恙虫病东方体Gilliam株56kDa外膜蛋白基因的克隆与表达

目的 表达恙虫病东方体 (Orientiatsutsugamushi)Gilliam株 5 6kDa外膜蛋白 ,探索其作为诊断抗原的可能性。方法 采用PCR方法 ,从Ot Gilliam株菌种基因组DNA中扩增出 5 6kDa外膜蛋白基因片段 ,将目的基因片段定向插入原核表达载体pQE30 ,再用重组质粒转化大肠杆菌 ,最后用IPTG诱导转化菌 ,SDS -PAGE和Western -blotting检测重组质粒目的基因的表达。结果 (1)获得长约 15 0 0bp的Ot Gilliam株 5 6kDa外膜蛋白基因 ,SDS -PAGE检测表达产物 ,在相对分子量5 6× 10 4处有表达带 ;(2 )DNA测序证明重组质粒 pQE30 / 5 6中插入的基因片段的序列与已报告的Ot Gilliam株 5 6kDa外膜蛋白基因序列基本一致。 (3)诱导表达菌体经超声破碎后 ,显示目的蛋白主要以包涵体形式存在 ;(4 )免疫印迹显示该重组质粒转化的大肠杆菌有一相对分子量约为 5 6× 10 4的独特蛋白带 ,该蛋白约占细菌蛋白总量的 2 9 4 %。结论 Ot Gilliam株5 6kDa外膜蛋白基因在大肠杆菌中获得了高效表达 ,表达的重组蛋白具有免疫反应性 ,与Ot Gilliam株感染的小鼠血清在免疫印迹中呈阳性反应。

恙虫病立克次体Giliam株56-kDa蛋白基因的克隆及其5'-和3'-端序列分析

目的克隆恙虫病立克次体Ｇｉｌｉａｍ株５６－ｋＤａ蛋白基因，作为优化ＰＣＲ反应时的标准模板和为Ｇｉｌｉａｍ株５６－ｋＤａ蛋白基因的表达作准备。方法利用ＰＣＲ反应和Ｔ载体分别扩增和克隆目的基因片段，并用序列分析方法鉴定克隆基因的正确性。结果克隆的基因为恙虫病立克次体Ｇｉｌｉａｍ株５６－ｋＤａ蛋白基因。结论利用ＰＣＲ反应和Ｔ载体可以从少量的标本中，高效获得高纯度的目的基因。