陆地棉细胞色素P450基因GhP450-94C1黄萎病抗性功能验证

为了探究陆地棉细胞色素P450基因GhP450-94C1在棉花黄萎病反应中的生物学功能,为棉花黄萎病抗性基因挖掘及抗病育种奠定基础,通过转录组筛选,克隆获得一个细胞色素P450基因GhP450-94C1,利用生物信息学的方法分析该基因的理化性质,通过荧光定量PCR技术分析GhP450-94C1在黄萎病侵染下的表达模式,利用病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术初步探究其在棉花抗黄萎病反应中的生物学功能。结果表明,克隆获得一个陆地棉细胞色素P450基因GhP450-94C1,其开放阅读框(ORF)为1503 bp,编码一个含500个氨基酸的酸性、亲水、不稳定的跨膜蛋白,分子式为C_(2597)H_(4025)N_(691)O_(725)S_(22),分子质量为57.23 ku,定位于内质网膜,含有一个P450结构域;有86.45%的概率存在信号肽;二级结构预测显示,该蛋白含有24个α-螺旋和8个β-折叠;该基因响应黄萎病菌侵染,抑制其表达后植株对黄萎病菌的敏感性增强。初步证明GhP450-94C1是棉花黄萎病抗性反应的一个正向调控因子。

SREBP-1C、GRP-94在非酒精性脂肪肝中的表达及意义

目的探讨非酒精性脂肪肝中肝细胞固醇调节元件结合蛋白(SREBP-1C)与葡萄糖调节蛋白94(GRP-94)的表达变化,评价内质网应激蛋白对肝细胞脂质代谢的影响。方法应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫组织化学法检测18例非酒精性脂肪肝患者和10例正常对照肝组织中SREBP-1C与GRP-94基因和蛋白表达,肝活检评分其炎症和纤维化。结果与正常对照组比较,非酒精性脂肪肝患者肝组织SREBP-1c与GRP-94基因和蛋白表达明显增强(P<0.01)。结论非酒精脂肪肝引起的肝脏损害可能与SREBP-1c和GRP-94表达有关,它们参与脂肪肝的发生,这可能是该病的发病机制之一。

转染结构性雄烷受体对丝裂霉素C和5-氮丙啶-3-羟甲基-1-甲基吲哚-4,7-二酮的细胞毒性的影响

研究丝裂霉素C(MMC)及其衍生物5-氮丙啶-3-羟甲基-1-甲基吲哚-4,7-二酮[5-(aziridin-1-yl)-3-hydroxymethyl-1-methylindole-4,7-dione,629]的细胞毒性,以及结构性雄烷受体(constitutive androstane receptor,CAR)转染对其生物学效应的影响。将质粒mCAR/pCR3转染HepG2细胞,经G418耐药性筛选获得转染CAR的g2car细胞,以转染空载体pCR3(HepG2/pCR3)作为对照。用RT-PCR检测质粒和CYP2B6 mRNA的表达,用MTT法评价MMC和629对g2car细胞和HepG2细胞在有氧和乏氧条件下的细胞毒性。RT-PCR检测到CAR和CYP2B6 mRNA在g2car细胞中有表达,在HepG2细胞中无表达;此外,在乏氧情况下,MMC和629的细胞毒性比在有氧情况下均有所增加(P<0.05),并且转染CAR以后,两者的细胞毒性均增加,但对MMC的影响较明显(P<0.05),对629的影响不明显(P>0.05)。提示CAR可在转录水平调节药物的代谢,提高药物的毒性;CYP2B6可以主要代谢MMC,但不主要代谢629。转染CAR基因可以增加细胞CYP2B6 mRNA的表达,并可引起MMC和629毒性的改变。

