滇龙胆的本草考证

目的:研究历代典籍对滇龙胆的文献记载,对滇龙胆进行本草考证,以期为滇龙胆的开发利用提供参考。方法:通过查阅历代本草典籍,结合现代研究文献,对滇龙胆的名称、基原、产地变迁、采收加工以及品质评价进行系统的梳理、考证。结果:经考证,滇龙胆始载于《滇南本草》,别名坚龙胆、龙胆草、苦草等,为龙胆科龙胆属植物,基原植物为滇龙胆,是《中华人民共和国药典》龙胆药材的基原植物之一;主产于云南,临沧是其道地产区;滇龙胆一般于秋冬两季采收;加工多以产地初加工为主,即将滇龙胆清洗后阴干或晒干;历代本草典籍中对其质量评价的记载非常少,以“形如枯骨”“根肥长”“脂润”“味苦”“粘牙”作为质量好坏的评价标准,现代主要以龙胆苦苷含量作为龙胆药材质量评价的主要手段之一,辅助以外观性状等的观测。结论:考证结果将为今后滇龙胆的开发利用提供参考。

基于高通量测序分析滇龙胆根际土壤微生物群落特征

【目的】了解滇龙胆根际土壤微生物群落结构,为充分利用微生物资源,培育品质优良的滇龙胆提供科学有效的理论依据。【方法】利用高通量测序技术比较分析不同产地滇龙胆根际土壤微生物的多样性和群落结构差异,并结合土壤理化性质,分析滇龙胆根际土壤微生物群落丰度变化与土壤养分含量间的相关性。【结果】不同地区滇龙胆根际土壤微生物的多样性和丰富度存在差异,其中以样品BS2的Chao1、Ace、Shannon指数最大。群落组成分析发现,细菌域微生物属于136门、86纲、188目、409科、1793属,其中样品DL2、LC的优势菌门为变形菌门,相对丰度分别为64.74%、56.00%;样品DL1、BS1、BS2、GZ的优势菌门为酸杆菌门,相对丰度分别为42.02%、24.40%、41.44%、71.30%。真菌分属于5门、28纲、63目、124科、181属,其中样品BS2的优势菌门为担子菌门(42.65%),其余5个样品优势菌门均为子囊菌门(48.50%~88.92%)。根际微生物与土壤理化性质的相关性分析发现,土壤pH与链霉菌属的相对丰度呈显著正相关,与Candidatus-Sulfotelmatobacter呈极显著负相关;有机质含量与Edaphobacter、Granulicella的相对丰度呈显著正相关;水解性氮、有效磷、速效钾等土壤养分与罗河杆菌属的相对丰度呈显著或极显著正相关。【结论】产地因素对滇龙胆根际土壤微生物多样性及群落结构有一定的影响。综合比较,样品BS2根际土壤微生物的丰度和多样性最高。变形菌门、酸杆菌门、放线菌门和绿弯菌门是各样品中均存在的优势细菌,而子囊菌门和担子菌门为优势真菌群落。

不同初加工方法对滇龙胆药材品质的影响

采集临沧云县产新鲜滇龙胆,采用9种不同初加工方法,以滇龙胆的根及根茎为研究对象,测定干燥后滇龙胆样品中龙胆苦苷、马钱苷酸、獐牙菜苦苷和当药苷含量,以及总灰分、酸不溶性灰分和浸出物等指标,依据《中华人民共和国药典》标准,对药材品质进行综合评价。结果表明,不同加工方法滇龙胆有效成分含量有一定差异,其中水洗烘干(SXHG)处理样品龙胆苦苷和马钱苷酸的含量显著高于其他处理,同时,所需干燥时间最短,仅为12 h,远低于其他处理;水洗烘干(SXHG)处理样品的总灰分、酸不溶性灰分和浸出物均达到《中华人民共和国药典》标准;主成分分析可知,水洗烘干(SXHG)滇龙胆样品综合质量最好,免洗阴干(MXYG)综合质量次之,但该方法加工的样品总灰分和浸出物未达到《中华人民共和国药典》标准,水洗阴干(SXYG)在传统生产中农户广泛使用,可根据天气、场地等实际情况在产地加工中作为辅助干燥方法。综合考虑,滇龙胆药材产地加工方法以水洗烘干为宜;若药材加工量较大,可根据天气、场地等实际情况采用水洗阴干方法进行加工。

