秦艽质量与产量方程施肥效应研究

目的：探索秦艽产量-质量-肥料效应最优配方,同时建立一种新型秦艽综合评价-肥料效应推荐施肥方法。方法：将灰色关联分析和DTOPSIS法有机结合,对14个不同配方处理的秦艽样品的11个指标进行综合评价,优化出秦艽标准化生产过程的氮、磷、钾肥施用量。结果：秦艽产量和质量构成因素对氮、磷、钾肥的需求规律不同,根据其特殊需肥规律及生产需要,秦艽综合产量-质量-肥料效应最佳施肥配方为：氮肥21.49~42.03 kg/667m2,磷肥49.53~65.75 kg/667 m2,钾肥26.34~42.97 kg/667 m2。结论：可将该配方广泛应用于秦艽的规范化生产。

粗茎秦艽资源研究进展

通过查阅历代本草、实地调研及检索文献考证,考证了粗茎秦艽的药用历史,并对其资源分布、群落学特征、种植业现状、化学成分、药理作用、分子生物学等方面的研究进展进行综述,并提出当前存在的主要问题及今后的研究方向。

磷、钾肥配施对秦艽主、侧根4种环烯醚萜的影响

目的:研究磷、钾肥配施对秦艽主、侧根中4种环烯醚萜苷类成分积累规律的影响。方法:通过田间试验,采用磷、钾2个因素,8个处理的磷、钾肥效应试验的设计,研究磷、钾肥对秦艽主、侧根环烯醚萜苷类成分含量及分布的影响。结果:秦艽主根中4种环烯醚萜苷类成分总量始终大于侧根;常规施肥条件下,秦艽主根和侧根中4种环烯醚萜类成分总量分别为12.36%和9.84%,适当追施磷、钾肥将对秦艽主根和侧根中龙胆苦苷和马钱苷酸总量产生一定影响,对獐牙菜苦苷和獐牙菜苷的含量影响则较小;当磷肥适量时,增施钾肥可增大主、侧根之间4种环烯醚萜苷类成分的含量差异。结论:4种环烯醚萜苷类成分在积累过程中,更多地积累于秦艽主根中,磷、钾肥仅对主、侧根中4种环烯醚萜类成分差异大小有影响。在秦艽药材生产过程中,应注重磷、钾肥的施用,在关注其产量及有效成分含量的同时也应对其主、侧根中有效成分含量的差异性予以重视。

粗茎秦艽道地药材及土壤中有机质与无机元素的分析

目的探讨粗茎秦艽道地药材土壤环境因子的特性。方法于云南省丽江和玉龙纳西族自治县采集粗茎秦艽野生品与栽培品原植物标本、道地药材及其土壤样品,采用原子吸收分光光谱法、重铬酸钾容量法等测定有机质及微量元素含量等。结果获得粗茎秦艽药材野生品、栽培品及其土壤中有机质与14种无机元素含量测定数据,其中药材中所含重金属及有害元素,野生品除铜的含量略高外,其他指标均符合国家药典相关要求,栽培品品质良好;各品种生长土壤主要指标均达到国家土壤一级标准;该物种根部对磷的吸收富集显现较高趋势。结论本研究可为粗茎秦艽道地药材的规范化种植以及种质资源评价提供基础资料。

底肥用量及种根大小对秦艽质量和产量的影响初探

目的:为探究底肥用量及种根大小对云南省玉龙县鲁甸乡栽培秦艽产量和质量的影响,确定秦艽最适底肥用量及种根使用方法。方法:分析测定了秦艽鲜重、干重、折干率、长度、直径、分支数及龙胆苦苷、马钱苷酸、醇溶性浸出物、总灰分含量,采用理想灰关联距离度综合评价法对其质量和产量进行评价。结果:底肥用量及种根大小对鲁甸乡栽培秦艽产量和质量有着较大影响,农家肥2 000 kg/667 m2,过磷酸钙20 kg/667 m2,草木灰100 kg/667 m2及大小种根混合移栽的秦艽质量和产量综合评价最好。结论:建议鲁甸乡秦艽生产底肥用量为:农家肥2 000 kg/667 m2左右,过磷酸钙20 kg/667 m2左右,草木灰100 kg/667 m2左右;并选择高质量种根适量错开一定的深度移栽。

