GSP分析仪筛查新生儿疾病的性能验证和应用

目的用全自动荧光免疫分析仪(Genetic Screening Processor,GSP)检测新生儿先天性甲状腺功能减低症(congenital hypothyroidism,CH)和先天性肾上腺皮质增生症(congenital adrenal hyperplasia,CAH)筛查的指标——促甲状腺激素(thyroidstimulating hormone,TSH)和17羟基孕酮(17-OH-progesterone,17-OHP),评估GSP应用于临床的可行性。方法检测美国疾病预防与控制中心(Centers for Disease Control and Prevention,CDC)的滤纸干血片标本和GSP配套试剂盒内质控品,计算GSP的正确度、精密度和线性;检测临床明确诊断的标本,TSH 1 012例(阳性60例,阴性952例)和17-OHP 991例(阳性34例,阴性957例),ROC曲线统计确定初始cut-off值,比对与临床诊断的一致性。结果 TSH和17OHP的批内不精密度分别为6.69%~12.6%和7.52%~9.29%,批间不精密度分别为6.91%~10.96%和6.86%~12.36%;偏移分别为-14.28%^-0.74%和-0.45%~12.54%;检测结果线性良好;初始cut-off值为23.43 U/m L(TSH)和21.42 ng/m L(17-OHP),敏感性为100%,特异性依次为98.11%和99.58%,与临床诊断结果一致性好。结论 GSP作为新生儿疾病筛查领域的首台全自动荧光免疫分析仪,满足实验室要求,可作为常规技术应用于CH和CAH的筛查。

全自动新生儿疾病筛查系统的性能评价

目的对全自动新生儿疾病筛查系统(GSP)进行性能评价。方法按照美国临床实验室标准化协会(CLSI)EP15-A2文件的要求,对新生儿先天性甲状腺功能低下症(CH)、先天性肾上腺皮质增生症(CAH)、苯丙酮尿症(PKU)和葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症4种疾病筛查的对应检测指标——促甲状腺素(TSH)、17-羟基孕酮(17-OHP)、苯丙氨酸(Phe)和G6PD进行检测,评价GSP的精密度、正确度、线性范围等,并与目前临床常规使用的荧光酶免疫分析法(TSH、17-OHP)和荧光法(Phe、G6PD)进行比对。结果 GSP检测TSH、17-OHP、Phe、G6PD批内不精密度和总不精密度均在厂商要求的范围内;与美国疾病预防控制中心(CDC)新生儿筛查室间质评样本靶值的偏移为-8.37%~12.96%,均<1/2允许总误差(TEa)。线性回归方程的截距b为0.83~1.69,r^2>0.95,达到厂商声明的线性要求(r^2≥0.90)。GSP与荧光酶免疫分析法和荧光法的一致性非常好(Kappa值分别为0.83、0.73、0.93和0.97,P<0.001),检测结果高度相关(r值分别为0.97、0.94、0.99、0.91,P<0.001)。结论 GSP的精密度、正确度、线性范围均达到了厂家声明的检测性能,可用于临床检测。

GSP分析仪检测新生儿苯丙氨酸参考限的建立

目的探讨河南地区使用全自动荧光免疫分析仪(Genetic Screening Processor,GSP)检测新生儿高苯丙氨酸血症(hyperphenylalaninemia,HPA)的筛查指标血苯丙氨酸(phenylalanine,Phe)水平时其参考限的建立。方法采用GSP分析仪和目前临床常规使用的Victor2D 1420型荧光免疫分析仪(半自动分析仪)同步检测6204例新生儿血Phe水平并对其进行比较,使用百分位数法建立GSP分析仪筛查HPA时血Phe水平的参考限。结果 GSP分析仪和Victor2D 1420型荧光免疫分析仪对新生儿血Phe水平的检测结果呈显著正线性相关( r =0.393, P <0.001),但成对样本检测结果差异具有统计学意义( t =74.764, P <0.001);GSP分析仪检测血Phe水平时参考限为2.10 mg/dL。结论使用不同仪器设备检测血Phe水平时应分别建立其参考限;GSP分析仪检测时的参考限为2.10 mg/dL,以指导河南地区后续的HPA筛查工作。