滇龙胆花化学成分的分离与鉴定

目的:对滇龙胆花的化学成分进行了初步研究,明确滇龙胆花的化学成分并加以充分利用,为最大限度地提高滇龙胆种植产业效益提供科学依据。方法:采用硅胶、葡聚糖凝胶LH-20等色谱法分离化合物,并通过与标准品TLC对照、核磁共振、质谱数据鉴定化合物的结构。结果:从滇龙胆花体积分数为95%的乙醇溶液提取物中分离鉴定了12个化合物,主要为小极性的三萜脂肪酸酯酸,含量最大的是乌苏烷型三萜。分别鉴定为软脂酸(1)、古柯二醇-3-棕榈酸酯(2)、羽扇豆醇棕榈酸酯(3)、α-香树脂醇(4)、熊果醇-3-棕榈酸酯(5)、β-谷甾醇(6)、熊果酸(7)、胡萝卜苷(8)、2α-羟基-熊果酸(9)、β-香树脂醇棕榈酸酯(10)、α-香树脂醇棕榈酸酯(11)、β-香树脂醇(12)。结论:对滇龙胆花化学成分进行研究,分离鉴定了12个单体化合物,化合物1~6、8~12均为首次从龙胆花中分离得到。

海拔对苍山地区野生滇龙胆品质的影响

目的:本论文旨在研究海拔对苍山地区野生滇龙胆(Gentiana rigescens Franch.)品质的影响。方法:采用高效液相色谱(HPLC)法对滇龙胆根茎叶中龙胆苦苷的含量进行测定,并将各部分龙胆苦苷含量与海拔高度进行相关性分析。结果:苍山地区滇龙胆品质优良,根茎叶三部分龙胆苦苷含量均超过《中国药典》规定,根部龙胆苦苷含量在3.9%~8.2%之间。此外,根部龙胆苦苷含量与海拔高度有显著线性相关性,其线性拟合方程为y = −0.2752 + x * 1.35048E−4。结论:苍山地区野生滇龙胆品质优良;在海拔2325.3~2599.7 m区间内,滇龙胆品质随海拔上升而升高;苍山地区海拔2400~2700 m范围内,是潜在的优良人工滇龙胆种植区。

不同林药复合种植模式滇龙胆有效成分含量研究

【目的】以云南林药复合种植滇龙胆为研究材料,探讨不同种植模式滇龙胆有效成分积累特征。【方法】采用高效液相色谱法测定滇龙胆根茎部位中龙胆苦苷、马钱苷酸、獐牙菜苦苷和当药苷4种有效成分含量。【结果】7种复合种植模式滇龙胆中龙胆苦苷含量的平均值为67.95mg/g,当药苷含量的平均值为1.85mg/g,獐牙菜苦苷含量的平均值为9.69mg/g,马钱苷酸含量的平均值为7.19mg/g。其中滇龙胆-尼泊尔桤木复合种植龙胆苦苷含量最高,为(85.99±9.58)mg/g;滇龙胆-杉木复合种植当药苷含量最高,为(2.05±0.23)mg/g;滇龙胆-核桃复合种植獐牙菜苦苷含量最高,为(10.10±0.95)mg/g;滇龙胆-核桃复合种植马钱苷酸含量最高,为(9.74±1.94)mg/g。不同林药复合种植模式滇龙胆有效成分的相关性分析结果显示,龙胆苦苷和獐牙菜苦苷含量呈极显著正相关(R=0.35,P<0.01),当药苷分别与马钱苷酸和獐牙菜苦苷含量呈极显著正相关(R=0.49,P<0.01;R=0.41,P<0.01)。【结论】不同林药复合种植模式下滇龙胆有效成分含量不同,其有效成分含量变化可能与其生长的小环境有关。

