急性髓系白血病NPM1基因突变的研究

本研究旨在探讨急性髓系白血病(AML)患者NPM1基因突变情况及临床特征。采用PCR扩增产物直接测序法检测33例AML患者NPM1基因第12外显子的突变情况,了解NPM1基因突变阳性患者的临床特征。结果显示:33例AML患者中共检出8例(24.2%)具有NPM1基因突变,其中M11例、M23例、M41例、M53例。19例正常核型AML患者中7例(36.8%)发生NPM1基因突变,明显高于异常核型组(14例中1例,7.1%)(p<0.05)。NPM1基因突变型患者骨髓原始细胞比例及外周血白细胞计数均高于野生型组(p值均<0.05)。结论:NPM1基因第12外显子的突变多见于正常核型AML患者,突变患者骨髓原始细胞比例及外周血白细胞数量增多。

猪新基因NPM1的克隆、序列分析与染色体定位

克隆了猪NPM1基因的cDNA和第4内含子序列,并利用生物信息学方法进行验证。所得cDNA序列全长1 195 bp且包含一个完整的开放阅读框,编码294个氨基酸。内含子序列长300 bp,遵循GT/AG剪接法则。序列分析表明,该基因与已报道的人、大鼠和小鼠等物种的NPM1基因高度同源,氨基酸序列同源性分别为95%、91%和91%。该基因编码的蛋白具有Nucleoplasmin保守功能域。用体细胞杂种板将该基因定位在猪16号染色体q21区段,辐射杂种板定位结果表明该基因与猪16号染色体上SW977标记紧密连锁。

急性髓系白血病NPM1基因突变检测方法的研究

本研究旨在建立检测急性髓系细胞白血病(AML)患者NPM1基因突变的方法。针对NPM1基因突变集中区域设计引物/探针,建立高分辨熔解曲线方法(HRM)和等位基因特异PCR方法(AS-PCR),通过89份AML标本进行了临床评估,并采用毛细管电泳法(CE)和测序法作为对照进行了验证。结果表明,通过上述4种方法共检出阳性标本17例(19.1%),其中A型突变15例,B型和Nm型突变各1例。上述方法中HRM法检测全面,灵敏度为5%,而AS-PCR法有一定的漏检,但灵敏度高达0.01%。结论:考虑到操作的难易程度,同时也结合临床样品的检测情况,HRM在临床上可法用于NPM1突变筛查,而AS-PCR法可用于后续的微小残留病定量检测。

急性髓系白血病NPM1基因突变研究

核仁磷酸蛋白(NPM1)又称B23、N038,是位于核仁颗粒区的一种在各种类型的细胞中广泛表达的多功能蛋白质。目前的多项研究发现,NPM1突变在急性髓系白血病(AML)中,尤其是在正常核型AML(nk-AML)中检出率最高的一种分子遗传学异常。NPM1突变是AML一类特殊的亚群,具有相对独特的临床特点,且是AML独立的预后良好的指标。NPM1突变的研究对AML患者诊断、治疗及预后判断具有重要的临床意义。本文综述近年来AML中NPM1基因突变的发现,包括NPM1基因结构与生理功能,AML中NPM1基因突变及NPM1基因突变检测方法等问题。

初诊急性髓系白血病患者FLT3-ITD和NPM1基因联合突变与临床特征的关系

目的探讨初发急性髓系白血病（AML）患者中FMS样酪氨酸激酶3-基因内部串联重复（FLT3-ITD）和核仁磷酸蛋白1（NPM1）基因突变的发生频率，并进一步分析其与患者临床特征的关系。方法收集44例临床初诊为AML的成人患者骨髓标本，通过基因组DNA—PCR技术对FLT3-ITD和NPM1基因突变进行检测。结果44例患者共检测到FLT3-ITD突变10例，检出率227％。FLT3-ITD突变阳性的10例患者和无突变者初诊WBC中位数分别为（98．5±22．5）X109／L和（42．9±12．4）×10^9TL，两者相比具有统计学差异（P〈0．05）。44例患者共检测到NPM1突变14例，检出率31．8％。大部分突变患者，染色体核型正常。结论FLT3-ITD和NPM1基因突变是AML患者中常见的分子生物学异常，对患者的临床和预后有影响。