应用GSP筛查新生儿G6PDd的性能验证及cut-off值设定

目的对全自动荧光免疫分析仪(GSP)检测干血片葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)的性能进行验证,并初步建立该方法筛查葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症(G6PDd)的cut-off值。方法前期确定验证方案,对试剂盒自带标准品B、D、E 3个浓度的标本,L、H两个浓度的质控品及试剂盒自带标准品B、C、D、E、F 5个浓度标本进行GSP系统的精密度、正确度和线性范围的验证。采用GSP和目前临床常规使用的Victor2D 1420型荧光免疫分析仪(半自动荧光免疫分析仪)同步检测2742例新生儿干血片G6PD水平,比较两种仪器结果,并使用百分位数分布及受试者工作特征(ROC)曲线初步建立中山市博爱医院产前诊断中心GSP筛查G6PDd时G6PD水平的cut-off值。结果应用GSP检测G6PD时,批内变异系数分别为2.09%、1.54%和1.90%,总变异系数分别为3.08%、1.72%和2.12%,分别小于厂家声明的3.40%和3.90%;质控浓度L的25份标本的测量总均值与靶值的相对偏差为3.84%,质控浓度H的25份标本的测量总均值与靶值的相对偏差为3.44%;5个浓度标本的检测值和理论值的线性回归方程为Y=1.0082 X+0.0125,决定系数(R^(2))为0.9991,R^(2)>0.995,线性相关性良好。标本总体P_(5)的G6PD水平为20.10 U/dL。两种仪器的一致性良好。结论GSP应用于中山市新生儿G6PD检测中,精密度、准确度、线性范围均达到了厂家声明的检测性能,可常规用于新生儿G6PDd筛查。该中心初步采用的GSP新生儿G6PDd筛查的cut-off值为20.10 U/dL。

贵州省全自动荧光免疫分析仪筛查新生儿苯丙酮尿症的参考限值研究

目的探讨贵州省新生儿疾病筛查中心使用全自动荧光免疫分析仪(GSP)检测新生儿高苯丙氨酸血症(HPA)和苯丙酮尿症(PKU)筛查指标血苯丙氨酸(Phe)水平时参考限值的建立。方法分析2021年1—12月的样本共计171452份,采用百分位数法建立GSP分析仪筛查HPA时血Phe水平的参考限。结果总体新生儿Phe测定值水平99%可信限为1.88 mg/dl;男女性别组Phe值存在显著性差异,但检测结果99%百分位数时男女性别组新生儿Phe测定值均为1.88 mg/dl;六盘水地区、铜仁地区、黔东南地区、黔西南地区及部分省直医院两两比较发现,各组间的差异均有统计学意义(均P<0.05),检测结果99%百分位数分别是1.88 mg/dl、1.81 mg/dl、1.92 mg/dl、1.96 mg/dl及1.68 mg/dl;冷(10~12月和1~3月)、暖(4~9月)季组Phe测定值存在显著性差异,检测结果99%百分位数分别是1.75 mg/dl、1.98 mg/dl;总体新生儿Phe测定值的中位数0.90 mg/dl:男、女性别组的中位数与总体中位数水平一致,地区组中六盘水地区、铜仁地区、黔东南地区中位数及总体中位数水平基本一致,黔西南地区中位数水平高于总体水平,部分省直医院的中位数低于总体中位数,季节组中冷季的中位数低于总体中位数,暖季的中位数高于总体中位数,性别、地区及冷暖季组的Phe值均存在显著性差异。回归模型差异有统计学意义(F=1836.3,P<0.05),变量间不存在共线性,VIF均<5。纳入模型的3个自变量对PKU差异均有统计学意义(均P<0.05)。男性的Phe值显著低于女性(P<0.05),男性的Phe值比女性低0.008 mg/dl。暖季的Phe值显著高于冷季(P<0.05),暖季的Phe值比冷季高0.158 mg/dl。铜仁地区的Phe值显著低于六盘水地区(P<0.05),铜仁地区的Phe值比六盘水地区低0.009 mg/dl;黔东南地区的Phe值显著高于六盘水地区(P<0.05),黔东南地区的Phe值比六盘水地区高0.011 mg/dl;黔西南地区的Phe值显著高于六盘水地区(P<0.05),黔西南地区的Phe值比六盘水地区高0.047 mg/dl;省直的Phe值显著低于六盘水地区(P<0.05),省直的Phe值比六盘水地区低0.112 mg/dl。性别、季节、地区3个因素中,Phe值受季节影响最大。2021年1月1日—2021年12月31日171452例新生儿检测的数据,共确诊高苯丙氨酸血症6例,其中3男,3女;铜仁地区2例,六盘水地区2例,黔东南地区1例,黔西南地区1例;冷季(10~12月和1~3月)1例,暖季(4~9月)5例,在性别组、地区组中,初筛阳性率和确诊率差异无统计学意义(P>0.05),但在季节组中,暖季初筛阳性高于冷季,同步暖季确诊率也高于冷季,但未查阅到PKU的发病率与季节和温度有关的相关文献,温度和季节是影响Phe参考限值设定的主要因素。结论综合性别、地区及季节因素血Phe的参考限值为1.80 mg/dl。