中药材滇龙胆资源调查和分析研究

采取文献调查、走访调查、样方调查、市场调查等方法,对四川、云南、贵州省区野生滇龙胆资源地理分布、生态环境及云南家种滇龙胆人工栽培现状、市场及开发利用情况等方面进行调查,在此基础上对滇龙胆野生资源蕴藏量进行了估算,并对滇龙胆在药材资源、药材品质、人工种植等方面存在问题进行分析,提出了相应的对策与建议,为促进滇龙胆资源可持续利用提供依据。

云南栽培滇龙胆病害种类及生态治理

目的:了解栽培滇龙胆病害种类,为预防提供参考。方法:通过田间调查、症状观察、样本采集、病原菌分离、形态鉴定及柯赫氏验证程序来鉴定确诊。结果:栽培滇龙胆的病害为炭疽病(Colletotrichum gloeosporioides)、灰霉病(Botrytis cinerea)、褐斑病(Alternaria tenuis)、锈病(Aecidiumpers)、圆斑枯病(Pestalotiopsis)、匐柄霉叶枯病(Stemphylium sp.)、壳二孢叶枯病(Ascochyta sp.)、格孢腔菌(多胞菌)叶枯病(Pleospora sp.)及胞囊线虫病(Hetero-dera spp.)和根结线虫病(Meloidogyne spp.)。其中以炭疽病为主要病害,发病株率40%以上,严重度达4～5级;其次是锈病,发病株率10%以下;其他病害发病株率在2%以下。结论:滇龙胆以上几种病害为首次报道,滇龙胆是这些病原菌的新记录寄主。针对这些病害提出了相应的防治措施。

尿素态氮对滇龙胆漂浮育苗幼苗生长和生理特性的影响

以滇龙胆成熟种子为试材,采用漂浮育苗法及植物生理学实验方法研究了尿素态氮对浮育苗幼苗生长和生理特性的影响。结果表明:尿素态氮浓度在25～50mg/L范围内,有利于幼苗茎叶生长;尿素态氮浓度为25mg/L时有利于根生长;同时叶片中叶绿素含量、硝酸还原酶(NR)活性、根系活力极显著(P<0.01)高于未施氮和其它浓度处理;与对照相比,当尿素态氮浓度为100mg/L时,幼苗的生长受到明显抑制,叶片中绿素含量和NR活性降低,根系活力也显著下降。

不同产地滇龙胆地上部分龙胆苦苷的含量测定

目的：测定并比较不同产地滇龙胆地上部分龙胆苦苷的含量，评价其利用价值。方法：建立高效液相色谱方法以测定样品龙胆苦苷含量，并依据其含量来评价开发利用价值。结果：不同产地滇龙胆地上部分龙胆苦苷的含量在0．13％～6．39％之间，平均含量1．95％．结论：滇龙胆地上部分含有约2％的龙胆苦苷，具有综合开发利用价值。

滇龙胆种质资源筛选及离体培养的初步研究

以不同居群、同一居群不同滇龙胆植株为试材,采用HPLC法对滇龙胆根茎中龙胆苦苷含量进行测定,再以龙胆苦苷含量≥8.0%的感通、湾桥和蝴蝶泉居群茎尖为外植体,研究了培养基、培养温度对滇龙胆离体培养及植株再生的影响。结果表明:大理苍山滇龙胆不同居群根茎中龙胆苦苷含量差异达到显著或极显著水平,其中,感通居群、中和居群、湾桥居群和蝴蝶泉居群根茎中龙胆苦苷含量较高,达到8.0%以上;上关居群根茎中龙胆苦苷含量最低,为(5.849±0.01493)%。滇龙胆同一居群不同植株根茎中龙胆苦苷含量差异较小,喜洲居群不同植株根茎中龙胆苦苷含量差异达到显著水平(P<0.05),中和居群不同植株根茎中龙胆苦苷含量差异达到极显著水平(P<0.01),其它居群不同植株根茎中龙胆苦苷含量无显著差异。滇龙胆茎尖生长点离体培养及植株再生的最适宜培养基为1/2MS培养基,再生植株诱导率可达80.00%,不定芽高(5.6±0.2)cm,最佳培养条件是20℃/25℃变温培养,再生植株诱导率可达87.78%,不定芽高(7.5±0.2)cm。

