银杏叶总黄酮绿色提取工艺及抗氧化活性研究

采用单因素实验考察了低共熔溶剂种类、液料比、提取温度、n(氯化胆碱)∶n(尿素)、低共熔溶剂含水量、提取时间对银杏叶总黄酮提取率的影响,通过响应面法进一步优化了银杏叶总黄酮的提取工艺,并通过测定银杏叶总黄酮对DPPH自由基、ABTS自由基、·OH、·O_(2)^(-)的清除能力,金属离子螯合能力及总还原能力综合评价其抗氧化活性。结果表明,最优提取工艺为:液料比30∶1(mL∶g)、提取温度57℃、n(氯化胆碱)∶n(尿素)为1∶1.6、低共熔溶剂含水量40%、提取时间60 min,在此条件下,银杏叶总黄酮提取率为1.062%,且其抗氧化活性显著优于传统乙醇提取工艺。

银杏叶提取物促进大鼠激素性股骨头坏死中H亚型微血管形成的实验研究

目的观察银杏叶提取物在大鼠激素性股骨头坏死(SONFH)模型中对H亚型微血管的影响。方法采用脂多糖联合甲泼尼龙法复制SONFH模型。将50只大鼠分为空白组、模型组,以及银杏叶提取物高、中、低剂量组,每组10只。银杏叶提取物高、中、低剂量组分别予0.88、0.43、0.21 mL/kg银杏叶提取物溶液尾静脉注射,空白组和模型组分别予等量生理盐水尾静脉注射。4周时Micro-CT断层扫描和HE染色观察股骨头外形、骨小梁结构及囊性变情况;治疗8周后,采用HE染色观察检测股骨头软骨表面光滑度和骨小梁密度,免疫荧光染色观察检测股骨头血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)和内皮黏蛋白(Emcn)表达。结果4周后Micro-CT断层扫描可见大鼠股骨头变形,骨小梁稀疏;HE染色结果可见骨小梁稀疏、断裂、股骨头坏死,Micro-CT断层扫描与HE染色结果一致,表明大鼠SONFH模型复制成功。8周后HE染色结果显示,与空白组相比,银杏叶提取物高、中、低剂量组及模型组均有不同程度股骨头坏死,但银杏叶提取物高、中、低剂量组与模型组比较,骨小梁相对密集,股骨头坏死减少。各组大鼠CD31及Emcn阳性率比较,差异均有统计学意义(P<0.05),模型组CD31和Emcn阳性率较空白组及银杏叶提取物高、中、低剂量组均降低(P<0.05),银杏叶提取物高剂量组CD31阳性率与空白组比较,差异无统计学意义(P>0.05),但Emcn阳性率高于空白组(P<0.05),银杏叶提取物高剂量组CD31和Emcn阳性率与中、低剂量组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),但中剂量与低剂量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论银杏叶提取物可促进大鼠SONFH模型中H亚型微血管形成,改善股骨头周围血循,促进血管成骨耦合,延缓疾病进程。

超声波辅助醇提法提取银杏叶中多种活性成分

采用超声波辅助醇提法综合提取银杏叶中多种活性成分,通过溶剂萃取法脱脂、去叶绿素,经DM130大孔树脂吸附脱附后,再对银杏多糖、银杏莽草酸、银杏黄酮分阶段逐一分离纯化,并对工艺条件进行了优化。结果表明,在75%乙醇为提取溶剂、超声时间为2.0 h、石油醚为脱脂溶剂的最佳条件下,分别采用0.2%H 2O 2脱色法、石油醚沉淀法、酸碱除杂法对银杏多糖、银杏莽草酸、银杏黄酮进行分离纯化,得到高纯度银杏多糖、银杏莽草酸、银杏黄酮,其纯度分别为85.20%、98.25%、35.72%,产率分别为4.67%、3.80%、0.77%。该方法工艺简单、成本低、资源利用度高,为银杏叶的综合开发利用提供了参考。

