利用 Genescan 分析 TCRVβ 亚家族CDR3长度的方法检测AML的T细胞克隆性

分析急性髓性白血病（ＡＭＬ）的Ｔ细胞克隆性，方法利用反转录一多聚酶链反应（ＲＴ┐ＰＣＲ）法分析５例ＡＭＬ、８例正常人的外周血单个核细胞和Ｔ细胞株Ｊｕｒｋａｔ的Ｔ细胞受体ＴＣＲＶβ２４个亚家族的互补决定区３（ＣＤＲ３）长度，ＰＣＲ产物进一步进行基因扫描（ｇｅｎｅｓｃａｎ）和核苷酸序列分析。结果ＲＴ┐ＰＣＲ分析显示８例正常人外周血单个核细胞除Ｖβ２０外，存在各Ｖβ亚家族的Ｔ细胞，而５例病人则仅存在部分亚家族的Ｔ细胞，Ｊｕｒｋａｔ细胞则仅表达Ｖβ８亚家族，基因扫描分析显示３例病人的个别亚家族产物呈一主峰图像，而对照组８例正常人的全部Ｖβ产物均显示为多峰图像，Ｊｕｒｋａｔ细胞的Ｖβ８家族ＰＣＲ产物呈单峰。结论ＡＭＬ病人外周血存在克隆性生长Ｔ细胞，这可能是宿主对白血病相关抗原的直接反应。该方法可以作为一种新的临床研究方法用于检测微小残留病变。

PCR-GeneScan法检测遗传性聋相关基因GJB2 235 delC和mtDNA A1555G突变

目的:检测GJB2 235delC杂合突变和mtDNA A1555G突变。方法:对120例样本进行诊断试验,其中测序GJB2 235delC杂合突变样本16例,mtDNA A1555G突变17例。用PCR方法对目标片段进行扩增,PCR产物在3100DNA sequencer(ABI)上聚丙烯酰胺胶毛细管电泳,GeneScan、GeneMarker软件数据分析。结果:120例样本均得到检测结果,检出GJB2 235delC杂合突变样本17例,mtDNA A1555G突变17例,1例正常样本误诊为235delC杂合突变而出现假阳性。结论:PCR-GeneScan技术可以同时检测2种不同基因的突变,单管多重PCR和GeneScan荧光标记法结合是同时检测多种突变一种新的思路,而且可能是一种有效的方法。

STR基因座荧光标记复合扩增检测及其法医学应用

目的建立荧光标记复合扩增检测4个STR基因座的方法,应用于法医学亲权鉴定与个人识别。方法用6-FAM标记D3S1754引物,HEX标记D4S2366和D12S375引物,TMR标记D1S549引物,PCR复合扩增,310基因分析仪电泳自动收集电泳结果数据,GeneScanAnalysisSoftware3.7NT计算扩增产物片段相对大小,Genotyper誖3.7NT软件进行样本基因型分型。将该方法应用于法医学亲权鉴定与个人识别。结果建立了荧光标记复合扩增检测4个STR基因座基因型的方法,具有良好的稳定性和较好的灵敏度,分型结果准确。结论研究建立的方法操作简便,分型结果稳定可靠,可用于遗传多态性研究和法医学亲权鉴定与个人识别。