NPM1基因突变阳性急性髓系白血病的免疫表型和临床特征分析

目的:探讨NPM1基因突变阳性的急性髓性白血病的临床特点及免疫表型特征。方法:利用流式细胞术进行免疫分型检测,采用实时定量荧光PCR法检测NPM1基因、WT1基因、白血病融合基因,利用G显带技术检测患者的染色体核型。NPM1基因突变阳性染色体正常AML患者28例,基因及染色体均正常的AML患者41例。结果:NPM1+的急性髓细胞白血病与NPM1-的急性髓细胞白血病的发病在性别分布上有统计学差异(P <0. 05)。发病时的白细胞数、血红蛋白量及血小板数差别无统计学意义(P> 0. 05)。NPM1+的急性髓细胞白血病的CD34、CD117、HLA-DR表达率低于NPM1-的急性髓细胞白血病(P <0. 05)。NPM1基因突变阳性的AML患者WT1的表达水平高于NPM1-的急性髓细胞白血病(P <0. 05)。NPM1基因突变阳性的AML患者第1程化疗后完全缓解率与NPM1-的急性髓细胞白血病无差别(P> 0. 05)。结论:NPM1+的急性髓细胞白血病具有特定的免疫表型特征及临床特点。

NPM1基因突变在急性髓系白血病中的作用

目的探讨急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者中NPM1基因突变发生情况,并了解其临床特征及预后。方法采用基因组DNA-PCR方法扩增39例初发AML患者骨髓单个核细胞NPM1基因,直接测序法检测AML患者NPM1基因第12外显子的突变情况。结果 (1)39例初发AML患者中NPM1突变7例(17.9%),其中A型突变6例,B型突变1例。(2)NPM1突变在22例染色体正常核型AML中的发生率27.3%(6/22),显著高于异常核型7.7%(1/13)(P<0.01)。(3)临床数据显示NPM1基因突变患者外周血白细胞计数高于野生型患者,NPM1基因突变患者具有较高的临床完全缓解率(CR)。结论 NPM1基因突变是AML尤其是正常核型AML患者常见的分子学异常,单纯NPM1基因突变患者外周血白细胞数比例较高,预后较好。

FLT3-ITD、NPM1和C-KIT基因突变在成人急性髓系白血病中的表达及临床意义

目的探讨成人急性髓系白血病患者中FLT3-ITD、NPM1、C-kit基因突变表达及临床意义。方法采用PCR技术检测50例成人急性髓系白血病患者治疗前后FLT3-ITD、NPM1、C-kit表达,比较分析FLT3-ITD、NPM1、C-kit突变与临床资料、细胞遗传学的关系及预后影响。结果 50例急性髓系白血病中NPM1突变检出率占38%,在正常核型占61.9%,显著高于在异常核型(P<0.05);FLT3-ITD突变检出率32%,正常核型占38.1%,与在异常核型相比无显著性差异(P>0.05);C-kit突变检出率10%,核型为t(8;21)占80%。FLT3-ITD、NPM1突变初诊时WBC、LDH、α-HBDH显著高于无突变患者(P<0.05);在NPM1突变患者中伴FLT3-ITD突变占68.42%,显著高于在无NPM1突变患者中伴FLT3-ITD突变占的9.68%(P<0.05);单纯NPM1突变CR率100%,显著高于无三基因突变的患者54.16%(P<0.05),FLT3-ITD、NPM1突变CR率46.15%,显著低于单纯NPM1突变CR率100%(P<0.05)。CR的患者FLT3-ITD、NPM1、C-kit突变均转阴,复发患者再次检出突变早于骨髓复发。结论 FLT3-ITD、NPM1及C-kit基因突变在急性髓系白血病上有特殊的分布,并且与白细胞数、骨髓原始细胞比例、血小板数、LDH、α-HBDH密切相关,三基因突变可作为判断预后及监测微小残留病灶的指标。