粗茎秦艽种子检验方法

参照农作物种子检验规程（GB/T 3543）的方法,对云南维西产粗茎秦艽种子的真实性、净度、水分、重量和发芽率等品质指标进行了检验.结果表明,粗茎秦艽送检种子批次的最大重量应为5000g,送检样品最小重量为25 g,净度分析试样最小重量为5g;种子真实性鉴定采用感官加显微观测法,重量测定采用千粒法,水分测定采用高温烘干法（130 ～ 133℃,1 h）.发芽试验采用纸床法,可采用20℃温汤浸种24h或赤霉素（GA3）50×10-6溶液浸种8h进行种子处理,其发芽记数时间分别为10 ～28d和10～32 d.本研究初步建立了粗茎秦艽种子检验方法,为制定粗茎秦艽种子检验规程提供了依据.

云南不同产地粗茎秦艽中四种无机元素含量研究

目的研究云南不同产地粗茎秦艽中Fe、Mn、Cu、Zn 4种无机元素的含量。方法采用火焰原子吸收光谱法进行测定。结果该方法的加标回收率为95.8-110.3%,RSD〈2.42%,具有良好的准确度和精密度;粗茎秦艽中4种无机元素含量均较为丰富,不同产地粗茎秦艽中各元素的含量均有一定差异,但基本表现为Fe〉Mn〉Zn〉Cu。结论测定结果可为粗茎秦艽无机元素与药效关系的研究提供科学依据。

移栽期及移栽方法对秦艽产、质量的影响初探

目的:为探究鲁甸乡栽培秦艽传统移栽期内及不同移栽方法秦艽的产、质量差异,确定秦艽最适移栽期及移栽方法。方法:分析测定了秦艽鲜重、干重、折干率、长度、直径、分支数及龙胆苦苷、马钱苷酸、醇溶性浸出物、总灰分含量,采用理想灰关联距离度综合评价法对其产、质量进行评价。结果:不同移栽期和移栽方法秦艽产、质量均存在较大差异,在3月10日以行株距25 cm×24 cm、覆土1 cm平放移栽的秦艽产、质量最好。结论:综合考虑产、质量及操作性,鲁甸乡秦艽生产应在3月上旬末,在传统移栽方法的基础上减少覆土厚度进行移栽较适宜。

药用植物粗茎秦艽研究进展

粗茎秦艽Gentiana crassicaulis Duthie ex Burk.为龙胆科龙胆属多年生草本植物,是《中国药典》载传统中、藏药材"秦艽"的基原植物之一,以根入药,历史悠久,具有祛风湿、止痹痛、清湿热的功效,目前野生资源濒危。为有效地保护利用该中药资源,采用文献分析的研究方法,综述了国内学者近10年来对粗茎秦艽生物形态学、解剖学、生药学、分子生物学、化学成分、药理作用以及栽培种植等领域的研究成果,并对相关领域的研究做了进一步展望,为开展相关研究提供信息参考。

粗茎秦艽种子粗提物与破眠方法研究

为了探究影响粗茎秦艽(Gentiana crassicaulis Duthie ex Burk.)种子休眠的因素,破除休眠,寻找其种子快速萌发的方法,以干燥的粗茎秦艽种子为材料,测定种子吸水率及粗提物的活性,使用不同浓度的赤霉素(GA_3)、高锰酸钾(KMnO_4)、聚乙二醇(PEG6000)和过氧化氢(H_2O_2)溶液进行浸种处理,比较不同处理条件对粗茎秦艽种子萌发的影响。结果显示,粗茎秦艽种皮对种子吸水没有明显阻碍作用;不同浓度的种子粗提物对白菜、小麦的萌发和生长均表现出抑制作用;不同浓度的粗提物对粗茎秦艽种子自身的萌发也表现出一定的抑制作用,当粗提物浓度达到0.1 g/mL时,抑制作用最显著(P<0.05);高锰酸钾处理可提高粗茎秦艽种子的萌发率,浓度为1.5%时效果较显著(P<0.05),而过氧化氢处理对粗茎秦艽种子的萌发效果不如前者,此外,用500 mg/L的赤霉素浸种和300 mg/L的聚乙二醇预处理也可显著打破粗茎秦艽种子休眠(P<0.01)。研究结果表明粗茎秦艽种子的内源抑制物是影响其休眠的因素之一;种皮的机械阻碍也在一定程度上影响了种子萌发;粗茎秦艽种子具有综合性休眠特性。高锰酸钾预处理、赤霉素浸种和聚乙二醇引发均可打破种子休眠、缩短种子出芽时间,提高种子的发芽能力。