应用30个常染色体STR位点研究中国6个民族群体的遗传关系

利用３０个荧光标记的人类常染色体ＳＴＲ位点的引物，对中国白族、纳西族、土族、撒拉族、山东汉族、畲族６个民族进行了多重ＰＣＲ扩增，产物在ＡＮＩ ３７７测序仪上进行变性聚丙烯酸胺凝胶电泳和基因扫描及分型，然后用Ｓｈｒｉｖｅｒ的Ｄｅｗ法计算遗传距离，用Ｗｅｉｇｈｂｏｒ－Ｊｏｉｎｉｎｇ法和ＵＰＧＭＡ法构建了系统发生树，结合有关资料分析了它们之间的遗传关系。结果揭示：撒拉族与土族的遗传距离较接近，为０．０３３，但与其余４个民族的距离则较远，均大于０．１２；土族 与纳西族和山东汉族的距离较近，分别为０．０３８、０．０６３；白族与山东汉族的距离最近，仅为０．００７，而与纳西族相近却有０．０７５的距离，与土族的距离也较远，为０．１１２；纳西族和山东汉族 之间存在着０．１００的遗传距离；畲族与其他５个民族群体的距离均超过了０．１２，关系较远。在 构建的系统发生树中，纳西族、撒拉族和土族聚成一簇，汉族、白族聚成一簇，畲族单独为一 枝。这一结果与它们的地理分布和民族历史基本上是一致的，并可为结合历史和考古资料综 合分析这６个民族的起源、迁移、形成和发展提供遗传学依据。

云南白族STR遗传多态性研究

目的 研究我国白族STR遗传多态性。方法 通过STR复合扩增、基因扫描、基因分型调查了 98名中国白族无关个体 1 5个STR基因座等位基因分布情况。结果 共检出 1 3 4个STR等位基因 ,其频率分布在 0 .0 0 5 8～ 0 .5 799之间 ,杂合度 (H)为 0 .5 83 4～ 0 .882 8,个体识别力 (DP)为 0 .773 9～ 0 .9666,非父排除率 (EPP)为 0 .5 692～ 0 .8694,多态信息量 (PIC)为 0 .5 3 1 7～ 0 .8694。结论 为进一步研究中华民族STR遗传结构奠定了基础 ,在人类学。

中国东乡族9个STR基因座遗传多态性研究

选择 9个STR基因座 ,采用四色荧光标记STR基因扫描技术 ,对中国甘肃省特有民族———东乡族的群体遗传多态性进行研究。同时检测 94个无关个体血液样本 ,共检出 72种等位基因 ,基因频率的分布在 0 .0 0 5 3～0 .5 82 5之间 ;检出 182种基因型 ,基因型频率分布在 0 .0 10 6～ 0 .2 6 6 0之间 ;9个STR位点基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律 (P >0 .0 5 )。 9个STR位点多态信息量 (polymorphisminformationcontent,PIC)均大于0 .6 378,杂合度 (heterozygosity ,H)均大于 0 .6 5 0 0 ,个体识别力 (discriminationpower ,DP)均大于 0 .82 16 ,非父排除率 (probabilitiesofpaternityexclusion ,PPE)均大于 0 .490 3。种族比较结果显示 ,甘肃东乡族与白种人及黑种人在绝大多数位点存在显著差异 (P <0 .0 5 ) ,而 9个STR位点与汉族群体的遗传差异均不显著 (P >0 .0 5 )。研究结果丰富了中华民族基因数据库 ,在人类群体遗传学及法医学研究领域有重要应用价值。

云南怒族STR基因座遗传多态性研究

本文选择 9个STR基因座和Amelogenin基因座 ,利用基因测序 ,采用基因扫描技术 ,对云南怒族聚集地区84名无关个体血样进行研究 ,建立了云南怒族 9个STR基因座的基因频率数据库。用 χ2 检验 ,9个STR基因座基因型分布符合Hardy -Weinberg平衡定律。与其他民族资料一样 ,本课题所获得的云南怒族 9个STR基因座数据是一组有价值的DNA多态性遗传标记资料。

食品中转基因成分的检测

本研究建立了从多种精加工和深加工食品中提取 DNA的简便、易操作的方法。根据转基因农作物最常使用的外源基因设计引物，采用荧光 PCR－ GeneScan技术，在食品中检测出 35S启动子、 NOS终止子、 nptII标记基因以及目的基因 Cry和 EPSPS等转基因成分，并对 PCR产物进行测序或酶切分析确认，防止假阳性。

