藏药粗壮秦艽和麻花秦艽的成分鉴定及4个成分的含量测定

目的:建立藏药粗壮秦艽和麻花秦艽的UPLC-TOF-MS化学成分谱分析方法以及马钱苷酸、龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷的含量测定方法。方法:依据高分辨质谱提供的分子式、二级质谱裂解碎片及相关文献记载鉴定化学成分。选择[M-H]^(-)作为马钱苷酸的专属离子、[M+HCOO]^(-)作为獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷专属离子对其进行含量测定,对不同批次药材中化学成分谱进行比较分析。结果:建立了藏药粗壮秦艽和麻花秦艽药材的UPLC-TOF-MS成分图谱,指认38个成分,包括三萜类10个、黄酮类4个、环烯醚萜类21个、其他类成分3个。在2种药材中马钱苷酸、龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷的含量分别为0.51%~0.90%、1.63%~2.31%、0.08%~0.21%、0.09%~0.28%。结论:建立的藏药粗壮秦艽和中药麻花秦艽UPLC-TOF-MS成分谱能全面反映药材的化学成分组成以及不同基原药材的成分差异,含量测定方法稳定可行,可为藏药粗壮秦艽药材的质量评价提供参考。

基于UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS技术分析藏药粗壮秦艽的化学成分

目的用超高效液相色谱-电喷雾/四级杆飞行时间串联质谱联用(UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS)技术对粗壮秦艽的主要化学成分进行定性分析。方法色谱条件为ACQUITY UPLC BEH C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以1 mL·L^(-1)甲酸(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱,流速为0.4 mL·min^(-1),柱温为40℃,进样量为1μL,质谱用电喷雾(ESI)离子源,在正、负离子模式下采集数据。结果通过分析二级高分辨质谱结合对照品数据及相关文献,共鉴定出39个化合物,包括环烯醚萜类21个、三萜类9个、黄酮类3个和其他类成分6个。结论基于UPLC的高效分离能力和MS的高灵敏检测优势,用UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS技术可快速分析粗壮秦艽中的化学成分,为粗壮秦艽化学成分的提取、分离及其药效物质基础研究提供科学依据。

藏药粗壮秦艽的研究进展

我国传统中药材秦艽,用药历史悠久,临床广泛用于治疗风湿关节炎,是一种极具开发利用价值的药用植物。但由于人工采挖现象非常严重,野生秦艽品种均已处于濒危状态,亟需寻找秦艽替代资源。粗壮秦艽为藏药“解吉”的来源之一,属于龙胆科秦艽组,为麻花秦艽的近缘物种,广泛分布于我国西藏南部地区,资源量较为丰富,临床用于治疗“赤巴病”,具有重要的药用价值。近年来,针对粗壮秦艽的研究已逐步开展,特别是在物种基原鉴定方面,已经有较为成熟的研究,本文对粗壮秦艽生药学相关的研究进行系统的整理,为进一步深入研究粗壮秦艽提供参考。

基于ITS及atpB-rbcL等多片段鉴定粗壮秦艽及其近缘种

传统藏药"解吉"主要基原植物之一粗壮秦艽Gentiana robusta分布区广,且与近缘种呈同域分布现象,遗传背景复杂。多居群平行取样,直接测定该物种及其近缘物种麻花艽G.straminea、粗茎秦艽G.crassicaulis、长梗秦艽G.waltonii,外类群椭圆叶花锚Halenia elliptica的r DNA ITS区序列及叶绿体DNA的mat K,rbc L,rpo C1,trn L(UAA),psb A-trn H,atp B-rbc L,trn S(GCU)-trn G(UCC),rpl20-rps12,trn L(UAA)-trn F(GAA)序列228条;TA克隆法测定粗壮秦艽ITS区序列120条。对粗壮秦艽进行基因分型,形态学及DNA分子证据显示其可能为一杂交物种;克隆序列中寻找稳定位点,多片段组合可鉴定粗壮秦艽及其近缘种。该文对遗传背景多样的药用植物鉴定研究具有重要参考价值。