NPM1高突变负荷是NPM1阳性急性髓系白血病患者的预后不良因素

目的:探讨NPM1基因突变阳性成人急性髓系白血病(NPM1+AML)患者的临床特征、伴随基因突变特征及影响预后的因素。方法:收集并应用第二代测序法测定22种AML常见的基因突变中NPM1基因突变阳性初诊成人AML患者73例,用实时荧光定量PCR法测定43种AML常见的融合基因,应用Kaplan-Meier生存曲线和Cox多因素回归分析影响预后的因素。结果:73例NPM1+AML患者中,共检测到74个NPM1基因位点突变,其发生率分别为L287fs(92.0%)、Q289fs和W288fs(2.7%)、L258fs和Q289H(1.4%),其中1例患者存在2个NPM1突变位点;不同突变位点对NPM1+AML的预后无影响。NPM1变异等位基因频率(VAF)的中位值为35.4(1.8-56.6)%,以四分位数上间距38.4%为界,NPM1 VAF>38.4%的AML患者(NPM1highAML)与NPM1VAF≤38.4%的患者(NPM1lowAML)相比,早期死亡率显著增加(33.3%vs 7.3%,P<0.05)、中位EFS(148 d,95%CI 58-238 vs 372 d,95%CI 264-480 d)(P<0.01)及中位OS(179 d,95%CI 6-352 d vs 444 d,P<0.01)均显著缩短。在87.7%的NPM1+AML患者中共检测到126个伴随基因突变;NPM1伴随NRAS基因突变的患者完全缓解率高(100%vs 58%)(P<0.05),且中位OS时间显著延长(未达到vs 320 d,95%CI 150-490 d)(P<0.05)。73例NPM1+AML患者中65例完善了43种融合基因检查,所有患者融合基因检查结果均为阴性。多因素分析显示,NPM1 VAF>38.4%是EFS(HR=3.1,95%CI 1.6-6.4,P<0.01)及OS(HR=3.0,95%CI 1.4-6.2,P<0.01)的独立预后不良因素。结论:AML患者NPM1基因突变常伴随其它基因突变,但罕有融合基因并存;NPM1高突变负荷是NPM1阳性成人AML患者的独立预后不良因素。

NPM1和FLT3基因同时突变影响急性髓细胞白血病患者完全缓解率的Meta分析

目的采用Meta分析评价NPM1和FLT3基因同时突变对急性髓细胞白血病(AML)患者完全缓解率的影响。方法采用Cochrane系统评价,计算机检索中国期刊全文数据库、万方数据库、维普中文科技期刊数据库,收集关于NPM1和FLT3基因突变对AML预后影响的中文文献,以完全缓解率为评价指标,采用RevMan5.0软件进行Meta分析。结果本研究共纳入4个随机对照研究,包括196例受试对象。NPM1+/FLT3-ITD+与NPM1-/FLT3-ITD-比较的Meta分析显示,两组AML患者完全缓解率的差异无统计学意义[OR=0.49,95%CI(0.19～1.25),P=0.13]。结论目前的证据尚不足以说明NPM1和FLT3基因同时突变对AML患者完全缓解率有影响。

NPM1和FLT3基因突变的正常核型急性髓系白血病病人临床特征及预后分析

目的了解正常核型急性髓系白血病（AML）病人核仁磷酸蛋白1（NPM1）、FMS样酪氨酸激酶3（FLT3）基因突变的发生频率，并探讨基因突变伴随的临床特征及对近期预后的影响。方法收集94例初治的正常核型AML病人（M3除外），行NPM1、FLT3基因突变检测。结果94例正常核型AML病人，NPMl基因突变阳性率为40．43％}FLT3内部串联重复突变（FLT3-ITD）阳性率为28．72％；NPM1并FLT3-ITD基因突变阳性率为14．89％；FLT3点突变（FLT3-TKD）阳性率为7．45％。与无突变组相比，NPM1＋／FLT3组发病年龄、外周血白细胞和血小板计数、骨髓原始细胞比例均较高，差异有显著性（t=2．048～2．072，P〈0．05）。NPM1／FLT3-ITD＋组外周血白细胞计数和骨髓原始细胞比例均较无突变组高（f=2．549、2．784，P〈0．05）。NPM1＋／FLT3～组1疗程化疗诱导完全缓解率为87．50％，高于无突变组的63．89％（χ2=4．205，P〈0．05）；NPM1／FLT3-ITD＋。组完全缓解率为53．85％，与无突变组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论NPM1、FLT3基因突变是正常核型AML病人中常见的分子学异常，此两种基因突变检测对AML病人的个体化治疗及预后评估有重要意义。

