Inhibition of germ tube's formation of Candida albicans by lactobacillus spp.

Objective:To investigate the effects of 6 strains of lactobacilli and their main culture metabolites on the morphogenesis of Candida albicans (C. albicans) so as to screen medicinal strains as antifungal agents. Methods: Spent culture supernatant (SCS) at different culture time points, live lactobacilli, heatkilled bacteria and bacterial short-chain fatty acids (SCFA) with different molarities were incubated with C. albicans respectively. Crystal violet-based germ tube assay was used to detect the germination of C. albicans and the inhibitory efficiency of each addition was tested by germination rate. Results: SCS of lactobacillus spp. decreased the germination significantly and live bacteria of L. rhamnosus. GG, L. acidophilus L050103-12 as well as L. johnsonii JCM1022 could partially inhibit the conversion, however, all the heatkilled bacteria failed to control the germ tube formation. In addition, only butyric acid blocked the conversion of yeast to hypha among all the SCFA. Conclusion: The excellent fungistasis activities make L.rhamnosus. GG, L. acidophilus L050103-12 and L. johnsonii JCM1022 potential strains as antifungal drugs and the inhibition seems to have direct correlation to the metabolites.

鹅掌疯醋剂对抗白色念珠菌及其早期生物膜的体外实验研究

目的 分析鹅掌疯醋剂对白色念珠菌及早期生物膜的作用及其机制。方法 通过微量稀释法测定鹅掌疯醋剂对白色念珠菌的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),通过酶标仪测得其对菌体渗透性的影响,使用扫描电子显微镜和透射电子显微镜观察其对菌体超微结构的影响,并且通过CCK-8法和Spider平板法测定其对白色念珠菌生物被膜形成早期黏附性和芽管形成的影响。结果 鹅掌疯醋剂对白色念珠菌的MIC为药物原浓度的1/16,经过鹅掌疯醋剂处理后白色念珠菌细胞外紫外物质吸收增加,念珠菌超微结构被破坏,早期生物膜的黏附率和芽管形成受到抑制。结论 鹅掌疯醋剂有一定的抗真菌及抑制早期生物膜能力,其作用机制可能与改变菌体渗透性,破坏菌体结构,抑制早期生物膜的黏附率和芽管形成有关。

咯菌腈对四种牡丹叶片病原真菌的抑制活性

【目的】探究咯菌腈对牡丹黑斑病菌(Alternaria suffruticosae)、黄斑病菌(Phyllosticta commonsii)、腔孢叶斑病菌(Hainesia lythri)和叶霉病菌(Cladosporium paeoniae)菌丝生长、孢子萌发、芽管伸长及产孢的抑制活性,分析咯菌腈在牡丹病害化学防治上的应用前景。【方法】采用菌丝生长速率法测定咯菌腈对菌丝生长的抑制活性,采用涂布平板法测定咯菌腈对孢子萌发、产孢时间及产孢量、芽管伸长及芽管和孢子形态的影响。【结果】咯菌腈对腔孢叶斑病菌菌丝生长的抑制作用最强,EC_(50)为0.01μg·mL^(-1),其次为黑斑病菌和黄斑病菌,分别为0.07和0.35μg·mL^(-1);咯菌腈对4种病菌的孢子萌发均有较强的抑制作用,对腔孢叶斑病菌的抑制作用最强,其EC_(50)为1.26μg·mL^(-1),对其他3种病菌孢子萌发的EC_(50)在3.27—3.45μg·mL^(-1);0.1μg·mL^(-1)咯菌腈对4种病菌分生孢子芽管伸长的抑制率在40%—70%,表明咯菌腈对4种病菌分生孢子芽管伸长均有明显的抑制作用,浓度越大抑制作用越强,各浓度间差异显著,其中对腔孢叶斑病菌芽管伸长抑制的EC_(50)为0.04μg·mL^(-1),抑制作用最强,对其他3种病菌芽管伸长的EC_(50)在0.08—0.22μg·mL^(-1);咯菌腈对黑斑病菌和黄斑病菌分生孢子和芽管的致畸作用强烈,可导致孢子及芽管膨大、过度分枝,而对叶霉病菌和腔孢叶斑病菌致畸作用较弱,芽管及孢子形态基本正常;咯菌腈可推迟黑斑病菌、黄斑病菌及叶霉病菌的产孢时间,对黑斑病菌产孢量的抑制作用最强,EC_(50)为0.05μg·mL^(-1),对叶霉病菌次之,EC_(50)为0.38μg·mL^(-1),但对腔孢叶斑病菌产孢有促进作用。【结论】咯菌腈对牡丹黑斑病菌及腔孢叶斑病菌的菌丝生长、孢子萌发及芽管伸长均有很强的抑制作用,但对腔孢叶斑产孢具有一定的促进作用;对叶霉病菌和黄斑病菌孢子萌发及芽管伸长、黄斑病菌菌丝生长及叶霉病菌产孢的抑制作用强烈;由于咯菌腈内吸活性较弱,无法抑制已侵入牡丹叶片的病原真菌的生长,故建议作为保护剂在病害发生前施用。

