香砂六君子汤对脾胃虚弱型功能性消化不良模型大鼠胃窦组织mTOR/ghrelin/GHSR-1a通路的影响

目的探讨香砂六君子汤对脾胃虚弱型功能性消化不良(FD)模型大鼠胃排空的影响及可能作用机制。方法60只SD大鼠的乳鼠随机分为空白组、模型组、莫沙必利组和香砂六君子汤低、中、高剂量组,每组10只。除空白组外,其余各组大鼠采用碘乙酰胺联合蔗糖溶液灌胃+隔日给食+游泳力竭复制脾胃虚弱型FD大鼠模型。造模成功后香砂六君子汤高、中、低剂量组分别给予香砂六君子汤12、6、3 g/(kg·d)灌胃;莫沙必利组给予枸橼酸莫沙必利片1.35 mg/(kg·d)灌胃;空白组和模型组大鼠给予生理盐水10 ml/(kg·d)灌胃。连续干预2周后,测定各组大鼠体质量、胃排空率和肠推进率,HE染色观察各组大鼠胃组织病理学改变,检测大鼠胃窦组织中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、胃生长激素释放激素(ghrelin)、生长激素促分泌素受体1a(GHSR-1a)、c-kit蛋白表达和血浆酰基化胃生长激素释放激素(Acly-ghrelin)水平。结果与空白组比较,模型组大鼠体质量、胃排空率、肠推进率降低,胃窦组织中ghrelin、GHSR-1a、c-kit蛋白表达和血浆Acly-ghrelin水平均降低,mTOR蛋白表达升高(P<0.05)。与模型组比较,香砂六君子汤中、高剂量组和莫沙必利组大鼠体质量、胃排空率、肠推进率升高,胃窦组织中ghrelin、GHSR-1a、c-kit蛋白表达及血浆Acly-ghrelin水平均升高,mTOR蛋白表达降低(P<0.05)。与莫沙必利组比较,香砂六君子汤高剂量组大鼠胃窦组织中ghrelin蛋白表达升高,mTOR蛋白表达降低(P<0.05)。HE染色结果显示,各组大鼠胃组织病理形态学正常,腺体无萎缩,无炎性细胞浸润。结论香砂六君子汤中、高剂量能够显著促进脾胃虚弱型FD大鼠胃排空,其作用机制可能与香砂六君子汤可正向调控mTOR/ghrelin/GHSR-1a信号通路相关。

GHSR-1a在奶山羊胃肠道的分布与表达

试验采用免疫组织化学、Real-time PCR和Western blotting方法测定ghrelin的功能性受体GHSR-1a(Growth hormone secretagogue receptor-1a,GHSR-1a)在奶山羊胃肠道的分布和表达。免疫组织化学结果显示,GHSR-1a免疫阳性细胞广泛分布于奶山羊胃肠道。在皱胃主要定位于黏膜层和肌层;瘤胃、网胃和瓣胃黏膜层及肌层中也可见GHSR-1a免疫阳性细胞;在小肠主要位于十二指肠、空肠和回肠的黏膜层、黏膜下层和肌层;在结肠、盲肠和直肠GHSR-1a免疫阳性细胞也有广泛分布;GHSR-1a主要表达于内在神经丛神经细胞、胃底腺上皮细胞、肠腺上皮细胞、复层鳞状上皮细胞、平滑肌细胞中。real-time PCR和Western blotting结果显示,皱胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠和直肠GHSR-1a的表达水平相对较高,显著高于瘤胃、网胃和瓣胃的表达(P<0.05)。结果表明,ghrelin可能通过GHSR-1a对奶山羊胃肠功能具有重要的调节作用。

