gidA基因缺失对貉源大肠杆菌生物学特性的影响

为研究葡萄糖抑制的分裂蛋白A(GidA)在貉源大肠杆菌致病机制中的作用,本研究利用λ-Red同源重组技术构建貉源致病性大肠杆菌LCE-1(WT)gidA基因缺失株LCE-1ΔgidA(KO)和回补株LCE-1ΔgidA/gidA(RS),均采用PCR和测序鉴定正确后,进一步分析各菌株的生长特性、生化特性,结果显示,在LB培养基中3株菌的生长速度均无明显差异;KO菌株的部分生化特性如肌醇、α-葡萄糖苷酶、β-葡萄糖苷酶指标均发生变化,RS菌株指标基本恢复。通过试管法及微量结晶紫法分析评估3株菌生物被膜(BF)的形成能力,结果显示,与WT菌株和RS菌株相比,KO菌株BF形成能力极显著下降(P<0.0001)。体外模拟并检测在酸应激、碱应激、热应激以及氧化应激条件下这3株菌的生长情况,结果显示,gidA基因缺失能够显著提高大肠杆菌对酸应激、碱应激、热应激和氧化应激的敏感性。通过K-B纸片法对这3株菌的耐药性进行测定,结果显示,与WT菌株相比,KO菌株对头孢类、喹诺酮类、氨基糖苷类和青霉素类药物的敏感性增强。利用WT和KO菌株分别感染小鼠进行致病性试验,结果显示,WT和KO菌株对小鼠的LD50分别为1.58×10^(5)cfu/mL和3.16×10^(6)cfu/mL,与WT菌株相比,KO菌株的毒力下降大于1个数量级。本研究为进一步研究gidA基因对貉源大肠杆菌致病机制的影响奠定了基础。

GidA调控猪链球菌氨基酸代谢谱的分析

为比较猪链球菌中gidA缺失菌株与野生菌株氨基酸代谢之间的差异,揭示GidA调控氨基酸代谢的规律,为猪链球菌致病性的解析以及防控提供理论依据,分别收集gidA缺失菌株、野生菌株菌体,采用高效液相色谱法(HPLC)、质谱仪在正离子模式下进行质谱分析,检测样本中30种氨基酸及其衍生物的含量,比较gidA缺失菌株、野生菌株菌体中氨基酸代谢谱的差异。结果表明,2种菌株中精氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、丝氨酸、谷氨酰胺、苏氨酸、丙氨酸、缬氨酸、色氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、肌酸酐及鸟氨酸具有显著差异(P<0.05,倍数差异>1.2),其中精氨酸上调约4倍,天冬酰胺下调约17倍。说明tRNA修饰酶GidA缺失引起猪链球菌氨基酸代谢异常,尤其是精氨酸与天冬酰胺,其机制可能与猪链球菌致病性下降相关。

tRNA修饰酶GidA家族蛋白研究进展

葡萄糖抑制的分裂蛋白A(GidA)是一种tRNA修饰酶,在原核生物和真核生物中都非常保守,参与对tRNA的摇摆碱基尿嘧啶进行修饰,然后解码以腺嘌呤或鸟嘌呤结尾的密码子。GidA的这种修饰作用对蛋白质的精确解码和高效翻译至关重要。近年来,对GidA在细胞中的功能研究较多,发现GidA不仅调控细胞的形态还与致病性密切相关,而该蛋白在人类中的同源蛋白MTO1的突变与心肌病变、呼吸障碍、癫痫等多种疾病相关。作者查阅了相关资料,对GidA功能与结构的研究进行综述,以期为了解病原菌的致病机制与人类相关疾病的发病机理提供参考。

荧光假单胞菌2P24中gidA基因对PcoI/PcoR群体感应系统的影响

【目的】荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)2P24中PcoI/PcoR群体感应系统是调控生物膜形成与植物根部定殖能力的重要元件,同时该系统也受到多种上游因子的调控。利用遗传学方法研究P.fluorescens 2P24中gidA基因对群体感应系统的调控作用。【方法】将群体感应信号合成基因pcoI的转录报告质粒p970km-pcoIp转入菌株2P24和gidA基因突变体中以检测gidA对pcoI基因表达的影响,并利用报告菌Agrobacterium tumefaciens NTL4(pZLR4)测定菌株2P24及其衍生菌的信号N-乙酰高丝氨酸内酯(AHL)产量。【结果】gidA基因突变后pcoI基因的转录表达和AHL产量与野生型2P24相比显著降低。gidA基因突变体的游动能力没有受到明显的影响,但生物膜的形成显著低于野生型和互补菌株。小麦根部定殖实验表明,温室条件下gidA突变菌株在灭菌土和自然土中对小麦根尖和根围的定殖量较野生型和互补菌显著减少。此外,突变gidA基因并不影响菌株在LB培养基中的生长,但以葡萄糖、蔗糖、果糖、甘油、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖、木糖或山梨醇为唯一碳源时,gidA突变体的生长受到明显的抑制。【结论】GidA对假单胞菌2P24中的PcoI/PcoR群体感应系统、生物膜形成、定殖和碳源利用具有显著的正调控作用。

基于灰色关联度和层次分析法的油桃果汁品质评价

为了研究不同品种油桃的制汁特性,对北京平谷地区10个品种油桃果汁的理化与营养指标(p H、总糖、总酚、抗坏血酸、可溶性固形物、可滴定酸、糖酸比、蛋白质)和加工指标(果汁色泽、粘度、褐变度、出汁率)进行测定。首先利用相关性分析、主成分分析和聚类分析法筛选核心指标,然后运用层次分析法确定指标的权重,最后采用灰色关联度分析法建立油桃品种制汁适宜性综合评价模型。结果表明:糖酸比、出汁率、L*值、黏度和总酚是油桃果汁品质评价的核心指标。通过灰色关联度分析,综合制汁品质较好的品种有瑞光51号、瑞光29号、瑞光18号等,而意大利5号的制汁品质最差,此结果可为油桃的育种和生产加工提供科学的依据。

基于层次分析和灰色关联度法的苹果(等外果)汁品质评价

为了研究不同品种苹果(等外果)汁的品质特性,对中国7个省市的21份苹果(等外果)汁的理化与营养指标和加工指标等26项指标进行测定。通过主成分分析和聚类分析法筛选核心指标,在此基础上运用层次分析法确定指标的权重,最后采用灰色关联度法建立苹果(等外果)汁品质综合评价模型。结果表明,总酚、可溶性固形物、可滴定酸、原始浊度、颜色L*、黏度和褐变度是苹果(等外果)汁品质评价的核心指标。通过灰色关联度分析可知,综合制汁品质较好的品种是山西运城"澳洲青苹"、内蒙古"沙果"、云南昭通"富士"、辽宁葫芦岛"寒富"和山西运城"秦冠"。此结果可为苹果(等外果)的选用和生产加工提供科学依据。