Research Advances in Extraction and Functions of Ginkgo Flavonoids

Ginkgo flavonoids are one of the most effective medicinal components extracted from leaves of Ginkgo biloba L.According to the physical and chemical properties of ginkgo flavonoids,they can be separated and purified by resin adsorption,supercritical extraction and solvent methods.Previous studies have proved that ginkgo flavonoids have pharmacological functions in promoting blood circulation,anti-oxidation,anti-aging,improving memory,anti-tumor and liver protection,etc.Ginkgo flavonoids have been used clinically to treat angina pectoris,coronary heart disease,myocardial ischemia,hypertension,hyperlipidemia,diabetes,alzheimer's disease,atherosclerosis,gastric cancer and ovarian malignancy and other difficult miscellaneous diseases.

Extraction Process and Content Determination of Total Flavonoids in Ginkgo( Ginkgo biloba L. ) Leaves

[Objectives]This study was conducted to study the extraction process and the content determination of flavonoids in ginkgo( Ginkgo biloba L.) leaves.[Methods]Ethanol extraction and methanol extraction of total flavonoids in ginkgo leaves were studied,and the optimal extraction conditions for flavonoids were determined by orthogonal test; and with quercetin as reference substance,total flavonoid content in ginkgo leaves was determined by UV spectrophotometry.[Results]The optimal extraction process was 4 h of Soxhlet extraction with methanol; and the total flavonoid contents had a good linear relation in the range of 0. 006 5-0. 039 mg/ml( R^2= 0. 999 9),the average content was stabilized at 1. 135%,and the average recovery of the method was 102. 0%. [Conclusions]This study selected the optimal extraction process for total flavonoids in ginkgo leaves. The test method is simple with high accuracy and precision,and is suitable for the extraction and determination of total flavonoids in ginkgo leaves.

HPLC Method for Determination of Content of Total Flavonoids from Ginkgo (Ginkgo biloba L.) Leaves

[Objectives]This study was conducted to determine the content of total flavonoids in ginkgo ( Ginkgo biloba L.) leaves.[Methods]The content of total flavonoids from ginkgo leaves was determined by reversed phase-high performance liquid chromatography (RP-HPLC).The flavonoid glycosides were first extracted with methanol,and hydrolyzed with hydrochloric acid solution to prepare a test solution.Platisil ODS C18 column (150 mm×4.6 mm,5 μm) and the mobile phase V methanol ∶ V water (0.4% phosphoric acid solution)=85∶ 15 were selected for HPLC separation.The HPLC separation was performed with the column at a column temperature of 25℃ using the mobile phase at a flow rate of 1 ml/min.The sample size was 10 μl,and detection was performed with an Agilent HPLC ultraviolet detector at 360 nm.[Results]The reference substance,quercetin,had good linearity in the range of 0.002 6-0.052 0 g/L,with a correlation coefficient of 0.999 7;and the RSD was 1.26%.[Conclusions]The determination method has rapid and simple operation with accurate results and is good in repeatability.This method is suitable for the determination of content of total flavonoids in ginkgo leaves.

银杏叶总黄酮绿色提取工艺及抗氧化活性研究

采用单因素实验考察了低共熔溶剂种类、液料比、提取温度、n(氯化胆碱)∶n(尿素)、低共熔溶剂含水量、提取时间对银杏叶总黄酮提取率的影响,通过响应面法进一步优化了银杏叶总黄酮的提取工艺,并通过测定银杏叶总黄酮对DPPH自由基、ABTS自由基、·OH、·O_(2)^(-)的清除能力,金属离子螯合能力及总还原能力综合评价其抗氧化活性。结果表明,最优提取工艺为:液料比30∶1(mL∶g)、提取温度57℃、n(氯化胆碱)∶n(尿素)为1∶1.6、低共熔溶剂含水量40%、提取时间60 min,在此条件下,银杏叶总黄酮提取率为1.062%,且其抗氧化活性显著优于传统乙醇提取工艺。

