麻花艽内生真菌群落多样性及土壤理化因子相关性研究

本文以高寒草甸的麻花艽(Gentiana straminea Maxim.)为研究对象,采用组织块培养法对麻花艽根、花、茎和叶四个组织部位的内生真菌进行分离,经形态学及ITS测序鉴定后分析麻花艽内生真菌的多样性。结果显示,麻花艽不同组织部位中共获得268株内生真菌,共聚类为40个OTUs。根、花、茎和叶部位的较优势菌属依次为刚毛藻属(Cladophora),灰葡萄孢属(Botrytis),枝孢菌属(Cladosporium)和壳针孢菌属(Septoria)。内生真菌群落多样性指数(Shannon指数、Simpson指数)均为根部较高。根和茎部位内生真菌群落结构相近,差异较小。土壤pH、全氮、全钾、速效磷和容重是麻花艽内生真菌群落多样性的主要影响因子。

藏药粗壮秦艽和麻花秦艽的成分鉴定及4个成分的含量测定

目的:建立藏药粗壮秦艽和麻花秦艽的UPLC-TOF-MS化学成分谱分析方法以及马钱苷酸、龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷的含量测定方法。方法:依据高分辨质谱提供的分子式、二级质谱裂解碎片及相关文献记载鉴定化学成分。选择[M-H]^(-)作为马钱苷酸的专属离子、[M+HCOO]^(-)作为獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷专属离子对其进行含量测定,对不同批次药材中化学成分谱进行比较分析。结果:建立了藏药粗壮秦艽和麻花秦艽药材的UPLC-TOF-MS成分图谱,指认38个成分,包括三萜类10个、黄酮类4个、环烯醚萜类21个、其他类成分3个。在2种药材中马钱苷酸、龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷的含量分别为0.51%~0.90%、1.63%~2.31%、0.08%~0.21%、0.09%~0.28%。结论:建立的藏药粗壮秦艽和中药麻花秦艽UPLC-TOF-MS成分谱能全面反映药材的化学成分组成以及不同基原药材的成分差异,含量测定方法稳定可行,可为藏药粗壮秦艽药材的质量评价提供参考。

瑞香狼毒和麻花秦艽乙醇提取物对3种杂草种子萌发的影响

为探究瑞香狼毒和麻花秦艽乙醇提取物对杂草种子萌发的抑制作用,本试验采用种子生物测定法,测定青海天然草地瑞香狼毒和麻花秦艽乙醇提取物及分离组分对野燕麦、旱雀麦和野芥菜的生物活性.结果表明:瑞香狼毒乙醇提取物对3种杂草种子萌发有一定的抑制作用,麻花秦艽乙醇提取物对3种杂草种子萌发表现为"低促高抑"的双重效应,而瑞香狼毒和麻花秦艽乙醇提取物的不同有机溶剂萃取相对杂草种子萌发抑制作用强弱顺序分别为旱雀麦>野芥菜>野燕麦和野芥菜>野燕麦>旱雀麦.瑞香狼毒保留时间为5.50 min组分对旱雀麦根长抑制率较高,达83.38%,对野芥菜根长抑制率为73.85%;而麻花秦艽保留时间为15.66 min组分对旱雀麦和野芥菜种子芽长和根长的抑制率较低,介于30.18%~56.68%.可见,瑞香狼毒对杂草种子萌发表现出较强的抑制作用,具有一定的开发利用价值.