CD73在NPM1突变型急性髓系白血病患者中的表达及其临床意义

目的:探讨CD73在NPM1突变型及野生型急性髓系白血病(AML)患者中的表达及对其治疗疗效和预后的判断价值。方法:选取2015年6月-2019年6月本院收治的初治AML患者160例,同期选取本院非AML者的骨髓样本40例作为对照,分别比较健康者、NPM1突变型AML及NPM1野生型AML患者中CD73的表达,分析CD73表达与其临床病理特征及疗效的关系,对患者进行随访,进一步分析CD73对不同AML患者预后的影响。结果:CD73在AML患者中的阳性表达率(23.75%)显著高于健康对照组(0.62%),NPM1突变AML患者CD73+表达率(74.75%)显著高于NPM1野生型(25.51%)(P<0.001);AML患者CD73+表达与年龄、FAB分型、疾病危险程度分级及NPM1基因突变状况有关(P均<0.05);NPM1基因突变AML患者总体生存率为75.98%,显著高于NPM1野生型AML患者的34.68%(P<0.001),NPM1基因突变AML患者中CD73+组中位生存时间为21个月,显著长于CD73-组患者的11个月(P<0.001),NPM1野生型AML患者中CD73+组中位生存时间为13个月,显著短于CD73-组患者的18个月(P<0.001)。结论:CD73在NPM1基因突变AML患者中表达增加,CD73在不同NPM1基因突变型AML患者中有不同的预后意义。结合AML患者临床病理特征、CD73表达及NPM1基因情况有助于判断其预后,并指导有关治疗方案的制定。

初诊急性髓系白血病NPM1突变患者临床特征的研究

本研究探讨急性髓系白血病(AML)患者NPM1基因第12外显子突变的临床特点及其与FLT3-ITD和IDH1突变的相互关系。收集AML患者骨髓标本,收集患者的临床资料,按WHO标准诊断分型。抽提基因组DNA,采用PCR后测序方法检测NPM1突变。结果表明,对389例AML的标本检测发现,NPM1突变的发生率为14.1%(55/389);FLT3-ITD突变的发生率为14.7%(57/389),IDH1突变的发生率为6.4%(25/389)。在AML1-ETO、PML-RARA和CBF-MYH11融合基因的AML中没有发现NPM1突变,NPM1突变组FLT3-ITD和IDH1突变的发生率分别为29.1%和12.7%,显著高于NPM1未突变组的12.3%和5.4%。NPM突变易于发生在正常核型AML中,发生率为26.5%(35/132)。NPM1突变的AML具有发病年龄偏大、血小板数高、易于发生在AML-M5、CD34阳性比例低、易于与FLT3-ITD和IDH1突变伴发等临床特点。NPM1突变阴性组的1个疗程CR率为69.8%,NPM1突变阳性组的1个疗程CR率为72.2%,两组之间无统计学差异(P=0.07)。结论:NPM1突变的AML具有独特的临床特点,易于与FLT3-ITD和IDH1突变共存,而不会与AML1-ETO、PML-RARA和CBF-MYH11融合基因共存。

NPM1突变阳性AML患者化疗后早期微小残留病水平与预后的关系

目的:分析NPM1基因突变阳性的急性髓系白血病(AML)患者经化疗后,早期微小残留病水平与患者预后状况的相关性。方法:收集本院112例NPM1基因突变阳性的初诊成人AML患者的临床资料,分析患者化疗后NPM1基因突变转录本水平与患者预后状况的相关性。结果:在112例AML患者中,初诊时NPM1基因突变转录本中位水平为83.68%(5.86%-486.57%),FLT3-ITD突变阳性44例(39.29%),染色体核型异常22例(19.64%),完全缓解96例(85.71%);多因素Logistic回归分析结果发现,初始诱导治疗方案和白细胞计数(WBC)与完全缓解密切相关(P<0.05)。在112例患者中,中位随访时间为22(3-36)个月,3年总生存率为66.07%;多因素Logistic回归分析发现,在初次获得完全缓解时微小残留病高水平、巩固治疗后微小残留病高水平是患者总生存期的独立危险因素(P<0.05)。结论:在NPM1基因突变阳性的成人AML患者中,化疗后微小残留病早期高水平与患者预后不良密切相关。

