基于DNA条形码序列的辽宁省龙胆药材鉴定研究

目的基于内转录间隔区(ITS)碱基序列,运用DNA条形码技术对辽宁省9个地区道地药用植物龙胆Gentiana scabra Bge.药材进行鉴别分析。方法利用DNA试剂盒提取法提取26批龙胆样本药用部位DNA,对ITS序列部分进行PCR扩增并双向测序,从Genbank下载药用植物龙胆的其他来源和外群序列,运用SeqMan 7.1.0软件对测序结果进行拼接,使用MEGA 7.0软件分析数据,计算K2P遗传距离,并利用邻接(NJ)法建立系统发育树进行分析。结果根据NJ聚类树结果可知,不同来源的龙胆样品可聚为一大支,其中坚龙胆和三花龙胆分别聚为一支,区别较明显;龙胆与条叶龙胆聚为一支,亲缘关系较近,且结合变异位点与遗传距离可知,龙胆与条叶龙胆的碱基序列相似,种间差异较小。26批样本中仅1个样品出现种内变异,其余样本碱基序列均相同,"清原龙胆"与辽宁省其他地区龙胆样品无明显差异。结论使用ITS序列的DNA条形码技术可用于龙胆药材及其不同来源的基原植物的种内和种间鉴别,且成功率较高。

HPLC法同时测定龙胆泻肝丸中8个活性成分的含量

目的:建立同时测定龙胆泻肝丸中龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、京尼平苷、京尼平龙胆双糖苷、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素含量的高效液相色谱法。方法:采用Sun FireTM C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-0.1%磷酸水(B),梯度洗脱(0~6 min,10%A→15%A;6~7 min,15%A;7~10 min,15%A→16%A;10~15 min,16%A;15~20 min,16%A→30%A;20~35 min,30%A→33%A;35~38 min,33%A→38%A;38~60 min,38%A→48%A),流速为1.0 m L·min^(-1),检测波长为254 nm,柱温为30℃。结果:龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、京尼平苷、京尼平龙胆双糖苷、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素质量浓度分别在2.5~100μg·m L^(-1)(r=0.999 6)、2.5~100μg·m L^(-1)(r=0.999 6)、5~200μg·m L^(-1)(r=0.999 6)、2.5~100μg·m L^(-1)(r=0.999 7)、5~200μg·m L^(-1)(r=0.999 5)、2.5~100μg·m L^(-1)(r=0.999 6)、1.25~50μg·m L^(-1)(r=0.999 8)和1.25~50μg·m L^(-1)(r=0.999 8)范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率(n=9)分别为99.4%、99.2%、99.3%、98.7%、99.6%、98.7%、98.2%和98.0%。6批样品中上述8个成分的含量范围分别为龙胆苦苷1.700~1.717 mg·g^(-1),獐牙菜苦苷0.524~0.544 mg·g^(-1),京尼平苷3.674~3.883 mg·g^(-1),京尼平龙胆双糖苷1.695~1.701 mg·g^(-1),黄芩苷7.235~7.440 mg·g^(-1),汉黄芩苷1.233~1.275 mg·g^(-1),黄芩素0.514~0.523 mg·g^(-1),汉黄芩素0.294~0.298 mg·g^(-1)。结论:该方法可用于龙胆泻肝丸的质量控制。