中药更年春(GNC)方对去势大鼠学习记忆能力及下丘脑神经递质的影响

目的观察中药更年春方(Gengnianchun,GNC)对去势大鼠学习记忆能力及下丘脑内神经递质的影响。方法分为两批实验,均选用3月龄SD雌性大鼠,随机分为卵巢切除(ovariectomy,OVX)组、OVX+GNC组、OVX+戊酸雌二醇(estradiol valerate,E2)组、OVX组、Sham+GNC组和Sham组,第1批实验连续灌药3个月后经Morris水迷宫实验检测各组大鼠的学习记忆能力。第2批实验连续灌药1个月后采用高效液相色谱法检测各组大鼠下丘脑内神经递质去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)和5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)的水平。结果第1批实验中OVX1组与Sham1组比较,学习记忆能力明显减退(P<0.05);OVX1+GNC组、OVX1+E2组与OVX1组比较,学习记忆能力明显增强(P<0.05);Sham1+GNC组与Sham1组比较,学习记忆能力明显减退(P<0.05)。第2批实验中,OVX2组与Sham2组比较,NE、DA含量明显减少(P<0.05),5-HT、5-HIAA含量明显增加(P<0.05);OVX2+GNC组、OVX2+E2组与OVX2组比较,NE、DA含量明显增加(P<0.05),5-HT、5-HIAA含量明显减少(P<0.05);Sham2+GNC组与Sham2组比较,NE、DA、5-HT、5-HIAA之间无明显差异(P>0.05)。结论 GNC具有提高去势大鼠学习记忆能力的作用,并可维持下丘脑内神经递质的平衡,但未出现卵巢功能衰退则不宜补充GNC。

中药更年春方通过ERβ及PI3K/Akt信号通路对Aβ25-35致大鼠胎鼠海马神经元损伤的保护作用

目的观察中药更年春方(Gengnianchun formula,GNC)通过雌激素受体β(estrogen receptorβ,ERβ)及PI3K/Akt信号通路对β淀粉样蛋白25-35片段(Aβ25-35)致大鼠胎鼠海马神经元细胞损伤的保护作用。方法采用Aβ25-35作用人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系,通过CCK-8法检测细胞活力摸索Aβ25-35及GNC含药血清(GNC serum,GS)处理神经细胞的合适浓度及时间。采用Aβ25-35作用大鼠胎鼠海马神经元构建阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的体外模型,分为无血清对照组、模型组、GS组、空白血清对照(normal saline serum,NS)组和PHTPP(选择性ERβ拮抗剂)组。利用正置显微镜观察细胞形态、CCK-8法检测细胞活力及LDH释放法检测细胞损伤。利用Hoest33258/PI双重荧光染色实验、qRT-PCR及Western blot实验检测细胞凋亡相关指标。结果与无血清对照组相比,模型组大鼠胎鼠海马神经元胞体及突触出现明显的收缩崩解和细胞碎片、细胞活力下降、LDH释放升高。与模型组和NS组相比,GS组大鼠胎鼠海马神经元胞体及突触的收缩崩解和细胞碎片减少、细胞活力上升、LDH释放减少、PI阳性神经元细胞数目下降、神经元bax/bcl-2mRNA、cyt-c mRNA水平及bax/bcl-2、cleaved-caspase 3、cyt-c蛋白表达水平下降、p-Akt蛋白表达水平上升。与GS组相比,PHTPP组大鼠胎鼠海马神经元bax/bcl-2 mRNA、cyt-c mRNA水平及bax/bcl-2、cleaved-caspase3、cyt-c蛋白表达水平上升、p-Akt蛋白表达水平下降。结论GNC对Aβ25-35致大鼠胎鼠海马神经元的损伤具有保护作用,此作用是通过ERβ及PI3K/Akt信号通路介导的。

