坛紫菜叶状体和丝状体中的类胡萝卜素组成差异

类胡萝卜素是重要的光合色素和抗氧化剂,具有调节植物生长、发育和环境适应等功能。为了深入了解坛紫菜中类胡萝卜素在不同生长阶段中的合成代谢过程,实验采用超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用技术分析坛紫菜丝状体和不同采收期叶状体中类胡萝卜素组成差异。结果显示,甲醇-二氯甲烷(1∶1,体积比)为提取溶剂,液料比1∶10,超声时间30 min是坛紫菜类胡萝卜素的最佳提取条件;优化色谱条件,16种类胡萝卜素标准品的分离度达到1.5,最低检测限为1.57~4.96 ng/mL。在坛紫菜两种世代体中共检测到8种类胡萝卜素,分别属于α-胡萝卜素合成途径(α-胡萝卜素、ε-胡萝卜素、α-隐黄质和叶黄质)和β-胡萝卜素合成途径(β-胡萝卜素、β-隐黄质、玉米黄质和环氧玉米黄质)。叶状体中的总类胡萝卜素含量和最大光化学效率(Fv/Fm)分别是丝状体1.4和1.5倍。其中,丝状体中仅β-隐黄质的含量显著高于叶状体(3.7倍),而α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、ε-胡萝卜素、玉米黄质、叶黄质和α-隐黄质的含量却是一水叶状体的22.7%~67.0%。在叶状体阶段中,玉米黄质和叶黄质是其主要的类胡萝卜素,除β-胡萝卜素外,其余7种类胡萝卜素的含量随着采收期的延长而整体呈现下降趋势。研究表明,类胡萝卜素的含量与坛紫菜生长阶段和生存环境息息相关,强光、高温等复杂环境因素促进叶状体中类胡萝卜素大量合成,参与胁迫防御,维持藻体快速生长,而耐高温的丝状体和低温弱光环境下叶状体因氧化损伤减弱,降低了类胡萝卜素的合成。本研究为坛紫菜品种选育和健康养殖提供了重要的实验数据。

不同盐度和光强对刺枝紫菜自由丝状体生长的影响

为探究海南野生刺枝紫菜(Pyropia acanthophora)自由丝状体培养的最适盐度和光强条件,将采自海南文昌铜鼓岭的叶状体诱导获得自由丝状体,打碎为长150~200μm藻段后放于锥形瓶中,在温度20℃、光周期12L∶12D培养箱中培养29 d。观察自由丝状体在30μmol·m^(-2)·s^(-1)光强下5个盐度梯度组(15、20、25、30、35),和盐度30时6个光强梯度组(20μmol·m^(-2)·s^(-1)、30μmol·m^(-2)·s^(-1)、40μmol·m^(-2)·s^(-1)、50μmol·m^(-2)·s^(-1)、60μmol·m^(-2)·s^(-1)、80μmol·m^(-2)·s^(-1))下的生长状况。结果显示,刺枝紫菜自由丝状体在35盐度下增重最快,日相对生长速率、叶绿素a、类胡萝卜素、藻红蛋白、藻蓝蛋白和可溶性蛋白含量最高;在30μmol·m^(-2)·s^(-1)光强下日相对生长速率最高,叶绿素a、藻红蛋白和藻蓝蛋白含量最多。综上所述,盐度35、光强30μmol·m^(-2)·s^(-1)是刺枝紫菜自由丝状体培养的最适生长条件。

皮肤疣体铲切针治疗丝状疣的临床观察

目的:观察皮肤疣体铲切针治疗丝状疣的临床疗效。方法:将90例丝状疣随机分为对照组和治疗组,每组45例。对照组采用液氮冷冻治疗,治疗组采用皮肤疣体铲切针治疗。观察两组患者局部皮肤结痂时间、脱痂时间、治疗次数、治疗时疼痛指数、治疗后不良反应发生率、复发率等指标,并比较临床疗效。结果:治疗组痊愈率(95.56%,43/45)高于对照组(55.56%,25/45)(P<0.05),总有效率(100.00%,45/45)与对照组(88.89%,40/45)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗组局部皮肤结痂时间和脱痂时间均短于对照组(P<0.05),治疗次数少于对照组(P<0.05),治疗时疼痛指数低于对照组(P<0.05)。治疗组不良反应发生率与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),两组患者治疗后复发率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:皮肤疣体铲切针治疗丝状疣疗效显著,操作安全、方便。