粗茎秦艽ISSR-PCR反应体系的优化

目的:建立粗茎秦艽Gentiana crassicaulis Duthie ex Burk的ISSR-PCR最佳反应体系。方法:基因组DNA为模板,分别对体系各因子进行考察。结果:最佳体系为:总体积10μL,其中含0.5-1.5ng/μL DNA模板,l0×Buffer缓冲液1μL,2.5mmol/L Mg2+,0.5UTaq DNA聚合酶,0.6μmol/L引物,0.2mmol/L dNTPs。反应程序:94℃预变性5min;之后,94℃变性30s,54℃复性45s,72℃延伸90s,共38个循环;循环结束后72℃延伸7min。结论:该体系可用于粗茎秦艽种下及种间遗传变异分析及药材道地性研究。

粗茎秦艽中的人工生物碱及化学成分研究

[目的]研究粗茎秦艽中的人工生物碱及其他化学成分。[方法]以含氨溶剂对粗茎秦艽进行提取后,利用硅胶色谱分离纯化该浸膏中的化学成分,根据化合物的理化性质和光谱数据鉴定化合物的结构。[结果]分离并鉴定了8个化合物,其结构分别为粗茎龙胆碱A(gentiocrasine A,Ⅰ)、粗茎龙胆碱B(gentiocrasine B,Ⅱ)、秦艽甲素(gentianine,Ⅲ)、秦艽丙素(gentianal,Ⅳ)、西藏龙胆碱(gentiatibetine,Ⅴ)、胡萝卜苷(daucosterol,Ⅵ)、β-谷甾醇(β-sitosterol,Ⅶ)、棕榈酸(plamitic acid,Ⅷ)。[结论]化合物Ⅰ和化合物Ⅱ为首次得到的化合物。

天麻壮骨丸的薄层色谱研究

目的建立天麻壮骨丸的质量控制方法。方法采用薄层色谱法对制剂中的主要药材进行定性鉴别。结果用薄层色谱法鉴定天麻壮骨丸中的人参、秦艽等有效成分,专属性强,灵敏度高,稳定性好,检出斑点清晰。结论该方法准确、简便,可用于天麻壮骨丸的质量控制。

玉龙秦艽质量综合评价方法研究与应用

目的:建立综合评价秦艽质量的新方法。方法:采集云南省玉龙县26份具代表性栽培秦艽样品,利用层次分析法、灰色等权关联度法、综合赋权法确定秦艽药材12个性状权重,再结合DTOPSIS法评价秦艽综合质量。结果:采用层次分析法、灰色关联度法、DTOPSIS法的综合评价结果基本一致,但结合DTOPSIS法后Ci值差异值均显著高于层次分析法和灰色关联度法综合得分的差异值。结论:赋权法与DTOPSIS法结合能全面地评价秦艽质量;综合赋权结合DTOPSIS法为主客观确权评价法,更适用于赋权和秦艽质量综合评价。

粗茎秦艽多糖GCP-1的分离纯化、结构表征及抗炎活性评价

目的从粗茎秦艽Gentianacrassicaulis中分离纯化多糖,初步分析其结构特征并研究其体外抗炎活性。方法采用热水浸提粗茎秦艽粗多糖(Gentianacrassicaulispolysaccharide,GCP),再经CelluloseDE-52纤维素离子交换柱、Sephadex G-100柱进行分离纯化,得到GCP-1。采用高效凝胶色谱法(HPGPC)鉴定纯度并测定其相对分子质量;采用高效液相色谱(HPLC)测定其单糖组成;采用红外光谱(IR)、气相色谱-质谱联用(GC-MS)和核磁共振波谱法对该多糖的结构进行初步分析;采用CCK-8法检测其对小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7增殖的影响;利用ELISA试剂盒测定其对白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、一氧化碳(NO)和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)释放量的影响。结果从粗茎秦艽中分离纯化得到GCP-1多糖,相对分子质量为6.87×10^(4),由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖7种单糖组成,其物质的量比为0.07∶3.07∶0.42∶1.98∶1.33∶5.22∶6.76;IR、GC-MS和核磁共振波谱分析表明,GCP-1是一种典型的果胶多糖,含有HG和RGI区域及AGI和AGII侧链;质量浓度在10~200μg/m L时,GCP-1能明显促进小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7的增殖(P<0.05),并能明显抑制小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7分泌IL-1β、NO和TNF-α。结论GCP-1为从粗茎秦艽中分离得到的天然来源的均一多糖,其结构和活性初步研究为秦艽多糖成分的开发提供了一定参考。