光质对银杏苗木生长及黄酮类化合物积累的影响

【目的】探究红、蓝光质对银杏苗木生长及黄酮类化合物积累的影响。【方法】以1年生银杏苗为材料,设置红光、蓝光、红蓝混光3种光质,并以白光作为对照(CK),在处理的第3、6、9、12周分别测定银杏苗的黄酮含量及单株产量、黄酮合成相关酶活性和黄酮总还原力,并在第12周测定其生长指标。【结果】光质处理下,银杏苗木的总生物量均低于CK,苗高在蓝光处理下显著提高,地径受光质影响较小。黄酮合成相关酶中,苯丙氨酸解氨酶(PAL)和肉桂酸4-羟化酶(C4H)的活性在混光和蓝光处理下提高,而4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL)活性仅在红光处理下提高。光质极显著影响黄酮类化合物(槲皮素、山柰酚、异鼠李素、总黄酮)含量、单株黄酮产量及黄酮提取液总还原力,各处理黄酮产量及总还原力均表现为蓝光和混光强于红光和CK,即蓝光和混光有利于黄酮类化合物的积累及抗氧化能力的提高。随着光质处理时间的延长,黄酮类化合物含量的变化趋势总体表现为前期(第3~6周)高于后期(第9~12周),普遍在第6周达到最大值。【结论】混光和蓝光处理可促进银杏苗木黄酮类化合物的积累及相关酶活性,红光则相反;叶用银杏光质处理时间以6周较为适宜。

银杏黄酮苷元减轻多柔比星心脏毒性的作用机制

目的探究银杏黄酮苷元(GA)减轻多柔比星(DOX)心脏毒性的潜在作用机制。方法将雄性ICR小鼠随机分为对照组(CON组)、模型组(DOX组)和GA+DOX组(GDOX组),每组12只。DOX组小鼠隔天尾静脉注射DOX药液3mg/kg,GDOX组小鼠每天灌胃GA混悬液100mg/kg+隔天尾静脉注射DOX药液3mg/kg,连续15d。给药结束后,检测各组小鼠血清中天冬氨酸转氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)水平。基于代谢组学方法,采用超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱串联质谱技术,在主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘-判别分析(OPLS-DA)的基础上,以变量重要性投影值≥1、峰面积差异倍数>1且P<0.05为标准筛选差异代谢物(DEMs),并基于HMDB、PubChem等数据库进行生物学分析。结果与CON组比较,DOX组小鼠血清中AST、CK、CK-MB、LDH水平均显著升高(P<0.05);与DOX组比较,GDOX组小鼠血清中上述指标(CK-MB除外)水平均显著降低(P<0.05)。PCA、OPLS-DA结果均显示,CON组、DOX组、GDOX组小鼠心脏组织样品均能完全分离。经数据库匹配后,鉴定出37个共有DEMs,其中DOX组显著上调而GDOX组显著下调的DEMs有17个,DOX组显著下调而GDOX组显著上调的DEMs有8个;涉及通路包括不饱和脂肪酸的生物合成、花生四烯酸代谢、亚油酸代谢、牛磺酸和次牛磺酸代谢,关键代谢物包括二十二碳六烯酸、花生四烯酸、磷脂酰胆碱(16∶0/18∶3)和牛磺酸。结论GA可能通过作用于二十二碳六烯酸、花生四烯酸等关键代谢物来调节不饱和脂肪酸的生物合成、花生四烯酸代谢等代谢途径,进而减轻DOX的心脏毒性。

银杏叶黄酮对急性脑梗死小鼠血清TNF-α、Cas-pase-3及HIF-1α表达及神经细胞凋亡的影响

目的探究银杏叶黄酮通过下调急性脑梗死小鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、半胱天冬酶(Caspase-3)及低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达对抑制神经细胞凋亡的影响。方法选择健康清洁级6周龄雌性昆明小鼠45只,随机分为观察组、模型组和假手术组,每组15只。观察组和模型组小鼠建模成功后,模型组给予腹腔注射0.9%的氯化钠注射液,连续注射1周;观察组给予腹腔注射银杏叶黄酮注射液20 mg/kg,连续注射1周。比较三组小鼠脑梗死面积、神经细胞凋亡率,以及TNF-α、Caspase-3、HIF-1α水平和蛋白相对表达量。结果模型组大脑皮质神经元细胞结构功能不完整,突触小泡、细胞器数目减少,核膜断裂,染色质凝集成块。观察组小鼠大脑皮质神经元细胞损伤程度轻于模型组,仅少数细胞呈现固缩和空泡化现象。与假手术组比较,观察组和模型组小鼠TNF-α、Caspase-3及HIF-1α水平明显升高(t分别=3.89、4.68、5.23、4.67、4.21、4.71,P均<0.05);且与模型组比较,观察组小鼠TNF-α、Caspase-3及HIF-1α水平明显降低(t分别=4.04、4.66、3.66,P均<0.05)。与假手术组比较,模型组和观察组小鼠TNF-α、Caspase-3及HIF-1α蛋白表达量明显升高(t分别=3.98、4.56、4.18、4.39、3.67、4.29,P均<0.05);且与模型组比较,观察组小鼠TNF-α、Caspase-3及HIF-1α蛋白表达量明显降低(t分别=5.03、4.32、6.30,P均<0.05)。与假手术组比较,观察组和模型组小鼠梗死面积、神经细胞凋亡率明显升高(t分别=4.56、4.98,P均<0.05);且与模型组比较,观察组小鼠梗死面积、神经细胞凋亡率明显降低(t分别=4.38、6.39,P均<0.05)。结论银杏叶黄酮通过下调急性脑梗死小鼠TNF-α、Caspase-3及HIF-1α表达来抑制神经细胞凋亡。