HIF-1α和CYP17A1蛋白在脑胶质瘤组织中的表达情况及与患者临床特征的关系

目的探讨细胞色素P450c17a(CYP17A1)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在脑胶质瘤组织中的表达情况及与患者临床特征的关系。方法选择88例脑胶质瘤患者的脑胶质瘤组织和44例外伤后实施开颅手术且术后病理学检查无病变患者的正常脑组织,采用免疫组织化学染色法检测HIF-1α和CYP17A1蛋白的表达情况,分析HIF-1α和CYP17A1蛋白表达与脑胶质瘤患者年龄、性别、世界卫生组织(WHO)胶质瘤分级及肿瘤直径的关系。结果脑胶质瘤组织中HIF-1α和CYP17A1蛋白的阳性表达率分别为67.05%和76.14%,均明显高于正常脑组织的6.82%和11.36%,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。WHO分级为Ⅲ~Ⅳ级的脑胶质瘤患者脑胶质瘤组织中HIF-1α和CYP17A1蛋白的阳性表达率均高于WHO分级为Ⅰ~Ⅱ级的脑胶质瘤患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05);不同年龄、性别、肿瘤直径的脑胶质瘤患者脑胶质瘤组织中HIF-1α和CYP17A1蛋白的阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05)。结论脑胶质瘤组织中HIF-1α和CYP17A1蛋白的阳性表达率较高,且CYP17A1和HIF-1α蛋白表达情况与脑胶质瘤患者的WHO分级密切相关。

CYP17A1基因新突变致17α-羟化酶／17，20-裂解酶部分性缺陷症

目的 研究1例17α-羟化酶／17，20-裂解酶部分性联合缺陷症患者CYP17A1基因突变特点，并结合患者的临床表现与基因突变类型初步探讨P450C17酶蛋白的结构与功能的关系。方法 收集1例17α-羟化酶／17，20-裂解酶部分性联合缺陷症患者的临床资料及其亲属血标本，提取基因组DNA，设计7对引物扩增CYP17A1基因的8个外显子及外显子与内含子的连接区域，琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物，产物胶回收后直接做为DNA双链模板测序。DNA双链模板不一致的PCR产物经克隆后测序。测序结果在核苷酸序列数据库进行比较分析。结果 患者CYP17A1基因突变检测结果为5994-5995 delAT／7541C〉T复合杂合子。这两种突变均未见报道。推测5994-5995 delAT导致1259H，274X，突变形成的截短蛋白质缺少血红素结合区域，因此是没有功能的；而通过人类P450C17酶计算机模型分析显示7541C〉T导致的A398V远离酶的活性中心，推测突变可能使酶的活性减弱，而不是完全地丧失。患者临床表现为有自发不规则月经及轻度高血压、低血钾，结合激素测定结果提示肾上腺和性腺保留部分功能。因而患者的基因型与其临床表型是一致的。结论 应进行突变P450C17酶的功能学研究来进一步明确结构改变对功能的影响。

中国人17α-羟化酶/17 ,20-裂解酶缺乏症基因突变研究(英文)

目的研究中国人17α-羟化酶/17 ,20-裂解酶缺乏症CYP17A1基因突变特点,以及结合患者的临床表现与基因突变类型初步探讨P450C17酶蛋白的结构与功能的关系。方法收集5例17α-羟化酶/17 ,20-裂解酶缺乏症患者及其部分家属血标本,提取基因组DNA,设计7对引物扩增CYP17A1基因的8个外显子及外显子与内含子的连接区域,琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物,产物胶回收后直接作为DNA双链模板测序。DNA双链模板不一致的PCR产物经克隆后测序。测序结果在核苷酸序列数据库进行比较分析。结果 5例患者均检测出CYP17A1基因突变,共存在2种新的复合突变,即6436-6438(TAC→AA)导致Y329K,418X和6531-6532(GC→A)导致L361F,418X。这两种突变均形成缺乏酶活性中心的截短蛋白。其中4例患者为Y329K,418X突变纯合子,1例为Y329K,418X/L361F,418X的复合杂合子。5例患者的临床表型为17α-羟化酶/17 ,20-裂解酶的完全性联合缺陷,与其基因突变类型相一致。结论 6436-6438( TAC→AA)这种突变可能在中国人较常见,可能具有种族特异性。将进一步进行突变酶蛋白的功能学研究。

遗传因素对华法林维持剂量影响的研究现状

华法林是最常应用的口服抗凝药物之一。许多研究已证实华法林维持剂量的个体差异与基因型密切相关,尤其是细胞色素P450 2C9(CYP2C9)和维生素K环氧化物还原酶复合物1(VKORC1)的基因型对华法林的影响受到广泛认同;尽管还有其他很多基因型被报道与华法林剂量有关,但其具体影响结论不一。研究发现纳入基因信息和临床数据的剂量计算公式可预测华法林的维持剂量,由于目前已开展的临床试验结果不一,其实用性亦受到质疑。下一步研究需要更大样本量及多中心的研究,以期进一步阐释遗传与非遗传因素对华法林剂量的影响,同时对已构建的模型进行验证或构建新模型,提高对华法林个体差异的解释百分比。