不同促甲状腺激素切值的确定对广西新生儿先天性甲状腺功能减低症筛查的影响

目的分析不同促甲状腺激素(TSH)切值对广西新生儿先天性甲状腺功能减低症(CH)筛查的影响。方法收集2017年5月至2018年4月广西壮族自治区妇幼保健院遗传代谢中心利用全自动荧光分析仪法(GSP)对83608例新生儿检测的TSH结果,分别用百分位数法和受试者工作特征(ROC)曲线法计算切值,同时与假设切值9.00或10.00mU/L进行比较,分析4种不同TSH切值对CH筛查的影响。结果应用GSP,83608例新生儿TSH检测结果呈现正偏态分布,TSH切值百分位数法[第99百分位数(P99)]为7.96mU/L,可疑阳性836例,确诊CH43例(漏诊6例)、高TSH血症65例(漏诊21例);TSH切值ROC曲线法为6.45mU/L,可疑阳性1480例,确诊CH49例、高TSH血症86例,均无漏诊。当切值为9.00或10.00mU/L时,可疑阳性分别为478、305例,确诊CH分别为37、35例(漏诊分别为12、14例),确诊高TSH血症分别为46、33例(漏诊分别为40、53例)。CH发病率ROC曲线法与百分位数法及假设切值9.00、10.00mU/L时比较,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论利用GSP和ROC曲线法成功确立了广西新生儿CH筛查TSH切值,采用该切值既能保证筛查的准确性,还能避免发生漏诊,降低出生缺陷。

利用GSP筛查新生儿先天性甲状腺功能减低症的性能验证及切值的设定

目的利用全自动荧光免疫分析仪(GSP)检测先天性甲状腺功能减低症(CH)筛查的指标-促甲状腺素(TSH),评估GSP性能,并建立河南地区新生儿CH在GSP上筛查TSH的切值。方法1)通过对美国疾病预防与控制中心(CDC)的滤纸干血片标本的检测,计算GSP的精密度与正确度;检测6个浓度的线性样本计算GSP的线性;2)收集用Victor2D1420检测的1273例新生儿样本在GSP上同步检测TSH,通过配对t检验,分析两种检测结果的一致性;3)采集新生儿足跟血,使用GSP促甲状腺素测定试剂盒检测干血片中的TSH,采用百分位数法和ROC曲线法确定TSH切值。结果1)GSP筛查系统的批内变异系数为4.32%~5.87%;批间变异系数为4.45%~9.08%,均<1/3总误差(TEa);GSP系统检测的偏移为-7.89%~0.12%,指标的偏移小于1/2TEa;线性标本的检测值和理论值的线性方程为y=0.908x-0.915,相关系数的平方(R2)为0.998;2)GSP与Victor2D1420检测的1273例新生儿样本TSH值差异具有统计学意义(t=7.764,P<0.01)。3)百分位数法第99%可信限位为6.1μU/ml;ROC曲线法临界值为6.45μU/ml。结论GSP系统对TSH检测的定量性能可以达到实验室要求,应用于新生儿CH筛查是可行的,但需重新设定切值,切值定在6.1μU/ml。