养殖池塘丝状藻发生关键因子调查

以水绵和刚毛藻为代表的丝状藻广泛存在于各种自然水体和养殖水体,其过度生长对水体环境和养殖动物构成威胁。为探究丝状藻发生的关键因子,实验通过走访调查,筛选了5组环境相同且隶属同一家养殖户的有丝状藻池塘和无丝状藻池塘,重点对水质、底泥生物可利用性氮磷含量及丝状藻繁殖体进行了检测分析。结果显示,5组有丝状藻塘、无丝状藻塘整体水体氮磷水平无显著差异,而有4组无丝状藻塘叶绿素a含量显著高于有丝状藻塘。5组有丝状藻塘底泥平均生物可利用性氮含量为(15.72±3.60)mg/kg,而无丝状藻塘底泥平均生物可利用性氮为(13.22±1.97)mg/kg,较前者低2.50 mg/kg。5组有丝状藻塘底泥平均生物可利用性磷含量为(72.26±10.57)mg/kg,无丝状藻塘底泥平均生物可利用性磷含量为(50.33±12.62)mg/kg,较前者低21.93 mg/kg。底泥生物可利用性氮磷比在5组中均小于0.5,而无丝状藻塘平均较有丝状藻塘高26.32%。低氮磷比会抑制浮游藻类的繁殖,而丝状藻则对低氮及低氮磷比环境具有较强的适应能力。因此,在养殖开始时,底泥低氮及低氮磷比的条件使得浮游藻类在与丝状藻的初期生态位竞争中处于劣势,即使检测到的浮游藻类OTUs数量高于丝状藻繁殖体,也不能使其在上述条件下成为优势种。另外,对丝状藻繁殖体的检测发现,其广泛存在于有丝状藻塘、无丝状藻塘及水源的水体和底泥中,即使清塘、晒塘依然检测到繁殖体的存在,但清塘、晒塘能够减少丝状藻繁殖体的数量。研究表明,单独依靠生石灰或漂白粉清塘并不能完全杜绝丝状藻的发生,但可以作为一个辅助防控措施,而通过调控养殖系统的生物可利用氮含量及氮磷比左右种间生态位竞争则是一个值得深入研究的、有前景的丝状藻防控方向。本实验结果对养殖池塘的丝状藻防控研究和生产实践具有重要的参考价值。

光质对条斑紫菜自由丝状体生长和生理指标的影响

光质是影响藻类生长发育的重要因子。本文旨在研究栽培型条斑紫菜(Neopyropia yezoensis)自由丝状体在不同光质(白光、红光、蓝光、绿光)下生长率、形态、超微结构、色素含量及抗氧化酶活性的差异。结果显示:培养21 d后,白光显著提高条斑紫菜自由丝状体特定生长率和叶绿素a含量,其次是红光和绿光,蓝光最差。和白光组相比,蓝光组藻体藻红蛋白(PE)含量最高,红光、绿光组藻体藻蓝蛋白(PC)含量较高。白光组藻体正常黑褐色,细胞壁最厚。红、绿光组藻体绿色,直径和细胞壁厚度与白光组相近。蓝光组藻体鲜艳红色,直径最小,细胞壁最薄,且超微结构显示类囊体上质体小球数量最多。蓝光照射后,藻体丙二醛(MDA)含量最高,超氧化物歧化酶(SOD)活性最低。研究表明,白光最有利于条斑紫菜自由丝状体生长,其次是红光和绿光,蓝光则有不利影响。