银杏叶渣中多糖和黄酮的综合提取及其抗氧化活性研究

以银杏叶渣为原料,分别采用水提醇沉法和复合酶辅助醇水溶剂提取法获取银杏叶渣多糖和总黄酮;通过DPPH自由基、ABTS+自由基、羟自由基清除试验考查其体外抗氧化活性。结果显示,银杏叶渣与纯水1∶9,85℃提取3 h,其粗多糖得率为17.90%,多糖提取率达3.03%。提取多糖后的银杏叶渣,添加β-葡萄糖甘酶、纤维素酶与果胶酶(1∶1∶2)复合酶,添加量为8.0%,pH值为5,50℃酶解2.5 h,之后在80%乙醇、料液比1∶8、80℃条件下提取4 h,银杏叶渣总黄酮提取率0.59‰,3种游离苷元(槲皮素、山奈酚、异鼠李素)提取率0.93‰,与仅用80%乙醇提取的银杏叶渣总黄酮相比,其总黄酮提取率增加126.9%,游离苷元提取率增长102.2%。3.0 mg/mL多糖对DPPH自由基、ABTS+自由基、羟自由基清除率分别为67.59%、52.56%、56.47%;复合酶辅助醇水溶剂提取法提取的银杏叶渣总黄酮对3种自由基IC_(50)值分别为0.63、1.08、0.35 mg/mL,与溶剂提取法所得银杏叶渣总黄酮IC50相比普遍降低。以上结果表明,银杏叶渣中多糖、总黄酮均具有较优抗氧化活性,复合酶辅助醇水溶剂提取法能够提高银杏叶渣总黄酮中游离苷元含量,且其抗氧化活性也得以提高。

内源激素含量与银杏叶中类黄酮含量的关系

对银杏叶丛枝叶中内源激素和类黄酮含量进行全周期测定。结果表明 :早期脱落酸 (ABA)含量低 ,但在7月初有一次绝对值较低的含量峰 ,8月底后含量迅速上升 ,在 11月初达到含量最大值 ,含量峰与叶中类黄酮峰同步 ;乙烯 (ETH)在 7月初和 9月底形成 2次高峰 ,第 2次峰值较大 ,第 1次峰与叶中类黄酮峰平行 ,第 2次峰超前 ;细胞激动素 (CTKs)含量早期高 ,后波动次数较多 ,玉米素 (Zrs)与CTKs含量变化曲线极显著相关 ;赤霉素 (GA)含量早期较高 ,中后期含量较低 ,在 7月中旬、9月底 2次达到含量低谷 ;吲哚乙酸 (IAA)含量在 5月中旬、8月中旬、9月底出现 3次含量高峰 ,第 1次峰值最大 ;较高的ETH、ABA含量 ,较大的CTKs IAA值 ,较低的GA含量有利于叶类黄酮合成 ;在最低的IAA ABA、IAA ETH、CTKs ABA、CTKs ETH、GA ABA、GA ABA、GA ETH值时 ,相应地在银杏叶中有类黄酮合成高峰。讨论了内源激素与叶中类黄酮之间的关系。

银杏雄株叶片和花粉主要类黄酮成分含量分析

【目的】研究江苏省46个银杏实生雄株(系)叶片和花粉类黄酮化合物主要成分及其含量,为合理开发利用银杏雄株种质资源提供理论依据。【方法】运用HPLC技术分析不同株系叶片和花粉甲醇(乙醇)-盐酸水解溶液中主要黄酮苷元的含量,并采用三因子法计算总黄酮苷含量。【结果】不同银杏雄株叶片和花粉的黄酮含量存在较大差异,通过设定黄酮苷元和总黄酮含量的选择域值,发现扬州有4个品系(扬州03、04、10、20)、泰州有2个品系(泰州08、13)、徐州有2个品系(徐州04、09)符合叶用标准,扬州有10个品系(扬州02、03、04、08、09、10、12、15、18、20)符合花粉用标准。银杏雄株叶片和花粉均含有槲皮素、山奈酚和异鼠李素3种黄酮苷元,但含量不同,叶片中三者差别不大,而花粉中以山萘酚为主,花粉总黄酮平均含量约为叶片的1.42倍。【结论】通过黄酮苷元和总黄酮含量的分析,根据设定的选择指标,可以得到优良的叶用或花粉用单株供生产利用,为银杏雄株资源的综合利用提供了参考。

银杏雌花芽分化过程中内源激素含量的变化

银杏雌花芽形态分化前的５月初，ＺＴ（玉米素）、ＡＢＡ（脱落酸）处于高峰，ｉＰＡｓ（异戊烯腺嘌呤类）的高峰晚２０ｄ出现；６月份，随着形态分化开始，ＺＴ、ｉＰＡｓ和ＡＢＡ的含量下降并维持低水平；１１月开始落叶时ＡＢＡ含量迅速上升。ＩＡＡ（吲哚乙酸）在５月中旬出现峰值，进入６月形态分化开始后则在略低水平上波动，９月底开始缓慢下降。