Simple Method for Simultaneous Quantitation and Fingerprint Analysis of Ginkgo biloba Tablets by High Performance Liquid Chromatography-UV-Evaporative Light Scattering Detector

By optimizing the separation and analytical conditions, a reliable, simple and accurate high-performance liquid chromatography（HPLC） method coupled with ultraviolet（UV） and evaporative light scattering detector（ELSD） was developed for the simultaneous determination of lactones and flavonoid, that is, bilobalide, ginkgolide A, ginkgolide B, and rutin, in more than 10 batches of Ginkgo biloba tablets from different pharmaceutical companies. The method could also be applied to fingerprint research, for a more general evaluation of the quality of this preparation. The separation of the components was achieved on a Hanbon C18 column with gradient elution using water and methanol containing 0.1% trifluoroacetic acid（TFA）. The column temperature was 30 ℃ and the flow-rate of the mobile phase was 0.6 mL/min. The drift tube temperature of the ELSD was set at 100 ℃, and the nitrogen flow-rate was 2 L/min. Good linear relationships were shown with correlation coefficients for analytes exceeding 0.9913. The limits of detection（LODs, S/N=3） and the limits of quantitation（LOQs, S/N=10） were 0.00887-0.0508 μg/μL and 0.0171- 0.0636 μg/μL, respectively, on the column. The relative standard deviations（RSD） of the analytes were less than 3.61% for intraday and 3.70% for interday, respectively. The average recovery rates obtained were in the range of （97.3±4.3）% to （101.9±3.1）% for all the compounds. The results of quantitative and fingerprint analysis proved that the contents of the components were totally similar in the preparation of Ginkgo biloba tablets from the same pharmaceutical company; whereas, they varied significantly in the preparations of Ginkgo biloba tablets from different companies.

响应面分析法优化银杏叶黄酮类化合物的提取工艺

以乙醇为浸提液,利用微波萃取辅助超声法提取银杏叶中总黄酮类化合物,通过单因素试验以及响应面试验设计优化提取工艺。结果表明,黄酮类化合物的最佳提取条件为乙醇浓度63.15%、超声时间2.65 min、液料比116∶1(mL∶g)、微波时间3.83 min,该条件下银杏叶中黄酮化合物提取量为28.36 mg·g^(-1)。

超声波辅助醇提法提取银杏叶中多种活性成分

采用超声波辅助醇提法综合提取银杏叶中多种活性成分,通过溶剂萃取法脱脂、去叶绿素,经DM130大孔树脂吸附脱附后,再对银杏多糖、银杏莽草酸、银杏黄酮分阶段逐一分离纯化,并对工艺条件进行了优化。结果表明,在75%乙醇为提取溶剂、超声时间为2.0 h、石油醚为脱脂溶剂的最佳条件下,分别采用0.2%H 2O 2脱色法、石油醚沉淀法、酸碱除杂法对银杏多糖、银杏莽草酸、银杏黄酮进行分离纯化,得到高纯度银杏多糖、银杏莽草酸、银杏黄酮,其纯度分别为85.20%、98.25%、35.72%,产率分别为4.67%、3.80%、0.77%。该方法工艺简单、成本低、资源利用度高,为银杏叶的综合开发利用提供了参考。