坛紫菜不同品系丝状体的生产特性分析

为建立坛紫菜丝状体阶段良种选育的筛选指标,以坛紫菜选育品系(GS-1)、闽丰2号(MF-2)和福建野生种(FJ-W18)的丝状体为材料,检测其在20、25、30、32℃下的生长、光合作用和光合色素等相关参数,并重点关注自由丝状体的钻壳效率和贝壳丝状体壳孢子放散量等生产性状。结果表明:GS-1、MF-2和FJ-W18丝状体在不同温度下相对生长率大小依次为20℃>25℃>30℃>32℃,在20℃时生长最佳;25℃时GS-1相对生长率为1.5%,极显著高于MF-2(0.45%)和FJ-W18(0.79%)(P<0.01);超过30℃时各品系生长明显受抑制。随温度升高、时间延长,各品系的丝状体最大光化学量子产量(F_(v)/F_(m))、叶绿素a和藻胆蛋白含量都呈下降趋势;且GS-1的叶绿素a含量随温度、时间变化均高于MF-2和FJ-W18。以初始藻落密度来评价自由丝状体的钻壳效率,GS-1的初始藻落密度是MF-2的1.38倍,是FJ-W18的1.71倍;贝壳丝状体在不同温度扩增培养后,相同条件诱导壳孢子囊枝并放散壳孢子,GS-1壳孢子放散量均高于MF-2和FJ-W18。综上可知,GS-1丝状体具有较快的生长速率,较好的高温抗性以及优良的钻壳效率和壳孢子放散量,具有高抗性、高繁殖力良种开发的潜力。本研究为坛紫菜新品系的优选和人工培育提供了数据和理论参考。

坛紫菜丝状体不同诱变方法的比较研究

为建立一种新型高效诱变坛紫菜自由丝状体的方法,对^(60)Co-γ射线、甲基磺酸乙酯(EMS)、紫外线(UV)处理的单因子诱变方法与^(60)Co-γ射线-UV(36 W,35 cm)、^(60)Co-γ射线-EMS处理的双因子诱变方法进行比较,观测丝状体的细胞形态、致死率、突变率、F_(v)/F_(m)的变化。结果表明,以突变率和半致死剂量为筛选标准,单因子最佳诱变条件分别为辐射剂量为1000 Gy的^(60)Co-γ射线、0.1 mol·L^(-1)的EMS处理2 h、36 W UV照射180 min,最高突变率分别为0.024%、0.025%、0.032%。双因子最佳诱变条件为1000 Gy的^(60)Co-γ射线和UV照射180 min、1000 Gy的^(60)Co-γ射线和0.1 mol·L^(-1)的EMS处理2 h,最高突变率分别为0.082%和0.060%。此外,在观察和培养突变体21 d后,^(60)Co-γ射线、EMS、UV、^(60)Co-γ射线-UV和^(60)Co-γ射线-EMS的最高突变率分别下降至0.013%、0.011%、0.014%、0.040%和0.023%,表明辐射剂量为1000 Gy的^(60)Co-γ射线和UV照射180 min的双因子诱变方式能得到较高的突变率,是新型高效的双因子诱变方法。本研究结果为坛紫菜自由丝状体突变体的分离纯化和基础研究提供了材料,同时为坛紫菜诱变育种研究提供了参考。

坛紫菜丝状体辐射诱变后的筛选与培养

为建立合适的筛选坛紫菜丝状体突变体的方法,将经^(60)Co-γ射线诱变的丝状体分别接种到海水和扇贝壳中,观测丝状体的突变率。结果表明,丝状体经γ射线辐射后,仍具有钻入扇贝壳的能力,在扇贝壳上发生了丰富的颜色突变,在1000 Gy辐射剂量下丝状体突变率最高,各不同诱变梯度下,在自由丝状体阶段的突变率均低于在扇贝壳丝状体的阶段。此外,为探究突变体的适宜生长温度和培养介质,将^(60)Co-γ射线辐射诱变得到的粉色和绿色突变体为材料,选取扇贝壳、琼脂培养基和海水等基质,设置4个温度梯度(14、17、20、23℃),观测突变藻丝细胞的长度、宽度及分枝数量变化。结果表明,粉色和绿色突变体在23℃的培养温度和扇贝壳基质中,突变性状较稳定,生长状况较佳,粉色突变体藻丝细胞的长度、宽度及分枝数量分别为190.35μm、12.23μm、10.00个,藻丝细胞的宽度和分枝数量的增长率约为19.43%和28.21%;绿色突变体藻丝细胞的长度、宽度及分枝数量分别为115.89μm、11.26μm、3.80个,藻丝细胞的宽度增长率约为9.96%。本研究结果为坛紫菜自由丝状体突变体的筛选提供了新的方法,为探索突变体适宜生长发育的培养温度及基质提供了参考。