粗腿羊肚菌子囊孢子萌发过程及其细胞核行为

用4μg/mL 4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)对细胞核染色,采用激光共聚焦显微成像技术观察粗腿羊肚菌(Morchella crassipes)子囊孢子的萌发过程。新鲜的粗腿羊肚菌子囊孢子呈椭圆状,大小13.0~15.3μm×21.5~24.0μm,成熟子囊孢子的细胞核数量为18~32个;CYM液体培养基,23℃培养6h后子囊孢子体积逐渐膨大至初始体积的1.7~2.9倍,泡囊化现象明显;6~12h开始形成芽管,泡囊逐渐消失,出芽点在椭圆形细胞的一端形成或两端先后形成,数量不等的细胞核由子囊孢子内迁至芽管中,形成多核丝状;芽管生长至20~30μm后,在出芽点与孢子连接处形成隔膜,12~24h后,随着芽管的持续生长,形成新的隔膜和菌丝细胞,菌丝细胞多核;芽管及初生菌丝直径6~8μm,约为子囊孢子直径的1/3;24h内没有观察到初生菌丝之间发生细胞融合现象。

生防菌株LB-1对烟草白粉病的抑制效果及对病菌孢子萌发的影响

【目的】为检测近缘毛壳菌(Chaetomium subaffine) LB-1对烟草白粉病的抑制效果。【方法】以中烟90为供试烟草品种,分析了LB-1对烟草白粉病的抑制效果及对病菌分生孢子萌发的影响。【结果】LB-1菌悬液叶面处理对供试烟草盆栽苗和离体叶段白粉病的发生无明显影响,但LB-1发酵液叶面喷施盆栽苗和浸蘸处理离体叶段均能显著抑制烟草白粉病的发生,防效和抑制率分别为44.90%和53.11%;显微镜检发现,LB-1发酵液能够引起白粉病菌孢子的皱缩和畸形。【结论】近缘毛壳菌株LB-1可用于防治烟草白粉病。

抗白念珠菌芽管单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其对血清芽管诱导率的影响

目的制备并鉴定抗白念珠菌芽管单克隆抗体杂交瘤细胞株,观察该单抗对白念珠菌菌相转换的影响。方法白念珠菌ATCC-90028标准株带芽管孢子做抗原,运用细胞融合技术,制备抗白念珠菌芽管胞壁外膜抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株,并鉴定。将该单抗参与白念珠菌芽管血清诱导,对比其芽管诱导率与血清芽管诱导率。结果建立1株持续分泌抗白念珠菌芽管胞壁外膜抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株M cAb03.2C1-C2。其小鼠腹水单克隆抗体效价达1∶25 600;抗体重链属IgG1亚类,轻链属λ型;证实M cAb03.2C1-C2的靶位是位于白念珠菌芽管胞壁外膜上分子量为156kD的抗原成分。间接免疫荧光(IIF)可见单抗能与白念珠菌芽管特异性地结合,与白念珠菌的孢子相不发生反应。单抗能明显降低芽管诱导诱导率。结论本研究建立的M cAb03.2C1-C2对白念珠菌致病相-芽管有高度的特异性,为早期、快速地诊断系统性白念珠菌感染提供了新的前景。M cAb03.2C1-C2对菌相转换有明显的抑制作用,可能在抗白念珠菌系统性感染中起保护性作用。