微生物菌肥配施对截干银杏林有效成分积累及叶绿素荧光特性的影响

【目的】实现银杏叶用林的绿色施肥、有效施肥,提高叶产量的同时促进叶中总黄酮和总萜内酯的积累。【方法】以3年生截干银杏林为研究对象,设置T1(N、P2O5、K2O的配比为9∶18∶18)、T2(N、P2O5、K2O的配比为9∶27∶27)、T3(N、P2O5、K2O的配比为9∶18∶18)+微生物菌肥、T4(N、P2O5、K2O的配比为9∶27∶27)+微生物菌肥、T5(微生物菌肥)、CK(不施肥,对照)共6个处理,研究配方肥和微生物菌肥配施对截干银杏林叶绿素荧光特性、有效成分含量的影响,筛选适用于截干银杏林的施肥模式。【结果】5种施肥模式下截干银杏林的各生长指标均有不同程度的改善,其中T4处理对新梢长、新梢数量、叶片数量和单株干叶质量的影响最大,分别比对照提高了62.0%、91.1%、50.7%、61.6%,T2处理有利于单叶鲜质量的积累。T4和T2处理显著提高了叶绿素光化学效率(F_(v)/F_(m))、实际光化学效率(F_(v)′/F_(m)′)和光化学猝灭系数(PQ),增强了截干银杏林的光合效能。5个施肥处理中,T4处理的单株总黄酮产量和单株总萜内酯产量均最高,分别比对照提高了112.6%和114.6%。综合评价结果表明,T4处理的综合得分最高,各施肥处理按其效果的综合得分由高到低排序依次为T4、T2、T3、T5、T1、CK。【结论】在截干银杏林培育中,添加微生物菌肥有利于银杏叶生长及有效成分的积累,单施高磷钾配方肥也有利于有效成分的积累,配方肥(N、P2O5、K2O的配比为9∶27∶27)与微生物菌肥配施的效果最佳。

银杏叶黄酮及多糖超声波辅助提取工艺优化

目的:对银杏叶黄酮及多糖类化合物超声波辅助提取工艺进行优化。方法:以银杏叶为原料,以料液比、提取溶剂即不同浓度乙醇、超声时间、超声功率4个因素进行单因素实验,研究不同因素对银杏叶黄酮提取率的影响;以超声时间、超声功率及超声温度3个因素进行单因素实验,研究不同因素对银杏叶多糖提取率的影响;在此基础上分别进行正交试验确定银杏叶最佳黄酮及多糖提取工艺条件。结果:银杏叶黄酮提取时,料液比为1∶20 g·mL^(-1)、提取溶剂为95%乙醇、超声时间为60 min及超声功率为300 W时,黄酮提取率最大为37.50 mg·g^(-1)。超声波辅助提取银杏叶多糖时,其最佳提取工艺为超声时间40 min、超声功率200 W及超声温度50°C,在此条件下,银杏叶多糖提取率为48.98 mg·g^(-1)。结论:建立了银杏叶黄酮及多糖有效成分超声波辅助提取工艺,为银杏叶相关保健产品的开发提供数据支撑。

银杏叶有效成分提取的放大研究

以银杏叶黄酮含量为指标,使用乙醇为提取剂,温度、时间、液固相比、粉碎度为提取因素,探索放大实验的响应面优化实验,确定最佳工艺条件。通过小试实验,确定最佳条件:温度75℃,时间70 min,液固比11∶1,粉碎度在120~100目。以温度、时间和液固比为响应面优化条件。中试优化响应面优化条件为:温度75℃,时间70 min,液固比11∶1,提取率可高达12.03%。

银杏叶渣中多糖和黄酮的综合提取及其抗氧化活性研究

以银杏叶渣为原料,分别采用水提醇沉法和复合酶辅助醇水溶剂提取法获取银杏叶渣多糖和总黄酮;通过DPPH自由基、ABTS+自由基、羟自由基清除试验考查其体外抗氧化活性。结果显示,银杏叶渣与纯水1∶9,85℃提取3 h,其粗多糖得率为17.90%,多糖提取率达3.03%。提取多糖后的银杏叶渣,添加β-葡萄糖甘酶、纤维素酶与果胶酶(1∶1∶2)复合酶,添加量为8.0%,pH值为5,50℃酶解2.5 h,之后在80%乙醇、料液比1∶8、80℃条件下提取4 h,银杏叶渣总黄酮提取率0.59‰,3种游离苷元(槲皮素、山奈酚、异鼠李素)提取率0.93‰,与仅用80%乙醇提取的银杏叶渣总黄酮相比,其总黄酮提取率增加126.9%,游离苷元提取率增长102.2%。3.0 mg/mL多糖对DPPH自由基、ABTS+自由基、羟自由基清除率分别为67.59%、52.56%、56.47%;复合酶辅助醇水溶剂提取法提取的银杏叶渣总黄酮对3种自由基IC_(50)值分别为0.63、1.08、0.35 mg/mL,与溶剂提取法所得银杏叶渣总黄酮IC50相比普遍降低。以上结果表明,银杏叶渣中多糖、总黄酮均具有较优抗氧化活性,复合酶辅助醇水溶剂提取法能够提高银杏叶渣总黄酮中游离苷元含量,且其抗氧化活性也得以提高。

