以pcD-IL-2为基因佐剂的含日本血吸虫SjFABPc基因真核表达重组质粒裸DNA免疫小鼠的研究

目的 在小鼠模型中评价含日本血吸虫脂肪酸结合蛋白分子基因的真核表达质粒pcD -SjFABPc与含IL - 2基因佐剂的质粒构建体 pCD -IL - 2经肌注、皮内途径导入机体后所诱生的免疫反应。 方法 碱裂解法大量制备重组质粒 pcD-SjFABPc、pCD -IL - 2重组质粒及空质粒 pcDNA3,经肌肉及皮内注射免疫BALB/c小鼠 ,每只鼠注射 10 0 μg ,两周后同量加强免疫一次。分别于末次免疫后的第 2 0d、5 0d及 65d用MTT法检测脾脏T淋巴细胞增殖与NK细胞活性 ,并用双夹心ELISA测定血清细胞因子IL - 2、IFN -γ及IL - 10含量 ;ELISA法测定免疫鼠血清IgG抗体。 结果 NK细胞杀伤活性及脾淋巴细胞增殖测定 ,加佐剂组 ( pcD -SjFABPc联合 pCD -IL - 2组 )较不加佐剂组 ( pcD -SjFABPc组 )NK细胞杀伤及脾淋巴细胞增殖活性皆增加 (P <0 .0 5 )。两途径三次检测IL - 2及IFN -γ值均明显高于NS对照组和空质粒组 ,且加佐剂组的明显高于不加佐剂组的 (P <0 .0 5 ) ;不同途径各组IL - 10值与NS及空质粒对照组的比较则无显著性差别 (P >0 .0 5 )。注射质粒后 2 0d和 5 0d ,未测出抗体 ;免疫后 65d检测 ,pcD -SjFABPc和pcD -SjFABPc联合 pcD -IL - 2免疫组的OD值明显高于对照组 (P <0 .0 1) ,而该两组OD490 值之间无显著性差异 (P >0 .0

基因佐剂注射时相对HBV preS_2S疫苗免疫作用的影响

目的:HBV preS2S基因疫苗接种不同时相应用佐剂pcDNA3·1IL-2/Fc,观察其对诱导免疫反应效果的影响。方法:采用HBV preS2S DNA基因疫苗作为基础免疫,重组质粒pcDNA3·1IL-2/Fc作为佐剂加强免疫,设计实验组与HBVpreS2S基因疫苗同时及在注射BALB/c小鼠后第3天加用佐剂,采用0、2、4周的方案接种,检测各次接种后抗体水平、免疫脾细胞的杀伤活性、增殖活性和细胞因子分泌水平。结果:HBV preS2S注射3天后应用佐剂的免疫小鼠,其抗体滴度、免疫脾细胞杀伤活性、增殖活性和Th1型细胞因子分泌水平均比同时免疫组、单独应用HBV preS2S组及空载体对照组明显增强。结论:预先接种疫苗后加用IL-2/Fc佐剂,能明显增强疫苗免疫效应。

ChIL-2-ChIL-4融合基因重组质粒遗传稳定性研究

为研究大规模生产过程中DH5α/pUC57重组菌携带的表达鸡白细胞介素-2(ChIL-2)和白细胞介素-4(ChIL-4)融合基因质粒的遗传稳定性,探讨其作为鸡球虫活疫苗免疫佐剂的商业化批量生产的潜力,本文通过对重组质粒连续30代传代培养的方式,进行实验室遗传稳定性鉴定。研究结果显示:重组菌在含有氨苄青霉素(Amp+)的溶菌肉汤(LB)平板上传代30次均保持革兰氏阴性(G-),发酵葡萄糖及甘露醇并产生特异现象,但不发酵乳糖;重组菌与大肠杆菌16S rDNA片段的同源性均大于95%,各代重组质粒超螺旋比均大于90%,质粒丢失率均为0;重组质粒的表达产物具有刺激无特定病原体(SPF)雏鸡脾脏淋巴细胞的分化能力。结果表明,ChIL-2-ChIL-4融合基因重组菌和重组质粒30代内结构稳定、分离稳定,能够为扩大生产提供物质支持。