大蒜素对体外白色念珠菌生物活性影响的研究

目的:探讨大蒜素在体外对白色念珠菌生物活性的影响。方法:采用NCCLS M27-12酵母菌微量稀释法测定大蒜素对白色念珠菌的最小抑菌浓度(MIC),采用芽管生成试验观察不同浓度的大蒜素对白色念珠菌芽管的抑制作用,采用MTT法检测大蒜素对白色念珠菌生物膜不同形成阶段的作用及大蒜素预先包被对其生物膜形成的影响。结果:大蒜素对白色念珠菌的MIC值为12.5μg/mL,能够有效地抑制白色念珠菌芽管的生成,且在白色念珠菌生物膜形成的早期阶段发挥有效的抑制作用。结论:大蒜素在体外能够有效抑制白色念珠菌的生物活性。

粉防己碱对白念珠菌生物膜及芽管形成的影响

目的研究粉防己碱(Tet)对白念珠菌(Candida albicans)生物膜及芽管形成的影响。方法采用XTT还原比色法观察Tet对C.albicans成膜的影响;将0.01、0.1、1μmol/L的Tet分别与C.albicans悬液共同孵育,显微镜下计数芽管形成率。分别设阳性对照组(两性霉素B与白念珠菌悬液共孵育)和阴性对照组(白念珠菌悬液中不加Tet),试验重复5次。结果 Tet各剂量组对C.albicans生物膜及芽管形成具有明显抑制作用(P<0.05),其作用与药物浓度呈正相关,其中1μmol/L的Tet对C.albicans生物膜及芽管形成的抑制率最高,C.albicans生物膜及芽管形成率低于阴性对照组(P<0.05),1μmol/L的Tet组生物膜及芽管形成率低于0.01及0.1μmol/L组(P<0.05)。与阳性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Tet对体外C.albicans生物膜及芽管形成有一定的抑制作用。

白粉病菌初生芽管对小麦诱导抗性的细胞学研究

利用多种细胞学方法对不同抗病性小麦白粉菌初生芽管的侵染行为及寄主细胞的诱导抗性进行了研究。结果表明，病菌初生芽管可诱导单个寄主细胞，产生比大麦和燕麦更为强烈的抗性，足以抵制后来附着胞的入侵，且这种诱导抗性还可向相邻细胞传递；在超微结构上，诱导抗性表现为寄主乳突反应能力增强，寄主细胞能够在附着胞入侵位点下，产生比高乳突抗性品种结构更为精致和坚硬的半圆形乳突，令附着胞入侵栓无法穿入。此外，本文还对诱导抗性的利用问题进行了讨论。

不同培养载体对小麦条锈菌夏孢子人工萌发的影响

为探索适合小麦条锈菌寄主体外萌发的载体,并建立基于不同研究目的的小麦条锈菌夏孢子人工萌发技术,采用超声波水雾培养法,以小麦条锈菌生理小种CYR32为供试材料,探讨了不同培养载体对小麦条锈菌夏孢子萌发特性的影响。在最适温度和湿度条件下,以4种不同材料为培养载体,小麦条锈菌夏孢子的萌发率、芽管生长率和外观显示情况有显著差异。在尼龙纱网上的夏孢子萌发速度和芽管伸长速度最快,12h内萌发率最高可达93.40%,芽管最长可达446.71μm;亲水滤膜上夏孢子的萌发率和芽管长仅次于纱网;亲水塑料膜和PVDF膜上夏孢子的萌发率均高于普通亲水载玻片,而芽管长度低于普通亲水载玻片。采用侧光照明时,在亲水滤膜和PVDF膜上极易清晰观测到夏孢子及其芽管内的黄色颗粒物。在亲水塑料膜上,还可观察到夏孢子萌发12h后,芽管尾部膨大形成类似附着胞的结构。结果显示,超声波水雾可使条锈菌夏孢子处于水分饱和的环境,而纱网纤维组成的小格具有很好的保水结露功能,能使夏孢子萌发快,萌发效率高,芽管生长快;另一方面,使用其他培养载体还可满足观测条锈菌夏孢子内黄色颗粒物向芽管内转移和芽管尾部形成类似附着胞结构的目的。

