有严格的嗜人组织的特性.为探讨不同启动子驱动HPVE6/E7癌蛋白在裸鼠体内不同组织的表达效率,构建了带有角蛋白(K14)启动子和带有巨细胞病毒(CMV)启动子的E6/E7腺病毒载体(pAd-K14-E6/E7和pAd-CMV-E6/E7),pAd-K14-E6/E7和pAd-CMV-E6/E7、以及作为对照的重组腺病毒空载体pAdtrack-K14和pAd-CMV同源重组后,分别在293细胞中包装,收集重组病毒Ad-K14-E6/E7、Ad-CMV-E6/E7、Adtrack-K14和Ad-CMV,通过尾缘静脉注射到随机分组的裸鼠体内,并每d向裸鼠腹腔注射0.05 mg雌激素.采用RT-PCR和Western免疫印迹检测不同实验组E6/E7 mRNA和蛋白表达水平,免疫组化法检测P53和Bcl-2蛋白表达.结果显示,注射病毒Ad-K14-E6/E7(实验组1)裸鼠子宫体中E6/E7 mRNA、E6蛋白质、P53和Bcl-2蛋白高表达,而其它组织中低表达;注射病毒Ad-CMV-E6/E7(实验组2)裸鼠各组织E6/E7 mRNA、E6蛋白质、P53和Bcl-2蛋白均低表达.研究表明,在裸鼠体内角蛋白K14启动子可以调控E6/E7在子宫体中表达,CMV启动子未能诱导E6/E7在子宫体中表达. 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 腺病毒 E6/e7基因 裸鼠 CMV启动子 角蛋白K14启动子
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宫颈癌组织中HPV16E7序列多态性分析 被引量:3
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作者 刘欣 刘国炳 +1 位作者 庞战军 邢福祺 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第10期1272-1275,共4页
目的探讨广东地区宫颈癌组织中HPV16肿瘤相关性抗原E7基因序列的多态性。方法采用通用引物PCR直接测序法对宫颈癌标本中的HPV分型,从含有HPV16型的标本中采用自行设计的多重引物通过巢式PCR扩增出HPV16E7,经DNA序列测定法检测其基因变异... 目的探讨广东地区宫颈癌组织中HPV16肿瘤相关性抗原E7基因序列的多态性。方法采用通用引物PCR直接测序法对宫颈癌标本中的HPV分型,从含有HPV16型的标本中采用自行设计的多重引物通过巢式PCR扩增出HPV16E7,经DNA序列测定法检测其基因变异,进而寻找其热点突变。结果50例宫颈癌组织HPV-DNA的检出率为78%,其中HPV16和HPV18型混合感染18例,单纯HPV16型感染15例。33例含有HPV16型的标本中扩增出25例HPV16E7,其中17例647位核苷酸“T”变异“C”,导致相应的蛋白质由天冬氨酸变异为丝氨酸。结论广东地区宫颈癌组织中HPV16E7DNA序列发生碱基替换的区域主要在647位至846位,热点突变点为Nt647和Nt846。 展开更多
关键词 乳头状瘤病毒 e7基因 多态现象 宫颈肿瘤 聚合酶链反应
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广东分离株HPV16型L2与重组E7融合蛋白原核表达载体的构建 被引量:1
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作者 芦春斌 辛庆玲 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期312-317,共6页
分析广东分离株HPV16型的L2和E7基因结构,并对E7的4个功能区重新排列组合形成失去致癌作用但其抗原表位不改变,其命名为rE7,构建pET-28a-L2、pET-28a-rE7、pET-28a-L2-rE7、pET-28a-rE7-L24个原核表达质粒.采用PCR技术从广东分离株HPV1... 分析广东分离株HPV16型的L2和E7基因结构,并对E7的4个功能区重新排列组合形成失去致癌作用但其抗原表位不改变,其命名为rE7,构建pET-28a-L2、pET-28a-rE7、pET-28a-L2-rE7、pET-28a-rE7-L24个原核表达质粒.采用PCR技术从广东分离株HPV16基因组中扩增L2基因;用重叠PCR技术人工合成rE7基因和L2-rE7、rE7-L2融合基因,并构建到原核表达载体pET-28a(+)上.成功扩增广东分离株HPV16型L2基因,经重叠PCR技术成功得到rE7、L2-rE7和rE7-L2基因并成功构建了原核表达的4个载体:pET-28a-L2、pET-28a-rE7、pET-28a-L2-rE7、pET-28a-rE7-L2.广东分离株HPV16型L2基因与中国标准株有9处不同,同源性为99.37%,其编码氨基酸序列有8处突变.成功合成失去致癌作用的基因rE7及构建4个原核表达载体. 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒16型 L2基因 e7基因 pET-28a(+)
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重组全酿酒酵母HPV16-E7疫苗的构建及免疫原性初步研究 被引量:1
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作者 陈贤璟 宋一一 +3 位作者 陈晖 孙蓬明 林超琴 吴齐斌 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第17期2615-2618,2622,共5页
目的构建人乳头状瘤病毒16型(HPV16)E7重组全酿酒酵母疫苗,初步评价疫苗的免疫应答效应。方法将HPV16 E7 cDNA亚克隆入酵母表达载体pYES2/NT,重组质粒转化酿酒酵母,经诱导表达、热灭活制备全酵母HPV16-E7疫苗。疫苗免疫C57BL/6小鼠,ELIS... 目的构建人乳头状瘤病毒16型(HPV16)E7重组全酿酒酵母疫苗,初步评价疫苗的免疫应答效应。方法将HPV16 E7 cDNA亚克隆入酵母表达载体pYES2/NT,重组质粒转化酿酒酵母,经诱导表达、热灭活制备全酵母HPV16-E7疫苗。疫苗免疫C57BL/6小鼠,ELISA检测其诱导的抗体和细胞因子表达水平。结果重组全酵母疫苗能够有效地表达HPV16-E7蛋白;疫苗小鼠免疫,能够诱导出特异性抗HPV16-E7抗体,并促进Th1型细胞因子的表达。结论研究结果为进一步进行疫苗抗肿瘤免疫研究,提供了实验基础。 展开更多
关键词 人乳头状瘤病毒 e7基因 酿酒酵母 疫苗 免疫原性
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