不同树龄茶树套种滇龙胆对药材矿质元素含量的影响

采用电感耦合等离子体原子发射光谱法（ICP-AES）测定滇龙胆（Gentiana rigescens Franch.ex Hemsl.）与不同树龄（3年、4年、5年、9年、12年和15年）茶树（Camellia sinensis）套种后其根、茎、叶3个部位及生长土壤中7种矿质元素（B、Ca、Cu、Fe、Mn、Ni和Zn）的含量。结果显示,滇龙胆中矿质元素平均含量高低顺序为Ca（5 238±2 111）μg/g、Fe（622±238）μg/g、Mn（379±301）μg/g、Cu（75±9.1）μg/g、Zn（46±13）μg/g、B（17±4.9）μg/g、Ni（5.6±3.1）μg/g,与土壤矿质元素含量变化趋势基本一致。根部的B、Ca、Fe、Mn、Ni元素在树龄15年茶树-滇龙胆套种后含量最高,分别为18、3 797、1 050、254、11μg/g,Cu、Zn元素在树龄12年的茶树-滇龙胆套种中含量最高,分别为244、38μg/g。相同营养器官不同树龄的茶树-滇龙胆套种后矿质元素含量具有差异,以根部的Cu、Mn元素含量差异显著,变化范围分别为19~244μg/g和79~254μg/g,分别相差12.8倍和3.2倍;树龄15年、9年的茶树-滇龙胆套种后茎部的Cu含量分别为177、11μg/g,相差16.1倍;树龄3年、5年的茶树-滇龙胆套种后叶部的Cu含量分别为325、11μg/g,相差29.5倍。不同树龄的茶树-滇龙胆套种后根部与土壤矿质元素的相关性以及生物富集系数不同,树龄15年的茶树-滇龙胆套种后根部对Ca、Cu、Mn、Ni、Zn元素的富集能力较强,生物富集系数分别达21.0、3.3、2.2、1.8和4.7。说明茶树复合种植可改变土壤矿质元素的分布,自身生物学特性与复合种植的生态环境共同影响了滇龙胆对矿质元素吸收与运输的能力。

LC-MS/MS法同时测定滇龙胆中4种苯甲酸酯类成分

目的建立LC-MS/MS法同时测定滇龙胆中抗老年痴呆的4种主要成分gentiside A,gentiside J,gentiside B,gentiside K的量。方法使用岛津LC-MS/MS 8030液质联用仪,色谱柱为Shim-pack XR-ODSⅢ（75 mm×2.0 mm,1.6μm）;流动相为甲醇-0.1%甲酸,等度洗脱;离子源为电喷雾电离源（ESI）,采用负离子多反应监测模式。结果Gentiside A,gentiside J,gentiside B,gentiside K分别在39.0-444.4μg/m L、39.0-444.4μg/m L、59.0-444.4μg/m L、26.0-444.4μg/m L范围内线性关系良好,相关系数为0.998 9-0.999 6;所测的滇龙胆根部中,4种苯甲酸酯类成分的含有量分别为0.284、0.358、0.654、0.267 mg/g;加样回收率为98.1%-102.6%,RSD为0.7%-1.7%。结论该方法专属性好、精密度高,可用于滇龙胆中苯甲酸酯类成分的检测。