电针对功能性消化不良大鼠中枢及外周胃动素相关肽及其受体GHSR-1a的影响

目的观察电针对功能性消化不良大鼠中枢及外周胃动素相关肽胃饥饿素(Ghrelin)及其受体生长激素促分泌素受体-1a(GHSR-1a)的影响。方法将40只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、药物组、电针组,每组10只。除正常组外均采用多因素干预法造模,造模成功后分别给予电针足三里及西药对照治疗4周,测定大鼠胃内残留率及小肠推进率,Western blot法测定大鼠下丘脑与胃窦的Ghrelin及GHSR-1a的表达。结果与正常组相比,模型组大鼠胃窦与下丘脑的Ghrelin、GHSR-1a的表达及小肠推进率均明显降低(P<0.01),胃内残留率明显升高(P<0.01);与模型组相比,电针组大鼠下丘脑与胃窦的Ghrelin及GHSR-1a的表达及小肠推进率均明显升高(P<0.05或P<0.01),胃内残留率明显降低(P<0.05),且电针组与药物组无显著差异(P>0.05)。结论电针可以升高中枢及外周Ghrelin及GHSR-1a的表达水平,调节胃肠道活动,这可能是电针治疗功能性消化不良的作用机制。

垂体生长激素腺瘤中gsp癌基因对GHSR-1a、Ghrelin mRNA表达的影响

目的 研究垂体生长激素（GH）腺瘤组织中Ghrelin、生长激素释放剂受体-1a亚型（GHSR-1a）mRNA的表达,并探讨其表达与gsp癌基因的关系.方法 采用PCR-DNA直接序列分析方法,观察43例垂体GH腺瘤组织中gsp癌基因的表达;应用实时荧光定量PCR检测Ghrelin和GHSR-1a mRNA的表达水平;统计学分析Ghrelin和GHSR-1a mRNA表达与gsp癌基因的关系.结果 Ghrelin mRNA表达在gsp癌基因阳性、阴性组织间差异无统计学意义（P＞0.05）;gsp阳性组织中GHSR-1a mRNA表达明显高于gsp阴性组织（P＜0.05）;gsp阳性、阴性腺瘤组织中GHSR-1amRNA与Ghrelin mRNA的表达均呈明显正相关（R=0.592或0.544,P＜0.05）.结论 垂体GH腺瘤中gsp癌基因上调GHSR-1a mRNA的表达;而对Ghrelin mRNA表达无明显影响.gsp阳性、阴性腺瘤中Ghrelin均可正向调控GHSR-1a mRNA表达.

对Ghrelin/GHSR-1a/GABA通路关键因子在胃食管反流病肝郁证模型中表达水平的研究

目的研究胃饥饿素/生长激素促分泌性受体/γ-氨基丁酸(Ghrelin/GHSR-1a/GABA)通路的关键因子在胃食管反流病肝郁证大鼠模型中的表达情况,建立相关病证结合动物模型。方法将55只雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、胃食管反流病组、肝郁证组、胃食管反流病肝郁证组,每组11只。以食管十二指肠侧吻合术制备胃食管反流病模型,以慢性不可预见性刺激制备中医肝郁证模型,以食管十二指肠侧吻合术联合慢性不可预见性刺激制备胃食管反流病肝郁证模型。进行糖水偏爱实验、旷场实验、食管上皮HE病理观察,检测血清及胃组织Ghrelin、下丘脑GABA和GHSR-1a表达。结果分别与正常组、胃食管反流病组比较,胃食管反流病肝郁证组大鼠糖水偏好比和旷场实验总穿格数降低(P<0.01)、中央区持续停留时间缩短(P<0.01),血清中Ghrelin含量增高(P<0.01),胃组织中Ghrelin阳性细胞表达数及下丘脑GHSR-1a蛋白表达增加(P<0.01)。与假手术组比较,胃食管反流病肝郁证组大鼠下丘脑中GABA含量降低(P<0.05)。结论食管十二指肠侧吻合术联合慢性不可预见性刺激可以制备胃食管反流病肝郁证模型,该病证结合大鼠模型血清及胃Ghrelin表达增高,下丘脑GHSR-1a蛋白表达增高、GABA含量降低。