基于UPLC-LTQ-Orbitrap MS/MS法对粗茎秦艽药材不同初加工品化学成分的分析

目的 基于代谢组学方法研究不同加工方法下粗茎秦艽Gentiana crassicaulis药材次生代谢化合物的差异,为优化粗茎秦艽药材的加工及干燥方法提供科学依据。方法 收集云南丽江产粗茎秦艽药材,分别进行产地和药厂加工,加工方式包括切片、原个子(不切片),干燥方式包括烘干、晒干和“发汗”。采用超高效液相色谱-离子阱-静电场轨道阱质谱(UPLC-LTQ-Orbitrap-MS)技术,结合多元统计分析方法,对各样品的次生代谢产物进行分析,筛查其差异性的特征化合物。结果 共鉴定出44个化学成分。主成分分析(principal component analysis,PCA)结果表明,根与芦头(根茎)的化学成分存在较大的差异,根的切片组、原个子组有明显区分。正交偏最小二乘法判别分析(orthogonal partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA)表明,三年生药材质量优于二年生药材,根的质量优于芦头,切片组优于原个子组,不同干燥方法中晒干组药材的质量较优,药厂加工药材质量均优于产地加工药材,并分析得到各组间主要差异化合物。结论 粗茎秦艽药材加工时,建议选用三年生药材,去除芦头部位,并进行趁鲜切片及晒干处理。可为粗茎秦艽药材初加工工艺、质量控制与合理应用提供科学资料。

粗茎秦艽醇提物体内外经皮渗透性研究

目的建立粗茎秦艽Gentianacrassicaulis透皮吸收液中多种环烯醚萜类化学成分含量测定方法,并对粗茎秦艽体内外经皮渗透特性进行研究,为粗茎秦艽经皮给药制剂的研发、临床用药和传统剂型改革提供科学依据。方法在课题组前期研究的基础上,采用醇提法制备粗茎秦艽提取液,选用3种常用的透皮促渗剂氮酮、冰片和丙二醇,利用HPLC定量评价单一促渗剂或二元复合促渗剂对粗茎秦艽中马钱苷酸、山栀苷甲酯、獐芽菜苦苷、龙胆苦苷和獐芽菜苷5种主要成分的体外经皮渗透特性的影响;以龙胆苦苷、马钱苷酸和獐芽菜苦苷3种成分为评价指标研究粗茎秦艽醇提物在活体小鼠皮肤模型的渗透特性。结果与对照组相比,促渗剂的使用可显著增加粗茎秦艽中5种主要成分的体外吸收,A(5%氮酮)、B(5%冰片)、C(5%丙二醇)、A+B(2.5%氮酮+2.5%冰片)、A+C(2.5%氮酮+2.5%丙二醇)、B+C(2.5%冰片+2.5%丙二醇)5组中马钱苷酸、山栀苷甲酯、獐芽菜苦苷、龙胆苦苷和獐芽菜苷的透皮吸收速率(J)分别可达12.3060、1.2488、4.1875、153.0300、5.0126μg/(cm^2·h),促渗效果分别是对照组的9.73、2.57、13.94、15.92、8.08倍。其中,A+C组,即2.5%氮酮+2.5%丙二醇组体外促渗效果最为明显。体内经皮渗透实验表明,与空白组对比,2.5%氮酮+2.5%丙二醇组对于活体小鼠皮肤的促渗透效果表现较好。结论氮酮和丙二醇对粗茎秦艽中马钱苷酸、山栀苷甲酯、獐芽菜苦苷、龙胆苦苷和獐芽菜苷5种主要成分有良好的促渗透效果,为研究粗茎秦艽经皮给药制剂质量控制奠定基础。