贵州产坚龙胆组织培养体系的建立

以贵州野生坚龙胆(Gentiana rigescens Franch)带有顶芽或腋芽的茎段作为外植体,建立坚龙胆的组织培养体系。结果表明,适宜的不定芽诱导培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,最佳的增殖培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.10 mg/L NAA,最适生根培养基为1/2MS+0.1 mg/L IBA。在组织培养过程中还观察到了瓶苗开花的现象。

龙胆中龙胆总苷的含量测定

目的：建立一项对龙胆中龙胆总苷含量测定的分析方法。方法：采用紫外-可见分光光度法（uv-2450），以D101大孔吸附树脂纯化样品（1．5cm×10cm），1％变色酸为显色剂，酸度控制在65％，沸水加热，显色时间为25min，显色最大吸收波长为576nm。结果：龙胆苦苷在0．0410～0．1093mg·mL^-1质量浓度内线性关系良好（r=0．99993），方法回收率为98．8249％，RSD为0．46％．结论：该方法可用于质量控制，为龙胆中龙胆总苷含量测定提供了一项可行的方法，进而也为龙胆中间提取物质量控制提供了一项总苷含量测定的方法。

正交试验法优选坚龙胆中龙胆苦苷的提取工艺

目的:优选坚龙胆中龙胆苦苷的提取工艺。方法:以龙胆苦苷的含量为指标,采用高效液相色谱法进行含量测定,采用L(934)正交设计试验,对提取次数、提取溶剂倍数和提取时间3因素进行考察,以确定最佳提取工艺。结果:提取3次,用10倍量的甲醇,提取时间每次20min为最佳提取工艺。结论:该工艺合理,且稳定可行。

滇龙胆漂浮育苗基质的优选

以滇龙胆(Gentiana rigescens Franch)成熟种子为试材,采用正交试验设计分析育苗基质珍珠岩、蛭石、草炭、腐殖土4个因素对滇龙胆漂浮育苗种子萌发和幼苗生长的影响。结果表明,滇龙胆漂浮育苗种子萌发的最佳基质配比是珍珠岩∶蛭石∶草炭∶腐殖土=3∶1∶3∶4,种子萌发率达93.4%,珍珠岩和腐殖土对种子萌发率有显著影响,蛭石和草炭对种子萌发作用不显著;滇龙胆漂浮育苗幼苗生长的最佳基质配比是珍珠岩∶蛭石∶草炭∶腐殖土=2∶1∶3∶4,幼苗高、根长及茎叶干重均显著高于其他基质配比,幼苗根干重极显著高于其他基质配比,为(0.281 9±0.001 4)g。

林药复合种植的滇龙胆中元素的化学计量特征研究

药用植物复合种植是对传统中药材种植模式的优化,在一定程度上可缓解中药材与作物争地的矛盾,对中药资源的保护与可持续发展具有重要意义。试验通过采集单一种植模式的滇龙胆（Gentiana rigescens Franch.ex Hemsl.）样品以及滇龙胆与茶树[Camellia sinensis（L.）O.Ktze]、大叶桉（Eucalyptus robusta Smith）、木瓜[Chaenomeles sinensis（Thouin）Koehne]、旱冬瓜（Alnus nepalensis D.Don）、核桃（Juglans regia L.）、杉木[Cunninghamia lanceolata（Lamb.）Hook.]、木果石栎[Lithocarpus xylocarpus（Kurz）Markg.]等林药复合种植模式的滇龙胆样品,用微波消解-ICP-AES法测定各滇龙胆样品中的Ca、Mg、Fe、Zn、P、Cu、Mn、Cd、Pb、Ni、Sr、Ti等元素含量,以探明不同种植模式下滇龙胆植株中元素的化学计量特征。结果表明,该方法的加标回收率在95.40%~108.25%,相对标准偏差在0.26%~2.08%。其中滇龙胆根中的元素含量排序为Ca、Fe、Mg、P、Mn、Zn、Ti、Sr、Ni,茎、叶中的为Ca、Mg、P、Fe、Mn、Zn、Sr、Ti、Ni。以滇龙胆-茶树复合种植模式的P元素含量最高,其在根、茎、叶中分别为1 384.73、1 640.12、2 399.04μg/g;滇龙胆-旱冬瓜复合种植模式的Fe和Ti元素含量最高;滇龙胆-大叶桉复合种植模式的Mg元素含量最高,其根、茎、叶中分别为1 486.08、2 770.99、4 673.24μg/g;滇龙胆-核桃复合种植模式的Sr元素含量最高,其根、茎、叶中分别为37.02、52.80、34.63μg/g。重金属元素Cd与Ca、Fe、Ni元素含量之间呈显著或极显著正相关,相关系数分别为0.741、0.929、0.893;Ni与Fe、Ti含量之间呈显著或极显著正相关,与Pb含量之间呈显著负相关;Mg与Cu含量之间呈显著正相关,Mn与Sr含量之间呈极显著正相关。