基于数据挖掘分析含藏药材麻花艽的处方配伍规律

目的:运用数据挖掘手段研究含藏药麻花艽处方的配伍规律。方法:收集并整理藏医药著作中含藏药麻花艽的处方。应用统计软件Rx644.1.3Apriori算法进行关联规则分析、用Microsoft Excel 2019进行频数的统计,以及应用中医传承辅助平台进行用药规律分析并找出核心药物组合。结果:《藏医药方剂大全》等藏医药著作中共获得142个含藏药麻花艽的处方,涉及260种藏药材,关联167种疾病。通过频次统计分析得出,频数靠前的五味藏药材依次为,兔耳草(75)、川盔乌头(52)、翼首草(50)、诃子(48)、鸭嘴花(43),此类药材除诃子外,均为凉性药物,与藏药麻花艽配伍使用来治疗热性疾病,如:赤巴病、热症、瘟疫等。通过关联规则整理并挖掘出置信度、频数、支持度、均最高的药物组合为麻花艽—兔耳草,麻花艽—船盔乌头,麻花艽—诃子。结论:含藏药麻花艽的处方治疗赤巴病、热症等疾病时多与清热解毒、干涸淤血、瘟疫发热、治疗黄水病等的药物联合使用,并且发现相关病理与核心药物组合之间的相互对应,与藏药方剂学的“君臣佐使”配伍规律相符合,表明此规律为藏药复方新药开发中具有重要的指导意义。研究结果为临床合理使用藏药麻花艽及含麻花艽处方提供了重要参考依据。

藏药麻花艽中四种苦苷类化学成分的HPLC测定

建立了藏药麻花艽中龙胆苦苷（gentiopicroside）、落干酸（loganic acid）、獐牙菜苦苷（swertiamarin）和獐牙菜苷（sweroside） 4种苦苷类成分的HPLC分析方法. 色谱柱为Eclipse XDB-C8 （4.6 mm i.d. ×150 mm, 5 μm）, 流动相为体积分数5%乙腈＋10 mmoL甲酸～95%乙腈水溶液, 检测波长为240 nm. 结果表明, 该方法具有良好的线性关系和回收率, 为麻花艽中苦苷类成分的进一步开发利用提供了科学依据.

藏药麻花秦艽中苦苷类成分的含量测定及品质评价

建立了反相高效液相色谱检测藏药麻花秦艽药材中主要苦苷类成分龙胆苦苷与落干酸含量的分析方法,对栽培和野生藏药植物麻花秦艽中苦苷类成分进行了定性、定量分析,对栽培麻花秦艽代替野生麻花秦艽入药进行了品质评价,结果表明,栽培植物藏药麻花秦艽不仅可代替野生药材入药,并具有深度开发的前景.

麻花秦艽种子休眠机理及其破除方法

通过对干燥贮藏后熟麻花秦艽种子透水性和粗提物活性的测定以及采用高锰酸钾、赤霉素、青霉素、硫酸、流水浸泡方法进行发芽试验,探讨了种子休眠机理和破除休眠的技术。结果表明:麻花秦艽种子吸水过程符合Logistic曲线,其种皮对种子吸水无阻碍作用;硫酸和高锰酸钾处理极显著提高了麻花秦艽种子的发芽率(P<0.01),说明种皮机械障碍是种子萌发的因素之一。种子粗提物在浓度为0.02—0.2 g/mL时具有很强的抑制活性,均对小麦、白菜和麻花秦艽种子萌发和生长产生抑制作用以及流水浸泡可以提高麻花秦艽种子发芽率,表明种子内源抑制物是影响其休眠的另一因素。不同处理均打破了种子休眠,显著提高了种子发芽率,其中1.5%高锰酸钾浸泡10 min光照培养下种子发芽率及发芽势、发芽指数和活力指数均显著高于其他处理(P<0.05)。相比对照,1.5%高锰酸钾处理的种子发芽率极显著提高106.9%。经1.5%高锰酸钾浸泡10 min的麻花秦艽种子粗提物对白菜种子萌发的抑制作用低于未处理,以浓度为0.02—0.04 g/mL时抑制显著,说明高锰酸钾可减弱麻花秦艽种子内源抑制物的活性。综上所述,麻花秦艽种子的休眠属综合休眠。