银杏叶类黄酮合成代谢与叶中有关成份关系的研究

对银杏极短枝叶片中类黄酮、水分、干物重、淀粉、可溶性糖、可滴定酸含量及pH值全周期测定 ,结果表明 :叶中类黄酮含量在 7月 4日、11月 1日出现高峰 ;在相关与偏相关分析中 ,叶类黄酮与叶中含水量、可滴定酸均呈显著负相关 ,与淀粉、可溶性糖之间相关达不到显著水平 ,但在 8月初至 11月底 ,叶类黄酮与可溶性糖、淀粉之间有极显著的负相关关系 ,其后期可溶性糖浓度与叶类黄酮含量关系更加密切 ;叶类黄酮与pH值呈极显著抛物线正相关。对叶中类黄酮与光合产物、水分及干物重。

银杏叶黄酮类化合物合成代谢规律的研究

对银杏叶丛枝叶黄酮类化合物、花青苷、简单酚类、木质素及可溶性蛋白质含量的测定结果表明 :黄酮类化合物含量分别在 7月 4日、11月 1日出现高峰 ;花青苷含量变化与黄酮类化合物类似 ,但波动幅度大、波动次数相对多 ;简单酚类含量前期上升 ,也于 7月 4日达到第 1次高峰 ,后分别在 8月 1日和 10月 17日出现低谷 ;与黄酮类化合物含量峰相比 ,木质素第 1次峰滞后 ,第 2次峰提前 ;在前期与后期 ,可溶性蛋白质含量处于最低时 ,黄酮类化合物含量在最高峰段。黄酮类化合物与花青苷、简单酚类、木质素呈显著正相关 ,在 7月中旬至 9月底 ,与可溶性蛋白质之间正相关达到显著水平。但偏相关分析表明 :黄酮类化合物仅与可溶性蛋白质呈极显著负相关。对叶黄酮类化合物与其转化产物、前体底物及竞争物之间的关系进行了讨论。

竹叶和银杏叶总黄酮含量及其抗自由基活性的比较研究

目的 :研究竹叶和银杏叶黄酮含量和抗自由基活性的差异及季节性变化规律 ,以期为竹叶的开发提供依据。方法 :选取同一地块中生长的紫竹和银杏 ,逐月定时、定株、定量采集叶样 ,用硝酸铝 亚硝酸钠比色法测定总黄酮 (TF)含量 ,分别采用X XOD Luminol的O2 · 产生体系和VC Cu2 + H2 O2 酵母多糖的·OH产生体系 ,用化学发光法测定提取物清除活性氧自由基的能力。结果 :竹叶的TF全年变化在 0 .6 7%～ 1.71% (以叶干基计 ,下同 ) ,6月最低 ,7月最高 ,随后显著下降 ,11月至翌年 4月维持在较高的水平 (1.38%～ 1.5 6 % ) ;而银杏叶从 4月初抽芽至 11月下旬落叶 ,TF变化在 1.4 8%～ 2 .4 9% ,随着芽苞向成叶的渐进 ,TF逐渐提高 ,在 6 ,7月达到最大值 ,随后逐渐回落 ,至 11月下旬临落叶前又出现 1个高峰。竹叶对O2 ·和·OH的半抑制浓度 (IC50 )分别为 11.0 g·mL-1和 5 .3mg·mL-1,银杏叶为 19.0 g·mL-1和 3.6mg·mL-1。结论 :竹叶的总黄酮含量及其清除活性氧自由基的能力均与银杏叶具有可比性 。

银杏叶片色素含量与黄酮含量关系的研究

对银杏极短枝叶片叶绿素、花青苷和黄酮含量进行全周期测定 ,结果表明 :黄酮含量分别于 1999 0 7 0 4和 1999 11 0 1达到高峰 ,其中后 1次峰值较大、持续时间较长 ;叶绿素含量于 1999 0 6 13达到最高峰后一直呈下降趋势 ;花青苷含量变化趋势与黄酮类似 ,但波动幅度较黄酮大。用MicrosoftExcel软件对数据统计分析 ,黄酮与花青苷显著正相关 ,与叶绿素显著负相关。回归方程为 :Y(叶黄酮 ) =2 2 0 95 5 8- 0 772 2X′1 (叶绿素 ) +0 4343X′2 (花青苷 ) ,回归模型经F测验达 1%显著水平。