不同种植模式对滇龙胆草总裂环烯醚萜苷含量的影响

滇龙胆草（Gentiana rigescens Franch. ex Hemsl.）为龙胆科（Gentianaceae）龙胆属（Gentiana Linn.）多年生草本植物，主要分布于云南、四川、贵州、湖南和广西等地，生长于山坡、草地、灌丛、林下及山谷中。该种为传统中药龙胆的基源植物，其干燥根及根茎均可入药，具有清热燥湿和泻肝胆火的功效。因其资源需求量逐年增加，滇龙胆草的人工种植越来越普遍，并出现了多种种植模式。目前滇龙胆草主要种植模式有单一种植和林药复合种植，常见的有滇龙胆草与茶树也Camellia sinensis （Linn.） Kuntze页、桉树（Eucalyptus robusta Smith）、木瓜也Chaenomeles sinensis （ Thouin ） Koehne 页和旱冬瓜（ Alnus nepalensis D. Don）的复合种植模式。与传统林业系统相比，林药复合系统具有良好的生态效益、社会效益和经济效益。周幸的研究结果表明：在太行山山地林药复合种植模式中，分布于土壤表层的药用植物浅根系对表层土有加筋固着作用，可减少水土流失。 Sujatha 等认为：在槟榔（Areca catechu Linn.）园间作芳香药用植物有助于提高其产量并增加单位面积收入。目前有关林药复合种植的研究主要集中于其生态效益和经济效益，对复合种植模式下药用植物有效成分变化的研究尚不多见。

层积和赤霉素协同作用对滇龙胆种子漂浮育苗的影响

以滇龙胆(Gentiana rigescens Franch)成熟种子为试验材料,采用L9(34)正交设计方法研究层积方式、层积时间、赤霉素稀释液浓度和浸种时间对滇龙胆种子漂浮育苗的萌发及成苗的影响。结果表明,滇龙胆种子漂浮育苗促进萌发的最佳处理组合是湿沙层积方式+层积60 d+赤霉素稀释液浓度200 mg/L+浸种24 h,其中层积时间对滇龙胆种子萌发率有极显著的影响(P<0.01),赤霉素稀释液浓度对滇龙胆种子萌发率有显著的影响(P<0.05),而层积方式和浸种时间对滇龙胆种子的萌发作用不显著;滇龙胆种子漂浮育苗促进成苗的最佳处理组合是一般层积方式+层积30 d+赤霉素稀释液浓度50 mg/L+浸种24 h,其中赤霉素稀释液浓度对滇龙胆种子的成苗率有显著的影响(P<0.05),而层积方式、层积时间和浸种时间对滇龙胆种子的成苗作用不显著。综合考虑各种因素的影响,滇龙胆种子漂浮育苗促进萌发及成苗的最佳处理组合是一般层积方式+层积30 d+赤霉素稀释液浓度50 mg/L+浸种24 h,其种子萌发率为90.23%、成苗率高达97.50%。