藏药麻花秦艽化学成分研究

目的：研究麻花秦艽的化学成分。方法：利用微孔树脂柱、硅胶柱、Sephadex LH-20凝胶柱和制备色谱等手段进行分离纯化,通过NMR、MS等波谱手段进行结构鉴定。结果：从麻花秦艽根中分离得到12个化合物,分别鉴定为：胡萝卜苷（1）、β-谷甾醇（2）、熊果酸（3）、獐牙菜苷（4）、獐牙菜苦苷（5）、龙胆苦苷（6）、6＇-O-乙酰基-龙胆苦苷（7）、6＇-O-β-D-吡喃葡萄糖基-獐牙菜苷（8）、原儿茶醛（9）、原儿茶酸（10）、没食子酸甲酯（11）、邻苯二甲酸二丁酯（12）。结论：其中,化合物8~12为首次从麻花秦艽中分离得到。

西宁和海北麻花艽净光合速率和叶绿素荧光参数的日变化比较

以青藏高原药用植物麻花艽为材料,研究了西宁和海北两个地区麻花艽叶片的净光合速率和叶绿素荧光参数的日变化进程.结果表明:在中午太阳辐射较强时两地麻花艽叶片的净光合速率Pn均下降,下午随日间光强的减弱逐渐上升,形成双峰曲线;海北麻花艽叶片的净光合速率Pn及其日变幅均低于西宁.随日间光强的增加麻花艽叶片的PS最大光化学效率Fv/Fm、PS的潜在活性Fv/Fo下降,非光化学猝灭系数NPQ则上升,黄昏各参数都恢复到接近早晨的水平,表明未发生光合机构的破坏;一天中海北麻花艽叶片的Pn、Fv/Fm、Fv/Fo均低于西宁,表明随海拔的升高、光强的增加,海北麻花艽热耗散增多,午间光抑制加重.

青海秦艽高效液相色谱指纹图谱的研究

利用高效液相色谱法建立了青海秦艽的色谱指纹图谱.色谱条件:K rom as il C18柱(250 mm×4.6 mm×5μm),甲醇∶磷酸水(0.04%)梯度洗脱,流速为1 mL/m in,检测波长222 nm.通过比较发现秦艽样品的13个主要共有峰,可作为鉴别秦艽药材的主要依据.对12批秦艽药材进行了相似度计算和聚类分析,结果表明,所建立的秦艽指纹图谱可用于秦艽药材的真伪鉴别和质量评价.

麻花秦艽休眠芽的玻璃化超低温保存及植株再生

目的:采用玻璃化超低温技术保存濒危药用植物麻花秦艽的休眠芽。方法:以休眠芽作试材,研究休眠芽大小、不同的预处理方法、装载时间和玻璃化保护液等因素对休眠芽超低温保存效果的影响。结果:10～11 mm大小的休眠芽在含有0.3 mol/L、0.5 mol/L、0.7 mol/L蔗糖的MS培养基中暗培养各1 d,在装载液(2 mol/L甘油+0.4 mol/L蔗糖)中20℃处理20 min,于玻璃化保护液PVS2(30%甘油+15%乙二醇+15%二甲基亚砜+0.4mol/L蔗糖)中0℃处理40 min,换新鲜PVS2保护液并迅速投入液氮,液氮中保存24 h后,在40℃水浴中解冻2～3 min,用含1.2 mol/L蔗糖的1/2MS无机盐液体培养基洗涤2次,每次10 min,无菌滤纸吸干后接种到恢复培养基中,在22℃条件下暗培养1周后转入正常条件培养,再生率高达83.3%。结论:建立了高效的麻花秦艽休眠芽玻璃化超低温保存技术体系。