小麦条锈菌夏孢子芽管在小麦叶片上结合现象的研究

用白化菌系作标记,发现在小麦叶片上,小麦条锈菌不同小种间可发生芽管结合并形成结合体。染核观察发现,结合体内有1～4个细胞核。研究结果表明,在多小种共存的自然条件下,不同小种的夏孢子在小麦叶片上发生芽管结合,可能是小麦条锈菌发生异核作用的重要方式之一。

牛奶培养基用于鉴定白色念珠菌芽管和厚膜孢子

１０ｇ／Ｌ脱脂奶粉或７．５％鲜牛奶培养基用于诱导白色念珠菌芽管和厚膜孢子的形成。在振荡条件下于３７℃培养３０ｍｉｎ或６０ｍｉｎ即可观察芽管，该培养基诱导芽管形成的百分率明显高于人血清，且特异性和人血清一样。白色念珠菌在牛奶培养基中于室温静置培养４８ｈ，可形成厚膜孢子。本法鉴定白色念珠菌简便、快速、特异、安全且培养基容易制备。

小鼠腹腔感染中白色念珠菌芽管及蛋白酶活性与其毒力的相关性研究

目的 :探讨白色念珠菌与腹膜炎发生相关的毒力因子。方法 :4 0株临床分离菌分别以腹腔接种方式感染小鼠进行毒力试验 ,以血清中丙氨酸氨基转移酶 (AL T)和α-淀粉酶 (AM)活力为表示菌株毒力的指标。结果 :白念菌体外测得的芽管长度分别与受染动物血清中 AL T、AM含量呈正相关 (r ALT=0 .893,r AM=0 .80 1,P<0 .0 1) ,菌株分泌型天冬氨酸蛋白酶 (SAP)活力与血中 AL T、AM水平也存在显著的正相关关系 (P<0 .0 1) ,且经 SAP特异抑制剂处理过的受染小鼠其 AL T活性显著降低 (P<0 .0 1)。结论

抗白念珠菌芽管单克隆抗体的制备及特性鉴定

目的制备抗白念珠菌芽管的单克隆抗体mAb03.2C1-C2,并对其特性进行分析,以探讨其应用于实验室检测的可行性。方法利用杂交瘤技术制备分泌抗白念珠菌芽管胞壁外膜抗原mAb的杂交瘤细胞株,对mAb的Ig亚类进行鉴定。用间接免疫荧光(IIF)法对mAb的抗体活性及特异性进行测定。在白念珠菌芽管形成条件下,加入mAb,观察其对白念珠菌芽管诱导的抑制及白念珠菌对上皮细胞、内皮细胞黏附的抑制。复苏冻存的杂交瘤细胞株,分析其持续分泌mAb的能力。结果获得1株mAb03.2C1-C2,其Ig亚类为IgG1。该mAb仅与白念珠菌芽管特异性结合,并能显著降低白念珠菌芽管的生成率以及在芽管形成条件下对上皮细胞、内皮细胞的黏附,其抑制作用与该mAb的浓度呈正比。结论制备的mAb03.2C1-C2抗体效价高,在体外能抑制白念珠菌芽管的形成,降低白念珠菌的侵袭力。而且其对白念珠菌芽管具有高度的特异性,可用于白念珠菌和都柏林念珠菌的快速鉴别。

杨树黑斑病菌Marssonina brunnea的有丝分裂过程和染色体数观察(英文)

利用芽管萌发技术(GTBM)对杨树黑斑病菌Marssonina brunnea分生孢子萌发过程中的有丝分裂过程进行了观察,M.brunnea的有丝分裂过程可以分为4个时期:前期染色质逐渐浓缩变短,中期可清楚观察得到染色体,后期姐妹染色单体发生分离并分别向两极移动,末期则可见子核的形成。另外,利用DAPI、DAPI/PI和Giemsa 3种不同的染色方法对染色体进行观察比较,结果表明:Giemsa染色法最适用于M.brunnea;在M.brunnea有丝分裂中期可清楚观察到3条染色体。结合3种染色法,比较分析染色体的绝对值大小和相对值大小,其中相对值大小更加清晰和稳定地描述不同染色体间的变化。