PCR结合DNA测序技术检测急性白血病FLT3与NPM1基因突变及其临床意义

目的研究成人急性白血病(AL)患者FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)及核仁磷酸蛋白(NPM1)基因突变发生情况及临床意义。方法采用PCR结合DNA测序技术分析65例初诊急性白血病(AL)患者骨髓单个核细胞中FLT3及NPM1基因突变发生情况。结果在59例急性髓系白血病(AML)患者中检测到FLT3-ITD突变阳性10例(16.9%),NPM1突变阳性15例(25.4%),其中3例同时存在FLT3-ITD突变及NPM1基因突变;而在6例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者中均未检测到FLT3-ITD突变或NPM1基因突变。两种突变均与初诊时中位WBC数、染色体正常核型比例及伴有特异性融合基因患者比例有相关关系(P<0.05)。FLT3-ITD+AML患者初诊时骨髓原始细胞比例高(P<0.05),单纯NPM1+AML患者初诊时表现为BPC较高(P<0.05)、免疫表型CD34阳性患者比例低(P<0.05);FLT3-ITD突变阳性者化疗后有低缓解率趋势。结论 FLT3-ITD突变和NPM1基因突变是AML患者常见的基因突变类型。对初诊时高白细胞计数、血小板计数不低、骨髓原始细胞比例高、CD34阴性表型和正常核型的AML患者检测FLT3-ITD突变和NPM1突变,有利于临床判断预后和指导治疗。

麦洼牦牛NPM1基因的克隆及生物信息学分析

采用分子克隆技术获得麦洼牦牛NPMl基因编码区序列，并通过普通PCR法检测NPM1基因在麦洼牦牛各组织中的表达分布，同时采用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白的基本理化性质进行预测分析。结果表明：麦洼牦牛NPM1基因包含一个长度为885bp的开放阅读框，编码294个氨基酸，与普通牛NPM1基因序列的的同源性为99．4％，且与家犬（93．1％）、人（93．2％）也有较高同源性。根据DNAStar翻译出氨基酸序列，发现麦洼牦牛NPM1基因编码氨基酸序列第239位和261位发生了突变，分别由R变为K和L变为P；所编码的蛋白属于亲水性蛋白，二级结构主要有α-螺旋和无规卷曲；Interpro在线工具对牦牛NPM1基因编码蛋白进行结构域预测，第12～118位间有完整的核质蛋白核心结构域。系统进化树表明麦洼牦牛与黄牛、家犬及人遗传距离最近。

老年急性非早幼粒细胞白血病NPM1及FLT3-ITD基因突变特征及临床意义

目的:探讨老年急性非早幼粒细胞白血病(non-acute promyelocytic leukemia,non-APL)NPM1及FLT3-ITD基因突变特征及临床意义。方法:回顾性分析本院2011年1月至2018年6月接受NPM1、FLT3-ITD基因突变检测的98例老年non-APL患者临床资料,统计NPM1、FLT3-ITD基因突变阳性率,分析不同核型non-APL患者NPM1、FLT3-ITD基因突变情况,并比较NPM1/FLT3-ITD基因突变阳性与阴性患者性别、年龄、白细胞、血小板、血红蛋白、骨髓原始细胞、CD34^+、CD117^+的关系。结果:NPM1基因突变阳性20例,占20.41%;FLT3-ITD基因突变阳性15例,占15.31%; NPM1、FLT3-ITD基因突变双阳性5例,占5.10%。正常核型38例,占38.78%,正常核型患者NPM1、FLT3-ITD基因突变阳性率及双阳性率均显著高于异常核型者(P<0.05)。NPM1基因突变阳性患者白细胞计数、血小板计数均显著大于NPM1基因突变阴性者,CD34+比例显著小于NPM1基因突变阴性者(P <0. 05); FLT3-ITD基因突变阳性患者白细胞、骨髓原始细胞均显著大于FLT3-ITD基因突变阴性者(P <0. 05)。NPM1基因突变阳性患者1疗程CR率、总CR率均显著高于NPM1基因突变阴性者(P <0. 05); FLT3-ITD基因突变阳性患者1疗程CR率、总CR率均显著低于FLT3-ITD基因突变阴性者(P <0. 05)。结论:对老年non-APL患者行FLT3-ITD及NPM1基因突变检测,可指导临床治疗及疗效评估。