银杏叶中活性成分提取工艺及进展分析

对银杏叶中4种活性成分黄酮、内酯、绿原酸、莽草酸的提取工艺条件进行了研究。通过对银杏叶中黄酮、内酯、莽草酸、绿原酸的萃取时间、萃取温度、料液比、乙醇浓度等因素的影响,利用正交试验,优选出最佳萃取条件。最佳条件:料液比为1∶15,乙醇浓度为70%,萃取时间为2 h,萃取温度为50℃。该方法可实现银杏叶中黄酮、内酯、绿原酸、莽草酸4种活性组分的高效分离。

一个基于当地特色的综合化学实验设计

依托当地特色银杏产业,设计了以银杏叶中总黄酮的提取和结构鉴定为内容的综合化学实验。该实验采用回流法提取银杏叶中的总黄酮,利用显色法、紫外-可见分光光度法和红外光谱法对其结构进行初步鉴定。通过在学生中开展分组实验,让其认识到提取工艺对提取效率的影响。该实验实现了样品的处理、实验条件单因素分析及仪器分析的有机结合,有利于提高学生对化学知识的综合应用能力,还将为学生今后服务地方经济打下基础。

渤海油田非离子表面活性剂吸附动力学研究

为了研究新型非离子表面活性剂银杏总黄酮在渤海油田砂岩表面上的吸附动力学情况,制定合理的化学驱方案设计,采用间歇式实验方案法研究了渤海油田银杏总黄酮(TFG)在破碎砂岩上的吸附特性;根据实验数据拟合不同的吸附平衡和动力学模型,确定各模型的参数,优选与TFG相适应的吸附数学模型。结果表明:1)室温下表面活性剂TFG的临界胶束浓度(CMC)为3.23%,体现出短时快速吸附、长期缓慢吸附的特性;2)TFG的吸附等温线符合Jovanovic模型,预测最大吸附量为16.4mg/g;3)选取准二级动力学模型模拟TFG表面活性剂在砂岩表面的动力学吸附过程,银杏总黄酮分子在吸附剂表面的吸附强度与吸附活性位点或中心数的平方成正比,吸附过程的主要阻力与吸附剂颗粒在吸附剂表面的粘附有关。该研究成果对利用TFG表面活性剂提高渤海油田采收率具有一定指导价值。

酶法提取银杏黄酮类化合物研究

本文研究了纤维素酶酶解法提取银杏总黄酮工艺。与传统的乙醇提取工艺相比 ,银杏总黄酮得率提高了 18.92 %。实验确定了最佳提取条件 :酶浓度 0 .4 0mg/mL ,酶作用时间 12 0min ,酶解温度 5 0℃ ,酶解介质 pH值为 4 .5 ,乙醇浓度 70 % ,提取温度 70℃。

银杏叶中黄酮类成分的研究

目的 分离鉴定银杏叶中的黄酮类成分。方法 95 %乙醇提取 ,硅胶及SephadexLH 2 0柱层析分离 ,用UV ,IR ,NMR和MS等方法确定结构。结果 分得 7个黄酮类成分 ,分别为槲皮素 (quercetin ,Ⅰ )、山萘酚 (kaempferol,Ⅱ )、异鼠李素 (isorham netin ,Ⅲ )、芫花素 (ginkwanin ,Ⅳ )、金松双黄酮 (sciadopitysin ,Ⅴ )、银杏素 (ginkgetin -Ⅵ )、和异银杏素 (isoginkgetin ,Ⅶ ) ,以及 7个其它类型成分 ,分别为三十烷酸 (triacontanoicacid ,Ⅷ )、二十八醇 (octacosanol,Ⅸ )、白果醇 (ginnol,Ⅹ )、二十九烷 (nonacosane ,Ⅺ )、β谷甾醇 ( β sitosterol,Ⅻ )、棕榈酮 (palmitone ,ⅩⅢ )和胡萝卜苷 (daucosterol,ⅩⅣ )。 结论 其中化合物Ⅳ ,Ⅷ ,Ⅸ ,Ⅺ ,ⅩⅢ 。