番茄、甜椒中转基因成分和内源基因的多重PCR检测方法的建立

采用SDS法提取番茄未成熟及成熟果实和甜椒成熟果实中的总DNA,内源rbcL基因扩增结果均为阳性,表明已提取到DNA及DNA中不存在抑制PCR的物质。应用花椰菜花叶病毒(Cauliflower mosaic virus,CaMV)35S启动子、根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因(nos)终止子和大肠杆菌K12菌株新霉素磷酸转移酶Ⅱ(nptⅡ)基因的三重PCR检测样品DNA中的转基因成分,结果均为阴性。将番茄、甜椒的DNA和阳性质粒pBI121进行混和,作为PCR反应的DNA模板,成功建立了可同时检测内源rbcL基因、nptⅡ基因、CaMV35S启动子和nos终止子的多重PCR方法。多重PCR方法具有快速、简便、准确等特点,在转基因产品检测上具有重要的应用价值。

转基因延熟番茄“华番一号”的品系特异性检测方法

本文使用反向PCR方法克隆了转基因延熟番茄“华番一号”(Bioscein)的外源基因和番茄基因组之间的一段边界序列,并依据此段序列设计了具有品系特异性的引物和荧光探针,以实时荧光PCR技术建立了华番一号的品系鉴定检测方法,扩增片段长108bp,横跨在Nos启动子和番茄基因组之间。以转基因大豆(RR)、转基因玉米(Mon810)、转基因抗草甘膦油菜、转基因棉花(保龄棉)、非转基因番茄、马铃薯、茄子、大椒、大米、小麦、烟草等为试材,证明本方法同其它转基因作物及其它蔬菜无非特异性反应。本方法在检测华番一号番茄时,相对检测灵敏度可达到0.1%,绝对灵敏度达到20个拷贝。由于本方法的PCR扩增产物长度只有108bp,因此该方法也可以用于检测加工产品中的转基因成分,或作为常规PCR定性检测后的确证实验方法。

实时荧光PCR定性定量检测转基因番茄“华番一号”

本实验采用了特异性的引物和探针,对转基因番茄"华番一号"进行实时荧光PCR检测。相对检测灵敏度可达到0.05%。可用于转基因番茄"华番一号"的定性和定量检测。

转基因网络舆情中公众认知态度的影响因素研究

抢占转基因技术制高点已经成为中国的科技发展战略之一。目前中国转基因领域的研究与转化受限于诸多因素,其中包括公众对转基因安全问题的争议。随着互联网的发展,网络舆情已成为社情民意的睛雨表,探究公众对转基因的认知态度有重大的现实意义。笔者参考现有研究成果,基于霍夫兰德说明情境模型,采用结构方程模型的方法,定量研究形成网民态度的影响因素,并对模型结果进行实地调研加以验证,最后综合分析得出合理引导网民理解与支持国家转基因技术研究与管理战略的对策与建议。

番茄转基因检测方法的实验研究

目的 :探讨转基因番茄的检测方法。方法 :采用PCR扩增法 ,对通常转基因植物共有的 35s启动子序列进行检测 ,确定其是否转基因 ;结果与结论 :采用改进的CTAB方法提取DNA纯度较高 ,质量较好 ,反应体系 3扩增效果最佳 ,6 2～ 6

反义LeETR1转基因番茄的生殖发育毒性及外源基因转移试验

目的评价反义LeETR1转基因番茄(ETR1)向动物肠道菌群和子代动物转移外源基因的能力及对小鼠生殖发育的影响。方法SD大鼠和ICR小鼠连续饲喂ETR1、非转基因番茄(B1)和蒸馏水30 d后,分别进行大鼠盲肠菌群培养物的抗生素耐药性试验及小鼠生殖毒性试验,提取耐药阳性菌、亲代和子代小鼠的基因组进行外源基因特异性聚合酶链式反应法(PCR)。结果肠道菌的耐药性和小鼠生殖发育情况无明显改变,在耐药菌和两代小鼠体内均未发现由受试物引入的外源基因。结论ETR1对小鼠无生殖毒性,其携带的外源基因不能向动物体细胞、肠道菌及子代动物转移。

快速定量检测转基因番茄方法的研究

本文以转基因番茄"华番一号"为原材料,采用了特异性的引物和探针,对构建的质粒载体进行转基因番茄的实时荧光PCR定量检测。其相对检测灵敏度可达到6个拷贝。可用于转基因番茄的定性和定量检测。

转基因番茄DNA检测芯片的研究

自19世纪70年代世界上第一例转基因植物问世以来,它对人类健康及环境的安全性问题,受到了全世界广泛的关注。本研究根据转基因番茄(Zeneca)中所转入的外源基因,选择CaMV35S启动子、NOS终止子、PG/NOS基因和内源PG基因设计特异性引物,采用多重PCR法对待测样品进行扩增,通过缺口平移法合成DIG-dUTP标记杂交探针,并制备基因芯片。在对PCR反应和扩增产物与芯片杂交条件进行优化的同时,比较了芯片检测的特异性和重复性,并对检测的灵敏度进行测试。结果表明,该方法具有较好的特异性和重复性,检测灵敏度可达0.5%,由于采用了多重PCR技术一次可同时检测多个基因,提高了检测的准确性和效率。

过表达SlMAPK3提高番茄植株田间抗旱性

促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)级联是植物中重要的信号传递通路,参与调控植株的多种生物和非生物胁迫。为研究SlMAPK3对番茄耐旱方面的影响,本试验以野生型番茄M82及其过表达SlMAPK3株系OE1、OE3、OE4为研究对象,定植田间后,6~7片真叶期进行中度干旱处理保持田间持水量45%~55%,于开花期,统计植株的高度、结果量,比较了不同株系之间果实大小、果实产量以及植株叶片抗氧化活性差异。在田间条件研究中发现,SlMAPK3过表达番茄株系的耐性更强,暗示SlMAPK3在番茄抗旱中发挥重要调控作用,为番茄抗逆育种奠定基础。