微卫星三重PCR基因扫描技术在中国明对虾家系标识中的应用

在开发中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)微卫星引物的基础上,利用3对微卫星引物,克隆编号分别为H081、RS0683和RS1101,构建中国明对虾的三重PCR稳定扩增体系。在此基础上,进一步利用荧光标记引物的基因扫描技术(Genescan)对利用精荚移植技术建立的中国明对虾7个半同胞家系和16个全同胞家系进行识别研究。结果表明,该项技术可以准确地把7个半同胞家系的子代个体间、16个全同胞家系的子代个体间以及总的31个全同胞家系的子代个体间区别开,且能准确把这些家系产生的任意子代个体定位到各个家系。该技术可以满足大批量家系材料样本的分析,具有较好的应用价值。[中国水产科学,2007,14(1):59-66]

中国阿昌族九个STR基因位点遗传多态性研究

采集云南阿昌族 1 0 0个无关个体血样 ,研究该民族 9个STR位点和Amelogenin基因位点。采用四色荧光标记STR基因扫描技术 ,同时检测 96个样品 ,建立云南阿昌族 9个STR位点的基因频率数据库。共检测出 69种等位基因 ,其频率分布在 0 .0 0 5 0～ 0 .61 0 0 ;1 66种基因型 ,其基因型频率分布在 0 .0 1 0 0～ 0 .390 0。平均H为 0 .7381 ,累积DP为 0 .9999999,EPP为0 .9999989。 9个STR位点基因型分布符合Handy Weiberg平衡定律。为建立我国不同民族STR基因数据库奠定了基础 ,将在人类学、法医学和民族学领域发挥重要的应用价值。

中国瑶族人群(广西)9个STR基因多态性研究

采用STR基因扫描技术选择D3S1358,υWAWA,FGA,THO1,TPOX,CSF1P0,D5S818,D13S317和D7S820 9种STR基因座,研究我国瑶族人群STR遗传多态性。在瑶族群体中9个STR基因座共检出61个等位基因,其频率分布在0.0054～0.5924,平均杂合度为0.7357,多态信息量为0.6887,累积个体识别率为2.02×10-10,非父排除率为0.9999。结果表明,在人类遗传学、法学科等领域建立本民族本地区遗传学资料是十分重要和必不可少的。

甘肃裕固族9个STR基因座遗传多态性研究

目的 研究中国甘肃裕固族STR遗传结构。方法 选择 9个STR基因座 (D3S135 8,VWA ,FGA ,TH0 1,TPOX ,CSF1PO ,D5S818,D13S317,D7S82 0 ) ,采用STR复合扩增及荧光标记STR基因扫描技术 ,同时检测 12 0个裕固族健康无关个体血液样本。结果 9个STR基因位点共检出 6 5个等位基因 ,基因频率分布在 0 .0 0 5 7～0 .5 795 ;基因型共有 178种 ,频率分布在 0 .0 114～ 0 .30 6 8之间 ;9个STR位点基因型分布均符合Hardy Weinberg平衡定律 (P >0 .0 5 ) ;9个STR位点多态信息量 (PIC)均大于 0 .6 0 5 4 ,杂合度 (H)均大于 0 .6 15 8,个体识别力 (DP)均大于 0 .82 2 6 ,非父排除率 (EPP)均大于 0 .5 0 17。结论 获得了中国甘肃裕固族 9个STR基因座的遗传多态性数据 ,丰富了中华民族基因数据库 ,在人类群体遗传学及法医学研究领域有重要应用价值。

中国汉族人群(西安)STR基因扫描与遗传结构

选择9种STR基因位点和Amelogenin基因位点，以测序为基础，研究我国汉族人群STR遗传结构。采用基因自动测序仪建立了10个位点基因分析方法，通过对汉族群体的基因扫描、基因分型和遗传结构分析，获得了STR基因传递特征的大量基因遗传数据，在汉族人群DP为1．05X10－10，EPP为0．9998，为建立我国不同民族STR基因数据库、基因资源研究与保护奠定了基础，为生物考古、基因诊断、性别鉴定、个人识别，司法审判、侦察破案提供有力的科学依据。

