罗格列酮延缓糖尿病大鼠血管钙化的发展

目的:观察罗格列酮对糖尿病大鼠钙化血管的治疗作用及对骨转录因子Msx2表达的影响。方法:在高脂饮食加小剂量链脲佐菌素腹腔注射处理的基础上,加用维生素D3和尼古丁处理,制备糖尿病合并血管钙化大鼠模型(糖尿病合并血管钙化组),给予部分糖尿病合并血管钙化组大鼠罗格列酮灌胃(2 mg.kg-1,每天1次,共8周)处理(罗格列酮组),同时设立空白对照组。实验第21周末,处死各实验组大鼠,检测各组大鼠的代谢指标,进行血管von Kossa染色,检测血管钙含量和碱性磷酸酶活性,应用real-time PCR方法检测Msx2 mRNA及蛋白免疫印迹方法检测Msx2蛋白在血管中的表达变化。结果:与对照组相比,糖尿病合并血管钙化组大鼠血管内存在弥漫性的钙盐沉积,血管内钙含量增高,碱性磷酸酶活性增强,Msx2 mRNA和蛋白表达明显增高(均P<0.05);而给予罗格列酮处理后,钙盐在血管内的沉积明显减少,钙含量和碱性磷酸酶活性分别下降8.37%、10.59%,Msx2 mRNA和蛋白表达也分别下降36.73%、42.55%(与糖尿病合并血管钙化组相比,均P<0.05)。结论:罗格列酮可以延缓糖尿病大鼠血管钙化的发展,并可以减少钙化血管中Msx2的表达。

同源盒HOXA_1基因在髓系白血病细胞内的表达

目的研究HOXA1基因在髓系白血病细胞内的表达及药物对其表达的影响。方法采用半定量逆转录—聚合酶链反应(RTPCR)技术,研究全反式维甲酸(ATRA)对HL60细胞内同源盒HOXA1基因表达的影响。同时对9例髓系白血病患者的HOXA1基因表达进行了检测。结果①ATRA可上调HL60细胞内HOXA1基因的表达。②所有受检白血病患者的HOXA1基因表达水平均比正常对照组高(P<0.01)。

CDX2、NF-κB和MUC2在Barrett食管中的表达及意义

目的研究尾型同源框转录因子-2(CDX2)、核因子-κB(NF-κB)和粘蛋白-2(MUC2)在Barrett食管(BE)中的表达及意义。方法采用随机对照法比较普通白光内镜及NBI模式下活检BE并肠化(IM)的检出率。选取BE(经NBI筛选)、正常食管黏膜及食管腺癌(EAC)采用免疫组化方法检测CDX2、NF-κB和MUC2的表达。结果 NBI组BE并IM的检出率为65.8%(25/38),显著高于普通内镜的34.2%(13/38),差异有统计学意义(P<0.05)。正常黏膜组、BE组和EAC组CDX2阳性率分别为0、73.3%(22/30)、33.3%(10/30);NF-κB阳性率依次为6.7%(2/30)、66.7%(20/30)、40.0%(12/30);MUC2阳性率依次为0、60.0%(18/30)、26.7%(8/30)。三组CDX2、NF-κB、MUC2的阳性率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。CDX2阳性率与NF-κB、MUC2阳性率呈正相关,r值分别为0.869、0.820。结论 NBI能有效提高BE并IM的病理检出率。CDX2、NF-κB、MUC2的激活可能导致BE肠上皮化生及后续恶变。

Hoxa-10基因在生殖过程中的作用

Hoxa gene plays an essential role in the generation and development of the human female reproductive system. This gene is expressed in the Mullerian duct and the adult female reproductive system. Expression of Hoxa10 dramatically increased during the midsecretory phase of the menstrual cycle, corresponding to the time of implantation. Female mice lacking Hoxa10 have a uterine factor defect that results in death of the preimplantation embryo and failure of implantation. These results suggest Hoxa10 may have an important function in implantation. Hoxa10 - deficient males exhibit cryptorchidism that lead to male infertility.