单克隆抗体Mab03.2C1-C2靶抗原性质的初步研究

目的分析抗白念珠菌芽管胞壁外膜抗原单抗M ab03.2C1-C2靶抗原的性质,探讨该抗原用于实验室检测的可行性。方法制备单克隆抗体,通过SDS-PAGE及W estern B lotting法分析该单抗所识别的抗原的分子量。体外诱导形成不同长度的芽管,分析其表面靶抗原的形成情况。不同的生化方法处理芽管,采用间接免疫荧光方法,对单抗靶抗原表位性质进行分析。取口腔念珠菌病患者的真菌涂片标本,用IIF方法观察体外诱导培养之芽管与体内白念芽管表面抗原分布异同。结果体外诱导30 m in后白念珠菌芽管表面方可检测到靶抗原。体内白念菌丝与体外诱导菌丝表面靶抗原分布不同。靶抗原表位可能位于N-糖链上。结论M ab03.2C1-C2靶抗原为白念菌丝形成过程中生成的新成分,可能参与白念致病过程。靶抗原为糖蛋白,抗原性显著,对临床应用于系统性白念珠菌感染的检测有意义。

向日葵锈菌夏孢子芽管在向日葵叶片上的结合现象及核相研究

应用荧光染色技术，研究了向日葵锈菌夏孢子芽管在向日葵叶片上的结合现象及其核相状况。观察发现，夏孢子萌发后形成的芽管通常为双核，也有单核、三核及四核。夏孢子芽管可以在、２个、３个及多个芽管间结合并形成结合体。结合后的芽管拥有多个细胞核。在结合体内有双核、三核及四核。结合体可以继续产生菌丝。这一现象的发现，为进一步研究向日葵锈菌多核现象的生物学意义及其变异奠定了基础。

抗白念珠菌芽管单抗MAb03.2C1-C2特异性及临床初步应用研究

目的分析抗白念珠菌芽管胞壁外膜抗原单克隆抗体MAb03.2C1-C2的特异性及其应用于实验室检测的可行性。方法用临床分离白念珠菌、致病非白念的念珠菌的孢子、菌丝及常见的酵母菌、细菌做抗原包被,用间接免疫荧光(IIF)方法,对单抗特异性进行分析。取临床口腔念珠菌病患者的真菌涂片菌丝阳性的标本,用IIF方法检测。结果MAb03.2C1-C2仅与白念珠菌芽管或菌丝特异性地结合,与白念珠菌的孢子不发生结合。13种非白念的念珠菌孢子和菌丝、新型隐球菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌均不能与该单抗相结合。59例口腔念珠菌病真菌涂片IIF试验阳性的标本最终鉴定为白念珠菌(100%)。结论MAb03.2C1-C2对白念珠菌芽管有高度的特异性,并可用于口腔念珠菌病真菌涂片中白念珠菌的早期诊断。

小麦条锈菌夏孢子和芽管细胞核荧光染色技术

用荧光染料DAPI研究结果表明,小麦条锈菌夏孢子染核的最适浓度为5μg/mL,染色时间为3min;夏孢子芽管染核的适宜浓度为3μg/mL,染色时间为2～3min。本研究还发现DAPI对分属于5个亚门中的30种植物病原真菌的孢子(孢子囊)、芽管和菌丝同样具有较好的染核效果。

利用花粉管通道法将查尔酮合酶基因导入仙客来

查尔酮合酶(chalconesynthase-A,CHSA)是花色素合成途径中的一个关键酶,它在植物中表达的量可能影响花的颜色。本项目从矮牵牛(Petuniahybrida)特定发育阶段的花瓣的cDNA中,克隆到查尔酮合酶基因CHSA,插入到含有花椰菜花叶病毒CaMV35S启动子的植物中间表达载体pBI121和pWM101中,首次通过原位生殖系统导入法(具体采用花粉管通道法)转化仙客来,成功地得到4400余粒仙客来转化种子,8株白花植株的个别花瓣出现了黄斑或略显黄色,甚至个别花瓣变成了黄色花瓣;3株白花植株的个别花瓣一半变成了桃红色(二乔),甚至整个花朵完全变成了桃红色。转基因仙客来经PCR检测呈阳性。