AML-M1相关TCR Vβ克隆性增殖T细胞的研究

目的 了解急性髓细胞白血病M1亚型 (AML M1 )患者外周血TCRVβ亚家族T细胞的克隆性分布特点。 方法采用RT PCR扩增 9例M1患者外周血的单个核细胞的TCRVβ2 4个亚家族基因 ,分析其TCRVβ亚家族的利用情况。PCR产物进一步经基因扫描分析 ,了解其CDR3长度以判断T细胞的克隆性。结果 不同标本中可检测到 2～ 5个Vβ亚家族T细胞 ,以Vβ2、Vβ3、Vβ1 7和Vβ1 9为常见 ,并在Vβ2、Vβ3、Vβ5、Vβ8、Vβ9和Vβ1 9中发现克隆性生长T细胞。结论 M1病人外周血TCRVβ亚家族T细胞表达呈现明显的选择性和克隆性增殖情况 ,这可能与M1细胞相关抗原有关 ,且克隆性增殖Vβ亚家族分布以个体特异性为主。

利用基因扫描分析TCR Vβ亚家族的CDR3长度方法检测T细胞克隆性

分析了健康人、Ｔ－ＡＬＬ外周血及Ｔ细胞株Ｍｏｌｔ－４和Ｊｕｒｋａｔ中ＴＣＲＶβＴ细胞的表达和克隆性。应用ＲＴ－ＰＣＲ扩增ＴＣＲＶβ２４个亚家族的ＣＤＲ３，并经基因扫描和序列分析确定Ｔ细胞克隆性。结果表明健康人表达除Ｖβ２０外的多克隆Ｔ细胞；Ｔ－ＡＬＬ仅表达３～４个Ｖβ亚家族Ｔ细胞；部分呈寡克隆性；Ｍｏｌｔ－４和Ｊｕｒｋａｔ分别表达Ｖβ２和Ｖβ８单克隆Ｔ细胞。Ｔ－ＡＬＬ中存在克隆性生长Ｔ细胞。该方法是检测Ｔ细胞克隆性的敏感和精确的方法。

苯接触工人外周血T细胞受体TCRV_β亚家族基因多态性分析

目的 了解苯接触工人外周血TCRVβ 亚家族T细胞的分布及其克隆性 ,寻找防治苯中毒的免疫指标。方法 采用RT PCR扩增 6例不同工龄低浓度苯接触工人外周血单核细胞的TCRVβ2 4个亚家族的互补决定区 3(CDR3) ,产物进一步经基因扫描分析确定T细胞的克隆性 ,并与 8名健康人作对照。结果 8名健康者表达全部Vβ 亚家族 ,PCR产物呈多峰图像 (多克隆 )。苯接触工人随工龄不同 ,外周血损伤的情况不同而出现Vβ 表达减少 ,PCR产物出现寡克隆或双克隆改变。结论 低浓度苯接触工人的外周血T细胞的TCRVβ 亚家族表达出现限制性 ,部分Vβ 亚家族呈克隆性增殖 ,可能由于苯损害T细胞而造成机体免疫的不同改变。

9号染色体短臂上7个STR基因座在基因扫描中的信息表现

为了初步探讨7个位于染色体9p区域的短串联重复序列(shorttandemrepeat,STR)基因座:D9S288、D9S157、D9S1748、D9S171、D9S161、D9S1817和D9S1805在遗传学研究及法医学应用中的意义,随机抽取225名湖南汉族无关个体,复合PCR技术扩增上述基因座,ABI377全自动测序仪进行基因分型,共检出75种等位基因,通过对基因型及等位片断频率分布的研究和数据统计分析,7个基因座基因频率分布在0.002～0.800之间,构成243种基因型。7个STR基因座基因型分布均符合Hardy Weinberg平衡定律(P>0.05),杂合度(heterozygosity,H)介于0 347～0.844之间,个体识别力(discriminationpower,DP)为0.346～0.841,非父排除率(probabilitiesofpaternityexclusion,PPE)为0.308～0.738,多态信息含量(polymorphicinformationcontent,PIC)在0.328～0.822之间。种族比较结果显示,湖南汉族与非洲黑人及欧洲白人在大多数基因座均存在显著差异(P<0.001)。研究结果丰富了中华民族基因数据库,在人类群体遗传学及法医学研究领域有重要应用价值。