霍乱病毒B亚单位作为基因佐剂对单纯疱疹病毒2型DNA疫苗免疫效果的影响

目的研究霍乱病毒B亚单位(cholera toxin subunit B,CTB)作为基因佐剂对单纯疱疹病毒2型(herpes simplex virus type 2,HSV-2)DNA疫苗pg D免疫效果的影响。方法将CTB片段克隆至真核表达质粒pc DNA3Kan(p Kan)中,构建基因佐剂pc DNA3Kan-CTB(p CTB)。将BALB/c小鼠随机分为p CTB无疫苗组、pg D/p CTB佐剂组、pg D/p Kan空载体组及PBS对照组,经后腿肌肉多点注射,共免疫3次,每次间隔2周。于末次免疫2周后,经小鼠眼球采血,分离血清,ELISA法检测HSV-2特异性Ig G水平及Ig G1、Ig G2a亚型抗体滴度;制备小鼠脾细胞,MTS法检测小鼠脾脏T细胞增殖能力;将病毒稀释后经腹腔接种小鼠,于免疫2周后,进行HSV-2致死剂量攻毒试验。结果p CTB经双酶切及测序鉴定证明构建正确;pg D/p CTB佐剂组小鼠血清中HSV-2特异性Ig G水平明显高于其他3组(P<0.001),Ig G1和Ig G2a滴度均明显高于pg D/p Kan空载体组(P<0.001),其中Ig G2a增幅更明显,Ig G2a/Ig G1比值与pg D/p Kan空载体组相比,由(1.176±0.11)增加至(1.316±0.07)(P<0.05);pg D/p CTB佐剂组小鼠脾细胞在HSV-2刺激下诱导的特异性T细胞增殖反应明显强于PBS对照组及pg D/p Kan空载体组(P<0.05);攻毒14 d内,pg D/p CTB佐剂组小鼠存活率高达100%。结论 p CTB作为基因佐剂能够显著提高pg D诱导小鼠产生抗原特异性Ig G抗体水平,增强HSV-2特异性T细胞增殖反应,并介导以细胞免疫为主的Th1/Th2混合型免疫反应。

嵌合NY-ESO-1 DNA疫苗诱导黑色素瘤小鼠模型抗肿瘤免疫的研究

NY-ESO-1作为一种肿瘤抗原,具有较强的免疫抗原性,并且已成为肿瘤候选疫苗之一。但由于目前大多应用NY-ESO-1多肽以及蛋白质疫苗,其临床试验效果欠佳,亟需更为有效的NY-ESO-1抗原设计的肿瘤免疫治疗出现。该研究的目的是探索将NY-ESO-1与具有增强免疫效应的五种因子分别重组成嵌合蛋白抗原,使其更有效地被加工、转运和呈递,以期找到最佳的基因佐剂,增强NY-ESO-1作为肿瘤治疗性DNA疫苗的免疫效果。采用电脉冲体内细胞高效转入的方法对C57BL/6小鼠进行DNA免疫,发现用编码NY-ESO-1或连接有HSP70的嵌合体质粒免疫可诱导强烈的NY-ESO-1特异性Ig G1反应。NY-ESO-1连接泛素的质粒免疫小鼠主要诱导NY-ESO-1特异性Ig G2a反应,表明此基因佐剂诱导强的Th1免疫反应。与其他嵌合NY-ESO-1质粒免疫相比,NYESO-1连接泛素的质粒免疫小鼠,有效地保护小鼠对有NY-ESO-1表达的B16F10黑色素瘤细胞系的挑战作用,证明强的Th1免疫反应对预防和治疗肿瘤具有重要作用。去除调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)可进一步增强泛素-NY-ESO-1嵌合DNA疫苗治疗黑色素瘤的作用。此外,Ub-NY-ESO-1质粒结合编码异源黑素瘤抗原GP100和TRP-2的质粒免疫可诱导对抗含有NY-ESO-1表达的B16F10黑色素瘤的协同抗肿瘤免疫疗效。该研究结果表明,编码泛素-NY-ESO-1嵌合抗原的质粒DNA疫苗或与编码其他相关黑色素瘤抗原的质粒的联合可能是有效的治疗黑色素瘤的疫苗。