光照强度对银杏叶片发育及黄酮和内酯含量的影响

大田和盆栽试验系统研究发现 ,光照强度影响银杏叶片的生长发育、黄酮和内酯含量以及光合速率和苯丙氨酸解氨酶活性的大小。密植采叶银杏园群体内光照条件随着密度的增加和叶幕层高度的降低而急剧衰减。各叶幕层叶片的重量、长度、宽度和厚度随着光照条件的改善而增大。群体内各叶幕层相对光照强度与相对应的叶片形态指标显著相关。人为遮荫处理后叶片黄酮和内酯含量发生变化 ,且二者的变化趋势相似。在一定光照范围内存在一最适光照强度 ,高于或低于这一光强 ,叶片的黄酮含量和内酯含量降低。苯丙氨酸解氨酶作为次生代谢类物质黄酮合成的关键酶 ,其活性随光照强度的下降而下降 ,二者之间相关性显著。苯丙氨酸解氨酶活性与黄酮含量相关性不强。

干旱胁迫下银杏雌雄植株的生长及内源激素含量的差异

采用2 a生"大佛指"雌雄银杏扦插苗,温室盆栽方法模拟自然干旱,研究干旱胁迫下银杏雌雄植株的生长及内源激素含量的性别差异。结果表明:(1)同一干旱胁迫阶段,雄性银杏叶片的萎蔫现象更加严重,株高和地径的增长量减小速度更快。雌性银杏表现出更好的生长情况。(2)同一干旱胁迫阶段,雌性银杏比雄性银杏具有更高含量的促进生长型内源激素IAA、GA_3和ZR,而抑制性内源激素ABA含量更低。(3)与雄性银杏相比,同一干旱阶段雌性银杏具有更高的IAA/ABA、GA_3/ABA、ZR/ABA比例和更低的GA_3/IAA比例。综上所述,干旱胁迫下,雌性银杏比雄性银杏具有更好的干旱适应性。另外干旱胁迫下雌性银杏比雄性银杏具有更高的株高和地径增长量可能是受生长型内源激素IAA含量及IAA/ABA、GA_3/IAA比例的影响。

施肥对苗期银杏叶黄酮质量分数的影响

采用田间试验方法,通过单因素和配方施肥2组试验,研究氮、磷、钾等3种肥料对银杏Ginkgo biloba2年生实生苗叶黄酮质量分数和单株叶黄酮总量的影响。结果表明,钾肥对银杏叶中黄酮质量分数的影响最大,2组试验各水平间差异均达到极显著水平,氮肥次之,磷肥不显著。氮肥和钾肥对单株黄酮总量的影响均达到了极显著水平,分别以施氮3.2g.株-1和钾2.4 g.株-1最好,单株黄酮总量分别达1.09 g.株-1和1.00 g.株-1。其变化趋势与相应的单株生物量的趋势较一致。磷肥对黄酮影响不大。最好的配施处理是施氮4.8 g.株-1+钾2.4 g.株-1,最差的是施氮6.4 g.株-1+磷0.8 g.株-1。

银杏叶黄酮研究进展

报道了近年银杏叶黄酮的最新研究进展 ;银杏叶黄酮生物体内合成代谢途径 :遗传因子、生长发育进程、生态条件和栽培措施对银杏叶黄酮的影响 ;调控银杏叶黄酮的遗传和生理生化机制等 ,介绍了生物技术和化学合成在工厂化生产银杏叶黄酮方面的尝试 。