坛紫菜贝壳丝状体白斑病附生细菌及藻际细菌群落特征分析

坛紫菜是最具经济价值的海产经济作物之一,贝壳丝状体白斑病严重影响坛紫菜育苗产业的健康发展。探究坛紫菜白斑病贝壳丝状体附生细菌群落和藻际细菌群落可为阐明白斑病的致病微生态机制提供一定的依据。本研究基于高通量测序技术分析了健康和患病的贝壳丝状体附生细菌、藻际细菌群落结构及对贝壳丝状体的影响。结果表明:白斑病贝壳丝状体上附生细菌丰度和多样性降低、藻际细菌丰度和多样性增加,健康池水样和患白斑病池水样的细菌群落结构有显著差异。健康池水样和患白斑病池水样中变形菌门Proteobacteria和拟杆菌门Bacteroidota为优势菌,水源水中蓝细菌门Cyanobacteria和变形菌门为优势菌;Nautella、Vibrio在患白斑病的贝壳丝状体水体中为优势菌;在白斑病贝壳丝状体附生细菌中土芽孢杆菌属Geobacillus丰度为18.25%,而健康贝壳丝状体仅为0.05%,差异极显著。培育池水体中高丰度的弧菌和贝壳丝状体上高丰度的土芽孢杆菌,都是坛紫菜贝壳丝状体白斑病的重要病因,在坛紫菜育苗期间藻际细菌及贝壳丝状体附生细菌群落结构的稳定是坛紫菜育苗的关键因素。

应用响应曲面法优化萱藻丝状体单室孢子囊发育条件

为优化萱藻丝状体单室孢子囊发育条件,提高孢子囊比例,研究以萱藻丝状体为材料,在单因素试验的基础上,应用响应曲面法对丝状体单室孢子囊的发育条件进行优化。结果显示,诱导萱藻丝状体单室孢子囊发育的最佳条件为:温度17.67°C,光照强度30.32μmol/(m^(2)·s),外加氮浓度37.37 mg/L,外加磷浓度10.63 mg/L。在该条件下诱导培养20 d,丝状体孢子囊比例为48.92%±5.58%,约为对照组的1.41倍。试验结果与理论预测值的相对误差小于5%,模型可靠。为评价优化培养后萱藻丝状体孢子囊的发育情况,对丝状体进行了阴干刺激(17°C,2h),结果显示,优化培养后的丝状体游孢子放散量(3.33×10^(6) ind./g FW)约为对照组(1.67×10^(6) ind./g FW)的1.99倍。研究表明,在萱藻丝状体单室孢子囊诱导过程中,对诱导环境条件进行有目的性的调控,不仅可以提高孢子囊比例,还可以促进孢子囊发育和游孢子放散的同步性。

生态因子对条斑紫菜自由丝状体生长的影响

报道了生态因子对条斑紫菜自由丝状体生长的影响，结果表明，条斑紫菜自由丝状体生长的最适宜盐度范围为２０～３０，低于１０的盐度不能生长，最适宜温度范围为１５℃～２５℃，高限为３０℃，适宜光辐照度１５μＥｍ－２Ｓ－１～６０μＥｍ－２Ｓ－１。添加的适宜Ｎ浓度２０ｇ／ｍ３～６０ｇ／ｍ３，Ｐ为１５ｇ／ｍ３～５ｇ／ｍ３。