携带内皮型一氧化氮合酶基因重组腺病毒载体的构建

目的：构建带有内皮型一氧化氮合酶（ｅＮＯＳ）基因的重组腺病毒载体。方法：将ｅＮＯＳ ｃＤＮＡ克隆于腺病毒穿梭质粒ｐＣＡ１４，得到重组质粒ｐＣＡ１４－ＣＭＶ－ｅＮＯＳ。采用磷酸钙ＤＮＡ沉淀法将质粒ｐＣＡ１４－ＣＭＶ－ｅＮＯＳ与腺病毒拯救质粒ｐＢＨＧ１０共转染２９３细胞，通过同源重组，生成带有ｅＮＯＳ基因的复制缺陷型重组腺病毒载体（ＡｄＣＭＶｅＮＯＳ）。ｅＮＯＳｃＤＮＡ重组进入腺病毒Ｅ１区并受ＣＭＶ启动子控制。结果：经形态学、病毒ＤＮＡ酶切、ＰＣＲ和ＲＴ－ＰＣＲ等方法的鉴定，证实了载体构建的正确性。结论：带有ｅＮＯＳ基因的重组腺病毒载体的成功构建，为心血管等疾病的基因治疗打下了基础。

Vax基因与视觉神经系统的早期发育

视觉神经系统的发育与形成是一个相当复杂的过程 ,其基因调控机理是神经发育生物学领域的研究热点 .Vax基因家族是新近发现的一类与视觉神经系统发育密切相关的同源异型盒基因 ,调控前脑、眼原基、视泡、视柄以及视网膜的发育 .Vax 1参与色素上皮和视柄的分化 ;Vax 2则在视网膜及视神经背腹轴建立方面起重要作用 .Vax基因的研究将对阐明视觉神经系统发育调控机制提供新的认识 .

软骨细胞SHOX基因过／低表达的差异miRNA筛选与验证

目的建立软骨细胞(HC-α)SHOX基因过/低表达模型,筛选与未处理组差异表达miRNA,并予以验证。方法通过慢病毒过/低表达SHOX基因,用miRNA芯片筛选差异表达的miRNA。结果 SHOX过表达组与对照组有425条差异表达的miRNA;SHOX低表达组与对照组有379条差异表达的miRNA;按照表达水平差异相反的标准筛选差异miRNA,其中6条miRNA在处理组中表达水平差异相反。实时荧光定量PCR对6条miRNA(miR-126、miR-192、miR-370、miR-432、miR-3162、miR-4745)进行验证,miR-126在过表达组明显上调(P<0.05),在低表达组明显下调(P<0.05)。结论 miR-126参与SHOX介导的软骨细胞凋亡过程。

同源异型盒基因调控肝细胞肝癌的生物学机制

目的 （）表达同（源异型盒基）因（HOXA13）的肝癌细胞株,通过RNA干扰/RNAi）技术敲除HOXA13,观察敲除该（引起的生）物学效应.方法 通过反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot法筛选出高表达HOXA13的肝癌细胞株,利用质粒对目的细胞HOXA13进行转染使基因沉默,实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）、Western blot法验证其表达,再通过细胞计数试剂盒（CCK-8）、Transwell细胞侵袭实验、平板克隆、流式细胞实验验证其细胞功能.结果 RT-PCR与Western blot检测肝细胞癌细胞株MHCC-97H中HOXA13的rnRNA及蛋白水平（14.010±0.431、0.702 ±0.062）,明显高于HepG2、Huh-7、SMMC-7721（12.292±0.821、0.653±0.087;11.750±1.271、0.527±0.069;11.242±2.031、0.420±0.075,P＜0.05）.HOXA13-RNAi干扰组细胞（3.215±0.022、0.117±0.016）其HOXA13表达明显低于阴性对照组和空白对照组（9.426±1.006、0.364±0.025;10.517±1.412、0.426±0.047,P＜0.05）.CCK-8法检测结果显示HOXA13-RNAi组的增殖能力（0.368±0.115）明显低于阴性对照组和空白对照（0.688±0.352、0.684±0.322,P＜0.001）.体外Transwell侵袭实验检测结果显示,实验组细胞穿过聚碳酸酯膜的细胞数[（47.302±5.410）个]明显少于阴性对照组和空白对照组[（82.221±11.102）、（84.322±12.520）个]的细胞数（P＜0.01）.HOXA13基因在MHCC-97H细胞中沉默后明显降低肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力,抑制肝癌的发生及发展.结论 HOXA13基因在MHCC-97H沉默后能抑制肝癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力,抑制肝癌的发生发展.