下调Girdin基因表达对肺癌细胞增殖凋亡、免疫因子IL-8和TNF-α及顺铂化疗敏感性的研究

目的:探讨下调微丝附着梁蛋白(Girdin)基因表达对肺癌细胞增殖凋亡、免疫因子IL-8和TNF-α及顺铂化疗敏感性的影响。方法:以人胚肺成纤维细胞MRC5作为对照细胞,RT-PCR及Western blot分别检测Girdin在PC9、SPC-A-1、H322、H1299、A549肺癌细胞中的表达; SPC-A-1细胞分为空白对照组、阴性对照组、Girdin-siRNA组、顺铂组和Girdin-siRNA+顺铂组,各组细胞培养48 h,Western blot检测Girdin-siRNA转染SPC-A-1细胞的效果; MTT法检测各组细胞活力;流式细胞术检测各组细胞凋亡率; RT-PCR检测IL-8和TNF-α的mRNA表达; Western blot检测增殖相关蛋白细胞增殖核抗原(PCNA)、凋亡相关蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及PI3K/AKT信号通路磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)和磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶(p-AKT)的蛋白表达。结果:肺癌细胞中Girdin的mRNA及蛋白表达均明显高于在MRC5细胞表达(P<0. 05); Girdin-siRNA转染SPC-A-1细胞后Girdin的表达显著降低(P<0. 05);与空白对照组比较,Girdin-siRNA组和顺铂组OD值及IL-8、TNF-α、PCNA、PI3K、p-AKT的表达均显著降低,细胞凋亡率及Caspase-3和Bax表达均显著升高(P<0. 05); Girdin-siRNA+顺铂组OD值及IL-8、TNF-α、PCNA、PI3K、p-AKT的表达均显著低于Girdin-siRNA组和顺铂组,细胞凋亡率及Caspase-3和Bax表达均显著高于Girdin-siRNA组和顺铂组(P<0. 05)。结论:抑制肺癌细胞Girdin表达可通过降低癌细胞增殖、诱导细胞凋亡和提高免疫增强乳腺癌顺铂化疗敏感性,对细胞增殖凋亡的机制可能与下调PI3K/AKT信号通路有关。

Girdin基因在肝癌细胞表达及抑制其表达的生物学特性

目的观察Girdin基因在肝癌细胞表达及抑制其表达对癌细胞增殖、凋亡的影响。方法Western blot检测人正常肝细胞HL-7702及肝癌Huh7、HepG2、MHCC97H、HCCLM3细胞Girdin的蛋白表达；Girdin的小干扰RNA（siRNA）通过Lipofectamine？2000转染HCCLM3细胞，并设置阴性对照组和空白对照组，收集转染48 h的细胞，Western blot检测Girdin、细胞核增殖抗原（Ki-67）、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）家族含Caspase-3、B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）家族促凋亡基因bcl-2相关X蛋白（bax）及酪氨酸激酶2（JAK2）/信号转导与转录激活因子3（STAT3）通路磷酸化的酪氨酸激酶2（p-JAK2）、磷酸化的信号转导与转录激活因子3（p-STAT3）的蛋白表达；细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测转染的24、48、72 h各组细胞的活力；流式细胞术检测转染48 h的细胞凋亡率。结果Girdin在HepG2（0.355±0.043）、HCCLM3（0.599±0.068）、MHCC97H（0.462±0.055）、Huh7（0.378±0.049）肝癌细胞中的表达均显著高于在正常肝细胞HL-7702（0.112±0.013）的表达（PHepG2＝0.001；PHCCLM3＝0.000；PMHCC97H＝0.000；PHuh7＝0.001）；Girdin-siRNA组在24 h（0.247±0.032）、48 h（0.477±0.043）和72 h（0.666±0.073）的细胞活力均显著低于空白对照组（0.385±0.045）、（0.711±0.068）、（0.936±0.096），在48 h的细胞凋亡率（16.18±1.38）%显著高于空白对照组（1.87±0.39）%，Ki-67（0.162±0.019）、p-JAK2（0.096±0.011）、p-STAT3（0.057±0.009）蛋白表达显著低于空白对照组（0.626±0.073）、（0.170±0.021）、（0.145±0.018），Caspase-3（0.257±0.032）和bax（0.279±0.032）的蛋白表达显著高于空白对照组（0.120±0.013、0.135±0.015）（PKi-67＝0.000；Pp-JAK2＝0.006；Pp-STAT3＝0.002；PCaspase-3＝0.002；Pbax＝0.002）。结论Girdin基因在肝癌细胞高表达，通过RNA干扰抑制其表达通过下调JAK2/STAT3信号降低癌细胞的增殖及诱导细胞凋亡。

磷酸化Girdin蛋白在乳腺癌中的表达及意义

目的探讨乳腺癌组织中磷酸化Girdin蛋白的表达与乳腺癌临床病理特征和分子分型的关系。方法应用免疫组化SP法检测27例乳腺小叶增生、61例乳腺导管原位癌和94例乳腺非特殊型浸润性导管癌组织中磷酸化Girdin蛋白的表达情况。结果磷酸化Girdin蛋白定位于细胞浆和（或）细胞核。磷酸化Girdin蛋白在乳腺小叶增生、乳腺导管原位癌和乳腺非特殊型浸润性导管癌中的阳性表达率分别为25．9％（7／27）、39．3％（24／61）和66．0％（62／94），差异有统计学意义（x^2=26．724，P〈0．001）。磷酸化Girdin蛋白的表达与乳腺非特殊型浸润性导管癌的病理学分期（r=0．204，P=0．049）、淋巴结转移（r=0．212，P=0．041）以及人表皮生长因子受体2（HER-2）的状态（r=0．248，P：0．016）呈正相关，而与组织学分级（r=-0．015，P=0．918）、患者年龄（r=-0．011，P=0．918）、肿瘤大小（r=0．075，P=0．471）、ER状态（r=0．071，P=0．498）、PR状态（r=-0．050，P=0．634）无关。磷酸化Girdin蛋白在管腔A型、管腔B型、HER-2（＋）型和三阴性乳腺非特殊型浸润性导管癌中的阳性表达率分别为55．8％、95．8％、66．7％和41．7％，差异有统计学意义（x^2=14．017，P=0．003）。结论磷酸化Girdin蛋白的表达与乳腺癌的恶性进展密切相关，其有可能成为乳腺癌临床治疗的新靶点。