藏药解吉基原植物转录组及其环烯醚萜苷类生物合成相关基因的探究

藏药解吉(■),来源为龙胆科龙胆属Gentiana秦艽组(Sect.Cruciata)多种高山植物;可分为解吉那保(具蓝紫色花的)与解吉嘎保(具白色花的)两个品种。首次以解吉那保基原植物之一——长梗秦艽Gentiana waltonii Burk.与解吉嘎保基原植物之一——粗壮秦艽Gentiana robusta King ex Hook.f.为模式植物,分别构建其根、茎、叶、花转录组数据库。对原始数据进行除杂,将质控后得到的所有高质量序列进行de novo拼接,分别得到长梗秦艽79 455条、粗壮秦艽78 466条unigene,平均长度分别为834 bp和862 bp。根据GO功能分类,可将unigene分为3大类65分支;根据KOG功能可将unigene分为25类;KEGG代谢通路分析分别发现长梗秦艽和粗壮秦艽中315条、340条unigene参与到20个次生代谢标准通路中。环烯醚萜苷类为藏药解吉及中药秦艽类、龙胆类、当药及青叶胆等药材的指标性成分及活性成分之一,分析结果显示:分别有80条、57条unigene参与编码环烯醚萜苷类合成途径中的24个关键酶,且在不同部位中的表达存在差异;还发现多个SSR和SNP、InDel位点。本工作可为藏药材基原植物遗传图谱构建,分子标记开发,功能基因掌握,有效成分累积规律、道地性形成机制、藏药材品种科学内涵的探讨,分子育种及濒危藏药高山植物就地保护等提供基础科学资料。

西藏产粗壮秦艽的化学成分

以西藏帕里产粗壮秦艽为研究对象,采用硅胶柱、Sephadex LH-20凝胶柱等手段进行化学成分的分离纯化,通过波谱数据(MS,~1H-NMR,^(13)C-NMR)及标准品对照进行结构鉴定;进一步利用HPLC法测定该植物不同器官(根、茎、叶、花)中几种成分的含量并比较含量差异.从西藏帕里产粗壮秦艽中分离得到5个化合物,分别鉴定为栎瘿酸(1)、谷甾醇(2)、龙胆苦苷(3)、马钱苷酸(4)、獐牙菜苦苷(5),其中环烯醚萜苷类化合物马钱苷酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷的含量较高,且在4种器官中含量差异明显.本研究首次从西藏帕里产粗壮秦艽中分离得到化合物1-5,其中环烯醚萜苷类含量丰富,在4种器官中马钱苷酸和龙胆苦苷总含量均达到2015年版药典标准,因此根、茎、叶与花均具有同等重要的开发价值.

基于叶绿体全基因组序列的双峰法鉴定粗茎秦艽及其近缘物种

粗茎秦艽Gentiana crassicaulis Duthie ex Burk.为中药“秦艽”的基原植物之一,而同为龙胆属秦艽组的西藏秦艽Gentiana tibetica King ex Hook.f.、粗壮秦艽Gentiana robusta King ex Hook.f.为其近缘的非国家药典品种。因存在较大的种内形态变异,粗茎秦艽与西藏秦艽、粗壮秦艽间表现出较高的形态相似性,且存在一定的同域分布,为粗茎秦艽的鉴定带来了一定的难度。为有效鉴定中药秦艽国家药典品种粗茎秦艽与其近缘的非药典品种,本文基于前期测定的粗茎秦艽、粗壮秦艽叶绿体基因组序列,首次测定西藏秦艽叶绿体基因组序列,筛选分子标记并构建这三个物种的分子鉴定方法。结果如下:①获得西藏秦艽叶绿体基因组序列,长度为148765 bp,大单拷贝区(LSC)、小单拷贝区(SSC)分别为81163 bp和17070 bp,反向重复区(IR)为25266 bp;②粗茎秦艽、西藏秦艽、粗壮秦艽的叶绿体基因组结构一致;粗茎秦艽与西藏秦艽的重复序列、SSR分布情况一致,两个物种间叶绿体基因组变异位点数仅为9;③筛选同时对这三个物种有效鉴定的单核苷酸多态性位点(SNP),并验证稳定性;④建立SNP双峰检测方法,对各物种及混合样品进行有效鉴定。本工作可为粗茎秦艽及其近缘物种的DNA分子鉴定,以及相关藏药品种的整理等工作提供基础资料。