利用GSP分析仪筛查新生儿先天性肾上腺皮质增生症的性能验证及应用

目的利用GSP分析仪检测新生儿先天性肾上腺皮质增生症(CAH)筛查的指标——血17羟孕酮(17-OHP),分析GSP性能,并比较GSP与AutoDELFIA 1235检测方法的一致性,评估GSP分析仪及检测方法应用于新生儿CAH筛查的可行性。方法 1)检测GSP 17-OHP测定试剂盒3305-0010自带质控品和美国疾病预防与控制中心(Centers for Disease Control and Prevention,CDC)发放的17-OHP室间质评标本,通过计算不精密度、正确度和线性评估GSP筛查CAH的性能;2)收集用AutoDELFIA 1235检测出的可疑阳性样本108例及未检测的新筛样本2 180例,分别用GSP和AutoDELFIA 1235进行检测,分析两种方法的一致性,并比对GSP与临床诊断的一致性;3)通过百分位法统计分析确定初始的切值(cut off值)。结果 1)GSP检测17-OHP的批内和批间精密度分别为3.35%～5.35%和3.07%～6.21%;正确度、线性符合要求;2)GSP和AutoDELFIA 1235筛查CAH的阳性、阴性和总的一致性分别为59.7%、99.8%和97.7%,GSP检测CAH的敏感性和特异性分别为100%、96.93%;(3)GSP筛查CAH时17-OHP的初始cut off值设为12.0nmol/L。结论 1)GSP分析仪的性能满足实验室要求,可应用于新生儿CAH的筛查。2)GSP检测17-OHP与AutoDELFIA 1235相比,其检测方法的特异性更高,检测值更低,GSP应用于CAH筛查需要根据统计结果重新设定新的cut off值。

苏州地区GSP^(TM)检测17α-羟孕酮的性能验证及切值建立

目的评估全自动荧光免疫分析仪GSP^(TM)检测17α-羟孕酮(17α-OHP)的分析性能,并初步建立应用于先天性肾上腺皮质增生症(CAH)筛查的17α-OHP切值。方法通过检测试剂盒自带标准品B/D/E三个浓度、试剂盒自带高、低水平质控品,和试剂盒自带的A-E六个浓度的标准品,分析GSP^(TM)系统的精密度、正确度和线性范围。检测临床新生儿血片样本3063例,以99.5%百分位数的17α-OHP水平暂定为初始切值。结果 GSP^(TM)筛查系统检测B/D/E中17α-OHP批内变异系数为3.98%~5.97%,均小于厂家声明的8.7%;批间变异系数为4.32%~8.52%,均小于厂家声明的9.2%。GSP^(TM)系统检测的低、高质控品浓度平均值分别为20.65 nmol/L和140.67 nmol/L,都在试剂盒声明的允许范围之内。线性标本的检测值和理论值的线性方程为y=1.1196x-1.7049,相关系数的平方(R2)为0.9998。GSP^(TM)系统TSH测定浓度值与1235系统的测定值之间呈现显著的正相关,Spearman r=0.615,P<0.001。GSP^(TM)筛查系统检测结果99.5百分位数的17α-OHP水平为15.50nmol/L。结论GSP^(TM)系统对17α-OHP的定量性能符合厂家声明的要求,应用于新生儿CAH筛查是可行的。本中心初步采用的GSP^(TM)筛查新生儿CAH的17α-OHP切值为15.50nmol/L。

探讨在GSP分析仪上进行新生儿先天性甲低TSH筛查切值设定的意义

目的探讨中山地区使用全自动荧光免疫分析仪(GSP)进行新生儿先天性甲状腺功能减低症(CH)筛查时促甲状腺激素(TSH)切值设定的意义,以指导后续的筛查工作。方法收集中山地区2017年5月11日至2018年12月在我院新生儿疾病筛查中心用全自动荧光免疫分析仪检测的81 827例新生儿干血斑标本中的TSH值,分别采用百分位数法和应试者操作特征曲线(ROC曲线)法计算切值,并对不同切值下确诊患儿的数据进行分析。结果中山地区新生儿TSH值呈正偏态分布,百分位数法计算的最佳切值P99为8.13 mIU/L,ROC曲线法计算的最佳切值为9.30 mIU/L,灵敏度为1,特异性为0.995,约登指数0.995,曲线下面积为0.999,99% CI为0.998-0.999 mIU/L。结论根据百分位数法和ROC曲线法算出的最佳切值,结合本地区实际情况,本研究认为使用GSP分析仪进行中山市新生儿TSH筛查时选用8.50 mIU/L的切值为较为合适。