慢性粒细胞白血病患者Wnt5a基因及NPM1基因的表达及其意义

目的:通过检测慢性粒细胞白血病的骨髓细胞中Wnt5a基因及NPM1基因的表达,探讨其相关性及意义。方法:选择在本院住院的慢性粒细胞白血病患者60例作为实验组,包括急变期、加速期、慢性期各20例,良性血液病患者60例作为对照组,培养骨髓细胞,通过RT-PCR方法进行检测,分析Wnt5a基因及NPM1基因的表达及其意义。结果:实验组三个亚组与对照组比较,Wnt5amRNA半定量均值、阳性率均较低,NPM1mRNA阳性率、中位表达水平均较高,差异有统计学意义(P<0.05);实验组三个亚组中,急变期与加速期、慢性期间比较,Wnt5amRNA半定量均值、阳性率均较低,NPM1mRNA阳性率、中位表达水平均较高,差异有统计学意义(P<0.05);Wnt5a、NPM1的表达水平与患者的白细胞计数、骨髓原始细胞数相关,差异有统计学意义(P<0.05);与年龄、血红蛋白含量、血小板计数无关,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Wnt5a基因及NPM1基因与慢性粒细胞白血病的发生、发展有一定的相关性,Wnt5a基因可能抑制其发生,而NPM1基因阳性促进其进展,这可能成为慢性粒细胞白血病诊断、治疗、分析预后的新方式,为临床提供理论依据。

急性髓系白血病患者FLT3-ITD和NPM1基因突变表达及在判断预后中的意义

目的探讨急性髓系白血病（AML）患者Fms样酪氨酸激酶-3基因（FLT3）和核仁酸蛋白基因（NPM1）基因突变情况及与预后的关系。方法回顾性分析2010年1月至2013年6月间收治的135例AML患者的资料,检测其FLT3-ITD和NPM1基因,并进行标准方案诱导缓解及缓解后巩固强化化疗。随访6~34个月,观察预后情况,并进行统计学分析。结果 FLT3-ITD阳性患者41例（30.4%）;NPM1阳性62例（45.9%）;NPM1和FLT3-ITD双阳性5例。与FLT3-ITD突变阴性患者相比较,单独FLT3-ITD突变阳性组完全缓解（CR）率和总体生存（OS）率明显降低,复发率明显升高（P〈0.05）,无复发生存（RFS）中位时间缩短,但组间差异无统计学意义。与NPM1突变阴性组相比较,单独NPM1阳性组的CR率和OS率显著升高,复发率显著降低（P〈0.05）,RFS中位时间延长,但两组间差异无统计学意义。结论 FLT3-ITD和NPM1基因突变在急性髓系白血病患者中很常见,FLT3-ITD突变阳性预后较差,而NPM1突变阳性预后良好。通过对AML患者FLT3-ITD及NPM1突变,可以对预后进行判断,并对治疗具有指导作用。

急性髓系白血病NPM1和FLT3基因突变与临床特点的关系

目的研究伴有NPM1和FLT3-ITD突变基因急性髓系白血病患者的临床特点。方法对67例初诊AML患者进行NPM1基因突变和FLT3-ITD基因突变检测,比较其结果。结果 NPMl突变阳性患者占所有AML患者的10.4%,占核型正常AML患者的26.1%;FLT3-ITD基因突变阳性占所有AML患者的10.4%,占核型正常AML患者的17.4%。NPMl突变阳性患者和NPMl突变阴性患者相比,初诊时血小板、AML-M5比例、CD34阳性患者比例、染色体核型正常比例、伴有特殊融合基因患者的比例、伴有FLT3-ITD突变阳性患者的比例等指标差异均有统计学意义。而FLT3-ITD基因突变阳性患者就诊时白细胞数和骨髓原始细胞比例明显高于阴性患者。结论对初诊时核型正常AML患者检测NPM1和FLT3-ITD基因突变,有利于预后评估和指导治疗。