黑色素瘤中癌基因B-Raf^(V600E)对B-Raf/ERK/Mps1负反馈抵抗作用的机制

目的明确癌基因B-RafV600E在Mps1和B-RafWT/MEK/ERK通路之间自动调节的负反馈回路中抵抗作用的具体机制。方法 (1)Sbcl2转染B-RafWT和Mps1-KD,Western blot方法检测p-ERK水平;(2)向B-Raf野生型SK-MEL31、Sbcl2、WM35细胞及V600E突变型SK-MEL28、A375细胞中过表达Mps1,Western blot方法检测p-ERK水平;(3)在SK-MEL31、Sbcl2、WM35细胞中敲低AKT,转染Mps1,Western blot方法检测p-ERK水平;(4)在SK-MEL31、Sbcl2、WM35细胞中敲低内源性B-Raf,过表达外源性RafV600E,Western blot方法检测p-AKT水平;敲低SK-MEL-28、A375细胞中RafV600E,Western blot方法检测p-A K T水平。结果 (1)M p s 1激酶和B-RafWT/MEK/ERK通路之间的自动负反馈通路不依赖Mps1激酶的活性;(2)在野生型SK-MEL31、Sbcl2、WM35细胞中外源性Mps1的表达可诱导AKT磷酸化,抑制ERK活性;V600E突变型SK-MEL28、A375细胞中外源性Mps1的表达不能诱导AKT磷酸化,亦不影响ERK活性。(3)敲低野生型黑色素瘤细胞中的AKT后,Mps1和B-RafWT/MEK/ERK之间的负反馈作用消失。(4)癌基因B-RafV600E通过抑制AKT的磷酸化,进而抵抗Mps1激酶与B-Raf/MEK/ERK通路之间的负反馈调节作用。结论 Mps1和B-RafWT/MEK/ERK通路之间的自动负反馈通路不依赖Mps1激酶的活性,且癌基因B-RafV600E对B-Raf/MEK/ERK/Mps1负反馈通路的抵抗作用是通过抑制AKT的磷酸化实现的。

BRAF^V600E基因突变与甲状腺乳头状癌临床病理特征的相关性

目的:研究BRAF^V600E基因突变与甲状腺乳头状癌(PTC)的临床病理特征的相关性。方法:325例病理诊断为PTC患者作为PTC组,同期50例甲状腺良性病变患者作为对照组,取2组患者手术切除的病灶组织标本提取DNA,采用实时荧光定量PCR法检测2组标本BRAF^V600E突变情况,分析BRAF^V600E基因突变与PTC组患者临床病理特征的相关性。结果:PTC组患者BRAF^V600E基因突变率明显高于对照组,差异有高度统计学意义(P<0.001);PTC组患者BRAF^V600E基因突变与甲状腺被膜外侵犯、淋巴结转移及伴有桥本氏甲状腺炎的差异均有统计学意义(P<0.05),BRAF^V600E突变与PTC患者预后相关。结论:BRAF^V600E基因突变与PTC甲状腺被膜侵犯、淋巴结转移及桥本氏甲状腺炎相关,可作为PTC患者预后的判断依据。

癌基因B—RafV600E导致黑色素瘤Sbc12和SK—MEL31细胞染色体不稳定性的分子机制研究

目的 研究癌基因B-RafV600E导致肿瘤细胞染色体不稳定性的分子机制。方法 采用RNAi技术敲除稳定表达B-RafV600E基因的Sbcl2和SK-MEL31细胞中内源性Mps1基因表达，免疫荧光染色技术显示中心体及纺锤体结构。HU-arrest assay观察Mps1基因缺失对癌基因BRAFV600E导致肿瘤细胞中心体过度复制及多极纺锤体形成的影响。结果 未敲除内源性Mps1基因的表达B-RafV600E基因的Sbcl2和SK-MEL31细胞中约有36%出现中心体过度复制及多级纺锤体，但当Mps1基因被敲除后上述异常细胞降低至6%。结论 B-RafV600E可能通过Mps1调控中心体过度复制及多极纺锤体结构的形成，进而影响肿瘤细胞染色体不稳定性及非整倍体细胞的出现。

新型B-Raf激酶抑制剂研究进展

Ras-Raf-Mek-Erk信号转导通路在调控细胞生长,分化和增殖起着至关重要的作用。而Ras或者B-Raf的突变都会导致肿瘤的发生。B-Raf被激活后的体细胞突变率在黑色素瘤中高达50%~70%,卵巢癌中达35%,甲状腺癌中达30%,结肠癌中达10%,因此B-RafV600E作为治疗人类癌症的靶标而日益受到研究者的关注。本综述主要从结构优化对活性的影响上阐述了近两年来新型B-Raf激酶抑制剂的最新研究进展。