光照对粗茎秦艽种子萌发及其过程中环烯醚萜类成分积累规律的影响

目的:观察光照对粗茎秦艽种子萌发及其过程中环烯醚萜类成分积累规律的影响。方法:将粗茎秦艽种子分为光照组和避光组,浸泡24 h后置于21℃培养箱内培养,光照组的光照强度为605~710 lx。以种皮开裂露出胚根为发芽标志,记录每日种子的发芽情况。培养33 d后,分别统计光照组和避光组的种子发芽率、首次萌发时间与半数萌发时间,测量其子叶、胚轴、胚根的长度及胚轴直径。于培养过程中不同时间点取样,液质联用技术定性鉴别环烯醚萜类化合物,并对各成分含量进行相对定量分析。比较光照组和避光组种子萌发过程中环烯醚萜类成分含量的变化趋势。结果:①培养33 d后,光照组平均发芽率为76%,避光组平均发芽率为88%;光照组种子首次萌发时间略晚于避光组;光照组和避光组的半数萌发时间分别为培养16、15 d。②避光组子叶未见发育,光照组子叶发育明显。避光组的胚轴长度和胚轴直径明显大于光照组(P<0.01),光照组的胚根长度明显大于避光组(P<0.01)。③液质联用定性鉴别出8种环烯醚萜类化合物。种子萌发过程中,龙胆苦苷含量逐渐增加,而马钱苷酸含量逐渐减少;环烯醚萜衍生物gentistraminosides B、macrophylloside A、macrophylloside B及其同分异构体含量逐渐增加。光照组的龙胆苦苷和以上4种环烯醚萜衍生物的含量高于避光组。结论:光照对粗茎秦艽种子萌发及其胚轴伸长具有一定抑制作用,并对萌发过程中环烯醚萜类成分的积累产生影响。

基于UPLC-ESI-HRMS^n的代谢组学技术对粗茎秦艽不同部位化学成分研究

目的分析粗茎秦艽Gentiana crasicaulis不同部位化学成分的差异。方法运用四级杆-静电场轨道阱高分辨液质联用(UPLC-ESI-HRMSn)技术对粗茎秦艽不同部位的化学成分进行采集,所得数据运用主成分分析(PCA)法与正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)处理,粗茎秦艽不同部位的差异指标成分通过精准的一级质谱质荷比和二级质谱碎片离子同对照品图谱和软件数据库搜索以及相关文献报道成分进行判别分析。结果共鉴定36个成分,包括环烯醚萜类12个、黄酮类11个、三萜类4个、酯类2个、木脂素类1个、其他类6个,其中4个成分首次在该植物中报道,通过OPLS-DA,筛选出根与地上部分间16个差异性较大的化学成分。结论粗茎秦艽环烯醚萜类差异成分主要分布于根部,而黄酮类和三萜类差异成分则主要集中于地上部分(花和茎叶),为粗茎秦艽资源的综合利用提供了依据。

基于UPLC-ESI-HRMS^n评价不同干燥方式对粗茎秦艽中环烯醚萜类及黄酮类成分的影响

目的通过化学成分测定,评价远红外干燥、真空干燥、冷冻干燥、阴干、烘干、"发汗"干燥对粗茎秦艽品质的影响。方法采用UPLC-ESI-HRMS^n测定秦艽中4个环烯醚萜类成分(獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、马钱苷酸、獐牙菜苷)和4个黄酮类成分(木犀草素、异牡荆素、芹菜素、山柰酚)质量分数。并结合单因素方差分析、聚类分析、逼近理想值排序法(TOPSIS)分析综合评价不同干燥方式所得样品的品质,确定最佳干燥方式。结果不同干燥方法样品的獐牙菜苦苷差异不显著,龙胆苦苷、马钱苷酸、獐牙菜苷、木犀草素、异牡荆素、芹菜素和山柰酚差异明显。其中,4个环烯醚萜类成分在冷冻干燥中保留最佳;4个黄酮类成分在"发汗"干燥中保留最佳。各成分在阴干样品中质量分数最低。聚类分析及TOPSIS分析表明"发汗"干燥具有与冷冻干燥相似的品质,且品质最好,其次是烘干干燥和远红外干燥,阴干干燥的样品品质最差。结论不同干燥方式对秦艽药材品质的影响值得关注。研究表明《中国药典》2015年版收载秦艽"发汗"的干燥方法具有科学性。但传统"发汗"过程时间较长,为了提高干燥效率,进一步研究方向应关注"发汗"干燥结合现代干燥技术如热风干燥、冷冻干燥、真空干燥以保证秦艽药材稳定品质的基础上缩短干燥时间。