Ghrelin及其受体在大鼠心肌梗死后的动态表达

目的 Ghrelin是近年发现的一种新的生长激素释放肽,具有心血管保护效应。本研究旨在观察心肌梗死(MI)后Ghrelin及其受体GHSR-1a的动态表达及其变化。方法 30只SD雄性大鼠,随机分为四组,分别为假手术组(6只),心肌梗死后3 d组(8只),梗死7 d组(8只),梗死28 d组(8只)。采用冠状动脉结扎法制作心肌梗死模型,假手术组只在冠状动脉下穿线,但不结扎。采用实时定量PCR方法检测梗死边缘心肌Ghrelin及GHSR-1a mRNA表达,免疫印迹法检测梗死边缘心肌Ghrelin及GHSR-1a蛋白表达及分布。结果与假手术组比较,MI后3 d、7 d、28 d梗死周边区域心肌中Ghrelin mRNA表达明显降低(P<0.05),且呈逐渐下降趋势;而GHSR-1a mRNA表达显著增加(P<0.05);梗死3 d组与梗死7 d组差异无统计学意义(P>0.05)。免疫印迹显示假手术组大鼠心肌显示出了较强的Ghrelin阳性表达,而心肌梗死后Ghrelin阳性表达明显降低(P<0.05);与此相反,GHSR-1a蛋白表达在梗死后明显增加(P<0.05)。结论 Ghrelin/GHSR-1a系统在梗死后心脏重构中可能起着重要作用,并可作为防止心脏重构的一个新的干预靶点。

Ghrelin对小鼠不同来源胚胎体外发育的影响及其受体的表达模式

为探明Ghrelin及其受体Ghsr-1a在早期胚胎发育中的作用,以小鼠体内受精、体外受精和孤雌激活胚胎为研究对象,在其体外发育过程中添加不同浓度Ghrelin,观察胚胎发育效率;通过免疫荧光染色和荧光定量PCR,观察不同时期胚胎中Ghsr-1a的变化。结果表明,体内受精胚体外发育中添加0.1 ng/m L Ghrelin显著降低了囊胚率(P<0.05),添加1 ng/m L的Ghrelin显著降低了小鼠体外受精胚的囊胚率(P<0.05)。在体内受精胎中,Ghsr-1a的mRNA表达水平在4细胞显著高于其他时期(P<0.05);体外受精胚中,Ghsr-1a的mRNA水平在8细胞前无明显差异,桑椹胚和囊胚显著下降(P<0.05)。在孤雌激活胚胎中,Ghsr-1a的mRNA表达水平从2细胞到8细胞显著降低,之后到囊胚期开始显著升高,其蛋白表达模式与mRNA表达模式相反。Ghsr-1a在体内受精和体外受精胚胎中的表达相似,囊胚期表达量最低。结果提示,Ghrelin能够抑制体内和体外受精胚的体外发育,不同来源胚胎Ghsr-1a mRNA和蛋白表达模式均不相同。研究结果为进一步探索Ghrelin在胚胎发育中的作用机制提供了试验基础。

生长素对猪孤雌激活胚胎体外发育的影响及其受体基因的表达模式

为探明生长素及其受体GHSR-1a在胚胎早期发育中的作用,以猪孤雌激活胚胎为研究对象,在其体外发育过程中添加不同浓度生长素,观察胚胎发育速度和发育效率,并用荧光定量PCR检测猪孤雌激活胚胎早期发育过程中生长素特异性受体基因GHSR-1a的表达。结果显示,相对于对照组,添加10.0 mg/L生长素可以显著提高4-细胞胚胎、8-细胞胚胎、桑葚胚的发育率(P<0.05),并能加快4-细胞胚胎、8-细胞胚胎、桑葚胚的发育速度(P<0.05)。GHSR-1a mRNA在2-细胞期到桑葚胚期保持较高表达水平,囊胚期后显著下降(P<0.05);免疫荧光染色表明GHSR-1a在猪孤雌激活胚胎各发育时期均有表达,4-细胞期、8-细胞期和桑葚胚期的表达量显著高于囊胚期(P<0.05)。推测生长素通过提高GHSR-1a的表达来提高猪孤雌激活胚胎的发育速度和效率。