缺血性脑卒中大鼠小肠动力异常及与血清Ghrelin变化的关系

目的:探讨缺血性脑卒中大鼠小肠动力的改变及与血清Ghrelin变化的关系.方法:48只♂Wistar大鼠随机分为对照组(n=8)和实验组(n=40),实验组按照3、6、12、24、48h随机分为5个亚组,每组大鼠8只.采用Longa线栓法建立大脑中动脉闭塞(middlecerebral artery occlusion,MCAO)模型(对照组组大鼠仅切开皮肤,不放线栓),所有大鼠进行神经生物学评分,MCAO组进行脑组织TTC染色.美蓝染色法检测肠动力;酶联免疫法测定血清Ghrelin水平;取距回盲部5cm处小肠,光镜及电镜下观察肠黏膜组织的变化.结果:对照组大鼠神经生物评分为0分,MCAO组大鼠神经生物评分为1-3分,MCAO组大鼠脑组织TTC染色可见缺血坏死区.MCAO各亚组的小肠推进比均明显低于对照组(P<0.05),脑缺血后24h降至最低.MCAO各亚组血清Ghrelin水平均明显高于对照组(P<0.05),血清Ghrelin水平于术后3h即升高,24h达峰值.相关性分析显示缺血性脑卒中大鼠血清Ghrelin水平与小肠推进比之间呈线性关系(r=-0.841,P<0.05).光镜下MCAO组肠黏膜上皮细胞受损,电镜下可见大量线粒体肿胀、嵴断裂,细胞器空泡变性,细胞间紧密连接偶见增宽,可见凋亡细胞.结论:MCAO大鼠局灶性脑缺血后出现肠动力改变、血清Ghrelin水平变化,脑缺血24h内小肠动力显著下降,考虑可能与脑缺血应激后多种因素共同作用的结果,其机制仍需进一步研究.

Ghrelin对大鼠小肠转运的作用及对中枢和胃肠道c-Fos表达的影响

目的观察静脉注射ghrelin对大鼠小肠转运的作用及对中枢和胃肠道c-Fos表达的影响。方法大鼠禁食24h,静脉注射ghrelin(2、5、10、20μg/kg),经预先埋置在十二指肠内的导管注入伊文氏蓝溶液,观察不同剂量ghrelin对大鼠小肠转运的影响及ghrelin受体拮抗剂(D-Lys3)GHRP-6对其作用的影响。采用免疫组织化学和图像分析方法观察静脉给予ghrelin对大鼠中枢和胃肠道的c-Fos蛋白的激活情况;观察(D-Lys3)GHRP-6对ghrelin作用的影响。结果 1静脉给予ghrelin 2μg/kg对大鼠小肠转运无显著影响,给予ghrelin 5、10、20μg/kg可剂量依赖性促进小肠转运,此作用可被(D-Lys3)GHRP-6阻断。2静脉注射ghrelin可激活中枢多个部位的c-Fos表达,包括下丘脑室旁核、弓状核、杏仁内侧核、迷走神经背核、孤束核、延髓最后区和胸腰段脊髓背角c-Fos均有表达;胃、十二指肠、空肠和近端结肠肠神经丛的c-Fos有不同程度的表达,其中以胃和近端结肠的c-Fos表达最为显著。应用ghrelin受体拮抗剂(D-Lys3)GHRP-6可抑制ghrelin激活的c-Fos表达。结论 Ghrelin可促进小肠转运,其促动力作用由其受体GHS-R所介导;静脉给予ghrelin可通过肠神经系统和中枢神经系统调节小肠运动。

侧脑室微量注射ghrelin对大鼠小肠转运和肌电活动的影响及作用机制

目的探讨侧脑室微量注射ghrelin对大鼠小肠转运和小肠消化间期复合肌电活动(interdigestive myoelectric complex,IMC)的影响及作用机制。方法 1大鼠分别接受十二指肠导管置入及侧脑室套管置入,在禁食状态下经侧脑室给予ghrelin(0.4,1.6或6.4μg/kg),经十二指肠导管注入伊文氏蓝溶液,观察不同剂量ghrelin对禁食大鼠小肠转运的影响。另两组大鼠分别经侧脑室给予ghrelin受体拮抗剂(D-Lys3)GHRP-6(3.7μg/kg),(D-Lys3)GHRP-6(3.7μg/kg)+ghrelin(6.4μg/kg),探讨ghrelin的作用机制。2大鼠分别接受肠道电极置入及侧脑室套管置入,在禁食状态下采用多道生理记录仪监测消化间期MC,观察侧脑室微量注射ghrelin(6.4μg/kg)对大鼠小肠IMC的影响。经侧脑室给予(D-Lys3)GHRP-6(3.7μg/kg)和NPY抗体(4μg/kg),再经侧脑室给予ghrelin(6.4μg/kg);经静脉给予阿托品(1 mg/kg)、酚妥拉明(1 mg/kg)或普萘洛尔(1 mg/kg),再经侧脑室给予ghrelin(6.4μg/kg),观察侧脑室注射ghrelin对IMC影响的作用机制。结果 1侧脑室微量注射ghrelin 0.4μg/kg对大鼠小肠转运无显著影响,ghrelin 1.6μg/kg和6.4μg/kg促进小肠转运,此促进作用可被(D-Lys3)GHRP-6阻断。2侧脑室微量注射ghrelin促进十二指肠和空肠IMC,使IMC周期缩短,Ⅲ相频率和振幅增加,Ⅲ相时程缩短,对Ⅲ相占IMC周期百分比无显著性改变。阿托品和(D-Lys3)GHRP-6不同程度地抑制ghrelin的促动力效应;酚妥拉明和普萘洛尔对ghrelin的促动力作用无显著影响。结论侧脑室微量注射ghrelin可促进小肠运动,这可能是通过外周胆碱能通路起作用,ghrelin受体GHS-R参与其促动力作用。

Ghrelin受体表达对大鼠胃肠手术后小肠动力不足的影响

目的探讨ghrelin受体变化对大鼠术后小肠动力不足的影响。方法采用体外肌条实验观察在卡巴胆碱（10nmol／L）存在和缺乏时，不同浓度的ghrelin（0、0．01、0．1、0．5、1．0μmol／L）对肌条收缩力的影响。采用免疫组织化学方法和Westemblot技术检测行端侧肠吻合的实验组大鼠和行假手术的对照组大鼠小肠肌层ghrelin受体（GHS—R1a）的表达情况。结果在体外，卡巴胆碱存在时，ghrelin能够增强小肠平滑肌肌条的收缩，不同浓度的ghrelin（0．1、0．5、1．0la,mol／L）引起的收缩力差异具有统计学意义[（223±18）％、（245±22）％、（264±25）％，P〈0．01]。免疫组化染色显示．GHS—R1a主要分布于小肠肌层．实验组大鼠小肠环形肌和纵行肌中GHS—R1a表达均弱于对照组。Westernblot结果显示，实验组小肠ghrelin受体表达量（0．51±0．02）明显低于对照组（0．71±0．01，P〈0．01）。结论术后小肠肌层ghrelin受体表达下调所导致的ghrelin效应减弱可能参与术后小肠动力不足的发生。