Jurkat细胞TCR基因重排对BV CDR3的影响

目的探讨Jurkat细胞TCRBD2-BJ2基因重排对TCRβ链可变区互补决定区3(BVCDR3)可能产生的影响,为深入研究TCR基因重排奠定实验基础。方法RT-PCR扩增TCRBV26个亚家族CDR3区,结合TCR基因扫描(GeneScan)和基因测序技术,监测Jurkat细胞在增殖传代过程中以及在T细胞激活剂和超抗原SEA等刺激诱导后TCRBVCDR3谱系漂移及长度和序列变化。结果表达TCRBV8家族的单克隆细胞株Jurkat,在增殖传代过程中,以及经刺激诱导48或72h后,未监测到有TCRBV8以外的新的BV亚家族出现,BV8CDR3长度和一级核苷酸序列也未发生变化。结论Jurkat细胞发生的TCR基因重排可能不引起TCRBVCDR3改变,因而对TCRBVCDR3区抗原识别特异性(即抗原特异性漂移)并未产生影响,但并不排除TCR发生改变的可能性。

超抗原SEA联合PML-RARα对外周血T细胞TCR Vβ亚家族基因表达的影响

目的探讨超抗原SEA联合PML-RARα多肽对外周血T细胞TCR Vβ亚家族基因表达的影响。方法分别将SEA、PML-RARα多肽以及SEA联合PML-RARα多肽与正常人外周血单个核细胞共同培养,20d后收集增殖细胞,利用RT-PCR及基因扫描技术分析诱导后增殖T细胞TCRVβ亚家族的利用和克隆性增殖的特点。结果单纯SEA诱导后,T细胞表达了11个TCR Vβ亚家族,且仍为多克隆增殖。单纯PML-RARα多肽诱导后,T细胞限制性表达8个Vβ亚家族,其中Vβ13、Vβ14表现出寡克隆或寡克隆趋势。PML-RARα多肽联合SEA共同诱导,其T细胞表达TCR Vβ亚家族依然呈明显的限制性,且Vβ13、Vβ14亚家族呈寡克隆、双克隆及寡克隆趋势。结论SEA能协同PML-RARα多肽诱导的T细胞克隆性活化与增殖。

白假丝酵母菌基因型和假丝酵母菌群分布与外阴阴道假丝酵母菌病严重程度的相关性分析(英文)

探讨致病假丝酵母菌菌群分布以及白假丝酵母菌基因型与外阴阴道假丝酵母菌病症状严重程度的关系。方法我们对2009年9月~2010年10月在我院就诊的,以及生活习惯、饮食、既往用药及工作环境相似的急性VVC患者,利用聚合酶链反应-单链构象多态性分析技术（PCR-SSCP）对其阴道来源的假丝酵母菌进行分子水平的菌种鉴定,结合SSCP和基因扫描（GeneScan）对白假丝酵母菌CAI区进行多态性分析确定其基因型,对VVC的严重程度进行临床症状体征的评分。结果从获得的198份标本中分离白假丝酵母菌140株（70.7%）;58株非白假丝酵母菌（29.3%）。198名患者中重度VVC 95人,轻中度VVC 103人。白假丝酵母菌在重度VVC和轻中度VVC患者中所占比列分别为62.1%和76.6%（P=0.011）。140株C.albican共检出38种CAI基因型且集中分布于少数几种,其中基因型30-45（44株,31.43%）和32-46（23株,16.43%）最常见,其次为基因型30-46（4株,2.86%）和32-47（9株,6.42%）。以上4种优势基因型菌株在重度VVC和轻中度VVC患者中的分布差异有统计学意义（77.9%vs 42.0%,P〈0.001）。结论白假丝酵母菌仍然是VVC的主要致病菌,但非白假丝酵母菌与白假丝酵母菌相比更容易引起重度VVC,白假丝酵母菌的基因型与VVC严重程度有关。