全自动荧光免疫分析仪GSPTM检测新生儿血斑G6PD性能验证

目的对全自动荧光免疫分析仪GSPTM检测新生儿血斑G6PD的性能进行评估。方法参考《中华人民共和国卫生行业标准》WS/T 420-2013中临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证,依据CLIA88要求,通过检测试剂盒自带标准品B/C/E三个浓度、试剂盒自带高水平质控品、低水平质控品和试剂盒自带的B-F五个浓度的标准品,分析GSPTM系统的精密度、正确度和线性范围。结果GSPTM筛查系统检测B/C/E中G6PD批内变异系数为1.53%~1.76%,小于厂家声明的3.4%;批间变异系数为1.96%~2.15%,小于厂家声明的3.9%。GSPTM系统检测的低、高质控品浓度平均值分别为15.90U/dL和53.01U/dL,都在试剂盒声明的允许范围之内。线性标本的检测值和理论值的线性方程为y=1.0414x-1.4594,相关系数的平方R2=0.9993,符合厂家声明的线性范围(R2≥0.995)要求。结论GSPTM检测系统参与验证的精密度、准确度及线性范围等主要性能在本实验室均达到了相关标准的要求,可用于新生儿血斑G6PD的检测。

全自动荧光免疫分析仪用于深圳新生儿筛查苯丙氨酸检测的性能验证

目的对全自动荧光免疫分析仪(Genetic Screening Processor,GSP)用于深圳新生儿筛查,检测滤纸干血片(dried blood spot,DBS)中苯丙氨酸(Phe)的性能进行验证分析和评价。方法采用试剂盒自带L、H两浓度水平质控品,美国疾病预防控制中心(the Centers for Disease Control and Prevention,CDC)新生儿筛查室间质评标本,试剂盒自带6个线性标本,进行GSP系统的精密度、正确度和线性范围的验证,通过检测362例新生儿疾病筛查标本,与目前临床常用的茚三酮荧光法进行比对。结果应用GSP检测Phe时,批内变异系数分别为5.23%和4.81%,总变异系数分别为8.00%和4.43%,均小于厂家声称值7.5%和8.5%;美国CDC新生儿筛查室间质评四个标本,其赋值均在偏移的验证区间内;6个线性标本的检测值和理论值的线性回归方程为:y=1.3236x-0.4258,r2=0.9952,r2 >0.995,认为线性范围符合要求;GSP与茚三酮荧光法的一致性较好(Kappa值为0.91,P<0.001),检测结果相关性良好(r值为0.75,P<0.001)。结论GSP应用于深圳新生儿筛查Phe检测中,精密度、准确度、线性范围均达到了厂家声明的检测性能,比对结果的一致性、相关性良好,GSP可用于深圳新生儿筛查Phe含量的检测。

全自动荧光免疫分析仪检测17-OHP性能验证及筛查切值的建立

目的对全自动荧光免疫分析仪(Genetic Screening Processor,GSP)检测干血斑17-羟孕酮(17-hydroxyprogesterone,17-OHP)的性能进行验证分析和评价,并初步建立该方法的先天性肾上腺皮质增生症(CAH)筛查的切值。方法前期确定验证方案,对试剂盒自带的B、D、E三个浓度的样本、L、H两个浓度水平的质控品以及试剂盒自带的6个浓度的线性标本进行GSP系统的精密度、正确度和线性范围的验证。同时以99.5百分位数确定17-OHP筛查的初始切值。结果 GSP检测B/D/E中17-OHP批内变异系数分别为6.06%、5.51%、3.63%,均小于厂家声明的8.7%;总变异系数分别为6.95%、5.80%、3.91%,低于厂家声明的最低总变异系数9.2%。检测试剂盒自带的L、H质控品浓度测量均值与靶值的相对偏差分别为5.48%、4.91%,均小于1/3允许总误差(TEa)。6个浓度线性样本的检测值和理论值的线性回归方程为:Y=1.0385X-0.6337,相关系数的平方(R^2)为1,线性相关性良好。样本总体99.5百分位数的17α-OHP水平为14.30nmol/L。结论 GSP检测干血斑17-OHP精密度、准确度、线性范围均达到了厂家声明的检测性能,可常规用于新生儿CAH筛查。本中心初步采用的GSP新生儿CAH筛查的切值为14.0nmol/L。