麻花秦艽开发利用探讨

采用高效液相色谱法(HPLC)测定甘肃栽培麻花秦艽不同部位、产地和采收期样品的龙胆苦苷含量。结果表明:3年生秦艽的龙胆苦苷含量稍高于2年生,但差异性不显著;根、茎和叶的平均龙胆苦苷含量依次为13.3%、2.95%和2.24%;同一生长年限随采收期延后,茎、叶中龙胆苦苷含量逐渐降低,而根中含量却逐渐上升;不同产地的根样品,依海拔由低到高的,陇西、康乐和临潭分别为10.23%、13.12%和15.54%。本探讨获初步结论:甘肃栽培的麻花秦艽茎和叶的龙胆苦苷均已达到药典的2%标准,宜加以开发利用;从龙胆苦苷产量及生产成本综合考虑,以种植两年较好,根的采收期宜在10月以后封冻前;而以茎叶为生产目标可在8月下旬至9月初采收为佳;高海拔区栽培秦艽有利于秦艽根中龙胆苦苷含量的积累。

藏药材麻花秦艽中砷汞铅镉含量分析

对青海省内采集的麻花秦艽中的元素砷、汞、铅、镉的含量进行了分析测定。结果表明 ,麻花秦艽中四种元素含量较低 ,并且各部位含量差异较大 ,其中基部茎叶含量较高 ,入药部位根部最少 ,为以后的开发利用提供了基础数据。

青海不同地区藏药麻花艽中环烯醚萜苷类成分的含量测定与品质评价

目的测定藏药麻花艽中环烯醚萜苷类成分番木鳖酸和龙胆苦苷的含量,评价青海不同产地麻花艽的质量。方法优化了测定麻花艽中番木鳖酸和龙胆苦苷的高效液相色谱条件；利用正交试验研究了番木鳖酸和龙胆苦苷的最佳提取方法。结果测定了青海16个不同产地麻花艽中2种环烯醚萜苷类有效成分的含量。结论青海不同地区麻花艽质量均符合中国药典2005年版要求,但样品中差异较大。

麻花秦艽化学成分的研究

通过硅胶柱层析及薄层层析方法对甘肃产麻花秦艽(Gentiana straminea Maxim)根醇提物进行分离,得到7个化合物,应用核磁共振等光谱方法及与对照品对照鉴定结构分别为龙胆苦苷(gentiopicroside,Ⅰ),熊果酸(urso-licacid,Ⅱ),胡萝卜苷(β-sitoseteryl-3-O-β-D-glucopyranoside,Ⅲ),β-D-葡萄糖乙苷(ethyl-β-D-glucopyranoside,Ⅳ),N-正二十五烷-2-羧基苯甲酰胺(N-pentacosy-2-carboxy-benzoylamide,Ⅴ),乌苏醇(uvaol,Ⅵ)和2′-(邻,间-二羟苯甲酰)獐牙菜苷(2′-(o,m-phenylglycin)sweroside,Ⅶ)。其中化合物Ⅳ为从该属中首次分离得到的化合物,化合物Ⅴ,Ⅵ和Ⅶ为该植物中分离得到的化合物。

麻花艽叶片光合色素含量及厚度对UV-B辐射的响应

以中国科学院海北高寒草甸生态系统定位站自然生长的麻花艽(Gentiana straminea Maxim.)为材料,进行了不同月份和草盛期不同天数的短期增补和过滤UV-B辐射试验,比较分析叶片光合色素含量和叶片厚度等的变化。结果表明:(1)生长季内麻花艽叶片叶绿素a+b含量呈波动变化的趋势,7月份含量均较高;草盛期不同天数处理时,UV-B辐射对麻花艽叶片叶绿素a+b含量的影响不大。(2)生长季内麻花艽叶片类胡萝卜素含量也是7月份较高,短期增补UV-B辐射有降低其含量的趋势。(3)增加UV-B辐射能够降低Chl a/b值;自然UV-B辐射下Car/Chl比值能维持一个较高水平,是对强辐射的适应。(4)随处理时间延长,麻花艽叶片厚度有降低趋势,其叶缘出现一些发黄、变黑、变透明等受害症状,叶片能通过增加叶片厚度来适应增强的UV-B辐射。可见,生长于高海拔地区的植物麻花艽虽然对UV-B辐射表现出诸多的生理适应特性,但依然不可避免地受到其损伤。