银杏叶提取物各组分对高糖培养下系膜细胞增殖及细胞外基质积聚的抑制作用

目的:探讨银杏叶提取物(GBE)不同组分对高糖培养下系膜细胞增殖及细胞外基质(ECM)积聚的作用,阐明其作用机制。方法:高糖培养的系膜细胞分别给予GBE、总黄酮、总内酯、总黄酮水解物、槲皮素、山奈酚、异鼠李素、银杏内脂A、银杏内脂B和银杏内脂C,药物浓度分别为0(高糖对照组)、3.125、6.250、12.500、25.000和50.000mg·L-1,同时设低糖对照组,MTT法检测各组系膜细胞增殖情况。高糖培养的系膜细胞分别给予GBE、总黄酮、总内酯、银杏内脂A、银杏内脂B和银杏内脂C,药物浓度分别为0(高糖对照组)、0.05、0.50、5.00和50.00mg·L-1,同时设低糖对照组,ELISA法检测条件培养基中Ⅳ型胶原(ColⅣ)和纤维连接蛋白(FN)水平。结果:MTT检测,与高糖对照组比较,50.000mg·L-1 GBE组细胞增殖活性明显降低(P<0.01),25.000和50.000 mg·L-1总黄酮组细胞增殖活性明显降低(P<0.05或P<0.01),总黄酮水解物、槲皮素、山奈酚和异鼠李素各浓度组细胞增殖活性均明显降低(P<0.01),50.000mg·L-1内脂C组细胞增殖活性明显降低(P<0.05);其他各组细胞增殖活性与高糖对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。ELISA检测,与高糖对照组比较,5.00和50.00mg·L-1 GBE组ColⅣ和FN水平均明显降低(P<0.01),0.50mg·L-1 GBE组FN水平明显降低(P<0.05),0.50、5.00和50.00mg·L-1总黄酮组ColⅣ水平降低(P<0.05或P<0.01),50.00mg·L-1总内脂组ColⅣ和FN水平降低(P<0.05或P<0.01),50.00mg·L-1内脂C组FN水平降低(P<0.05)。结论:GBE在高浓度时(50.000mg·L-1)抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖而低浓度(自0.500mg·L-1起)时抑制系膜细胞ECM积聚;GBE中总黄酮在抑制细胞增殖和ECM积聚方面起主要作用,总内脂无明显效果;苷元抑制系膜细胞增殖的作用远远强于糖苷。

金属离子对盆栽银杏叶PAL酶活及黄酮含量的影响

对6年生盆栽银杏苗分别喷施4种金属盐诱导其叶片苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性,紫外分光光度计测定银杏叶2002年的黄酮含量和PAL活性年周期变化,以及不同处理下银杏叶PAL活性。结果表明:4种金属盐处理对银杏叶中PAL活性及黄酮含量有显著的影响,从9月19日开始,分别用0.1%、0.3%的Fe-SO4、0.1%、0.2%、0.3%的ZnSO4,0.1%、0.3%、0.5%的MnSO4和0.1%、0.4%的CuSO4处理,不仅可提高叶黄酮含量,而且还延长了最佳采叶期,其中提高黄酮含量最佳处理组合为0.1%FeSO4+0.2%ZnSO4+0.3%MnSO4+0.4%CuSO4,该处理下,叶片黄酮含量高达1.619 4%。

不同颜色银杏叶总黄酮含量分布高光谱图像检测

利用近红外高光谱图像技术研究了总黄酮含量在不同颜色（绿色、黄绿色、黄色）银杏叶片上的二维分布规律。采集120片银杏叶在近红外波段（900—1700nm）下的高光谱图像信息，并利用分光光度计法测定银杏叶片的总黄酮含量；计算高光谱图像中不同波段下的平均灰度作为银杏叶对应的光谱信息，利用逐步线性回归方法建立黄酮含量校正模型（R=0．9307）；逐一提取待测银杏叶高光谱图像中每个像素点在不同波段的光谱信息，并将其代入黄酮含量校正模型以计算出各个像素点处对应的黄酮含量，从而绘制总黄酮含量在整个银杏叶片上的二维分布图。研究结果表明，银杏叶总黄酮含量随着绿色、黄绿色、黄色而呈现出递增趋势，且总黄酮含量高的区域主要位于叶片的边缘，总黄酮含量低的区域主要位于叶柄附近。研究为揭示有机组分在农产品、食品中的分布规律提供了枯术手段．

稀土对银杏苗木叶内含物及其产量的效应

采用不同浓度稀土液喷施叶面 ,研究稀土对叶用银杏园苗木叶蛋白质、可溶性糖、叶绿素、总黄酮含量及叶片产量的影响。结果表明 :50mg/L稀土液处理对银杏苗木叶蛋白质、可溶性糖和总黄酮含量有显著促进效果 ,与对照相比 ,分别提高了 33.0 %、2 9.0 %和 48.6% ;1 0 0mg/L浓度处理对叶绿素含量促进效果最佳 ,达 1 6.8% ;1 0 0mg/L浓度处理使叶片产量提高了 1 1 .64% ,而 40 0mg/L浓度处理则起抑制效果 ,蛋白质、叶绿素和总黄酮含量分别减少2 6.7%、1 9.3%及 3.4%。