更年春方对卵巢切除大鼠骨与子宫组织雌激素受体亚型的调节

目的探讨更年春方对卵巢切除大鼠骨与子宫组织雌激素受体(estrogen receptor,ER)亚型的调节.方法10～12月龄SD雌性大鼠卵巢切除建立骨质疏松模型.分别用更年春方、尼尔雌醇灌药4个月,RT-PCR法检测胫骨骨骺与子宫组织ER亚型mRNA的表达.结果大鼠卵巢切除后,血E2水平、椎骨骨密度、子宫湿重及胫骨骨骺与子宫组织ERα、ERβmRNA的表达均明显下降.尼尔雌醇治疗后椎骨骨密度、子宫湿重及胫骨骨骺与子宫组织ERα、ERβmRNA的表达均增高;更年春方组椎骨骨密度及胫骨骨骺与子宫组织ERβmRNA的表达增高,而子宫湿重及胫骨骨骺与子宫组织ERα mRNA的表达无明显改变.结论更年春方对卵巢切除骨质疏松大鼠有防治作用,对子宫无不良反应.其机制可能与其选择性上调胫骨骨骺与子宫组织ERβmRNA的表达有关.

更年春方对卵巢切除大鼠学习记忆的影响

目的探讨更年春方对卵巢切除大鼠学习记忆的影响。方法10b12月龄SD雌性大鼠切除卵巢建立学习和记忆能力受损的模型，分别用更年春方、尼尔雌醇灌药12周后Morris水迷宫测定各组大鼠学习记忆能力。结果大鼠切除卵巢后，血清雌二醇（E2）水平和Morris水迷宫测定的学习和记忆能力显著下降。尼尔雌醇和高剂量更年春方可以改善大鼠切除卵巢后的学习记忆能力下降的症状，而对血清E2无明显影响。结论更年春方对卵巢切除导致的学习和记忆能力下降有改善作用，高剂量效果显著，其效果与尼尔雌醇效果相似。更年春方不提高卵巢切除大鼠血清E2水平。

更年春方对去卵巢大鼠胶原纤维作用的研究

目的观察更年春方(GNC)对去卵巢大鼠皮肤组织胶原纤维的作用并探讨可能发生的机制。方法10～12月龄SD雌性大鼠60只随机分为假手术组(S组)、生理盐水组(N组)、GNC高剂量组(H组)、GNC低剂量组(L组)、尼尔雌醇组(E组),每组12只。除S组做假性手术外,其余各组均行双侧卵巢切除术。术后2 w开始给予灌药,N组灌服生理盐水,H组灌服GNC 2 ml/d、L组灌服GNC 1 mg/d、E组灌服尼尔雌醇1盯ml,1次/w。3个月后测定大鼠血清雌二醇(E_2)的水平,取大鼠背部皮肤组织进行组织学及免疫组织化学观察,测定皮肤组织羟脯氨酸(HYP)水平,RealTime-PCR定量分析皮肤组织表皮细胞生长因子受体(EGFR)、ER亚型mRNA的表达。结果GNC及尼尔雌醇均能提高大鼠皮肤组织HYP含量,提高皮肤组织EGFR、ERα、ERβmRNA的表达,血清E_2水平均未升高。结论更年春方能增加去卵巢大鼠皮肤组织胶原纤维的表达,此作用与GNC影响胶原蛋白合成途径有关。其机制可能与提高皮肤组织ERmRNA的表达有关。

更年春方对卵巢切除大鼠海马中脑源性神经营养因子的影响

目的:研究中药更年春方(GNC)对卵巢切除大鼠海马中脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的调节作用。方法:选择10～12月龄SD雌性大鼠随机分为5组(假手术组,模型组,GNC 6.58 g·kg-1组,GNC 3.29 g·kg-1组,尼尔雌醇3.05×10-4 g.kg-1组),切除双侧卵巢建立学习和记忆能力下降的模型,分别用高、低剂量GNC、尼尔雌醇和生理盐水ig 12周,行Morris水迷宫试验,取海马组织,real time PCR法测定海马BDNF mRNA的变化,免疫组化法测定海马CA3区BDNF蛋白的表达。结果:卵巢切除大鼠海马BDNF mRNA和BDNF蛋白水平下降,而高剂量更年春方和尼尔雌醇提高切除卵巢大鼠海马中BDNF mRNA和蛋白的表达。结论:更年春方可以提高卵巢切除大鼠海马中BDNF的表达,可能通过这个机制改善卵巢切除大鼠的学习记忆能力。