麻花秦艽种子吸水和萌发特性的研究

研究了不同温度(4、20℃)下麻花秦艽种子吸水规律和不同浓度赤霉素、硫酸、双氧水和高锰酸钾处理的种子在光照、黑暗条件下的发芽率、发芽势、发芽指数和活力指数的变化.结果显示:供试种子在4℃和20℃时吸水规律均符合Logistic曲线方程,分为急剧吸水期、稳定吸水期和饱和吸水期3个阶段.在20℃的最大吸水速率是4℃的1.99倍,为23.90g/h.高浓度的硫酸(4、8mol/L)和双氧水(3%、5%)可抑制供试种子的萌发,而其他浓度处理均可打破供试种子的休眠.种子发芽质量最佳条件为1.5%高锰酸钾处理10min,光照培养.在此条件下,麻花秦艽种子的发芽率、发芽势、发芽指数和活力指数分别比对照提高了106.90%、521.43%、266.71%、709.66%(P<0.01).不同处理下供试种子萌发对光的响应存在差异性.

增强UV-B辐射对麻花艽叶片的抗氧化酶的影响

以青藏高原的特有植物麻花艽为材料 ,研究麻花艽叶片抗氧化酶系统对增强 U V- B辐射的响应 .结果表明 :在 U V- B处理初期 ,麻花艽叶片 SOD、POD的酶活性都能增加 ,但随着处理时间的延长 ,SOD、POD的活性呈现下降趋势 .麻花艽叶片 CAT的酶活性在 UV - B处理后下降明显 ,但作为清除叶绿体中 H2 O2 的关键酶 AP的酶活性表现为明显地增加趋势 ,说明在对麻花艽叶片增强 UV - B辐射反应中 AP起有着重要作用 . MDA的含量随 U V-B处理时间延长而增加 ,表明 U V- B降低了细胞内活性氧自由基的清除能力 ,膜脂过氧化作用加剧 ,导致了对麻花艽叶片的伤害效应 .

麻花艽不同部位抗氧化活性研究

本文分别采用DPPH法和铜离子还原能力法(CUPRAC)测定麻花艽花、茎叶和根的抗氧化活性,并比较其不同部位的抗氧化活性。抗氧化活性分析结果表明麻花艽花、茎叶、根的DPPH自由基清除能力均低于没食子酸,其清除DPPH自由基的半数有效量(IC_(50))分别为260、341.3和2920.6μg/m L;麻花艽花、茎叶和根的Cu2+的还原能力Trolox当量(TEAC值)分别为0.127、0.108和0.019μg/m L。结果表明,麻花艽花、茎叶和根均具有抗氧化活性,其抗氧化能力的强弱顺序为花>茎叶>根。

白花龙胆花抗炎作用研究

为了研究白花龙胆花的抗炎作用,本文对白花龙胆花水提物和70%乙醇提取物的抗炎活性进行了试验,并测定了水提物和70%乙醇提物中龙胆苦苷的含量。试验采用二甲苯所致小鼠急性耳肿胀试验和二甲苯所致小鼠腹部毛细管通透性试验。将昆明种小白鼠分为7组,分别为空白对照组,白花龙胆花水提物高、中、低剂量组和70%乙醇提取物高、中、低剂量组,灌胃(ig)给药14d后,用二甲苯分别于小鼠右耳及腹部致炎。测定左右耳重量,计算肿胀度及肿胀抑制率,测定吸光值。结果表明:白花龙胆花水提物和乙醇提取物的中、高剂量组对于二甲苯所致的小鼠急性耳肿胀和小鼠腹部毛细管通透性都有显著的抑制作用。从而表明:白花龙胆花具有显著的抗炎疗效。