坛紫菜单个体细胞克隆的丝状体途径

用海螺酶酶解挑选出的具有优良性状的坛紫菜(Porphyra haitanensis)叶状体制备游离的营养细胞,在显微镜下选取单个细胞放入96孔板中进行隔离培养。一部分细胞通过2种发育途径形成了丝状体:一种途径是单细胞生长一段时间产生突起后发育形成丝状体;另一种途径是单细胞先形成愈伤组织,愈伤组织解体放散出类似"孢子"的细胞,"孢子"再发育形成丝状体。将获得的丝状体扩大培养作为纯系并下海养殖。同普通品系相比,选育的品系在产量和质量上表现出一定的优势。在纯系培育方面,由单倍的叶状体细胞发育形成的二倍丝状体,遗传物质一步纯合,后代叶状体个体遗传性状高度一致,可以保证优良经济性状不丢失。这种紫菜纯系培育方法大幅度缩短了纯系培育周期。

紫菜丝状体DNA的提取

1 引言 紫菜（PorPhyra spp.）是一种大型红藻,它的孢子体世代是丝状体.丝状体适于在常温条件下（20℃左右）长期保存和培养,是筛选丝状体优良栽培品系,利用光生物反应器进行紫菜育苗的理想材料.紫菜细胞含有大量胞外多糖,主要以硫酸基多糖和羧基多糖形式存在,它们比陆生植物的中性多糖更易溶于水,与DNA产生共沉淀,从而影响限制性内切酶的消化和PCR扩增.另外,紫菜细胞DNA含量较少,DNA酶含量却很高,使紫菜DNA提取的得率不足[1].RAPD技术已用于紫菜的种质鉴定和遗传多样性研究[2-4],但是。

不同光质LED光源对坛紫菜自由丝状体生长和生理特性的影响

以野生型坛紫菜自由丝状体为培养材料,研究不同光质(绿光510~550 nm、蓝光455~475 nm、红光580~630 nm、白光400~760 nm)的发光二极管(LED)对无性增殖过程中自由丝状体生长及生理特性的影响。结果显示,蓝光能提高自由丝状体的生长速率,蓝光下藻体增重分别是白光、绿光、红光下藻体增重的1.10倍、1.82倍和2.17倍。蓝光处理有助于叶绿素a和类胡萝卜素的积累,二者含量分别较白光、绿光和红光处理提高13.77%、47.69%、63.42%和8.87%、87.07%、97.73%。蓝光和白光均有利于藻红蛋白合成,而绿光和红光降低藻红蛋白合成,但4种光质的LED光源对藻蓝蛋白合成的影响无显著性差异。蓝光能显著提高碳酸酐酶(CA)活性,较白光下CA活性增加11.36%。蓝光和绿光显著提高1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubis CO)活性,分别较白光下Rubis CO活性增加28.17%和61.21%。红光和绿光下藻体在培养后期的色泽暗淡,星状色素体少,部分藻体细胞内容物溢出,呈中空状态;而蓝光和白光下藻体健康正常,色泽鲜红。研究表明,在今后的坛紫菜自由丝状体无性扩繁过程中可以适当增加LED光源的蓝光组分,减少红光和绿光组分。

温度胁迫对紫菜丝状体叶绿素荧光特性的影响

通过调制叶绿素荧光仪(Water-PAM),研究温度胁迫对条斑紫菜、坛紫菜和皱紫菜丝状体叶绿素光特性的影响。结果表明:20℃下丝状体Yield、Fv/Fm和qP均能维持较高的水平。对低温(5℃)的耐受性以条斑紫菜最强,坛紫菜次之,皱紫菜较弱;而对高温(35℃、40℃)的耐受性则与之相反。5℃下24 h,丝状体Fv/Fm呈下降趋势,转入常温后逐渐恢复。40℃处理1.5 h,坛紫菜和皱紫菜的Fv/Fm降幅不足10%,转入常温能基本恢复,而条斑紫菜降为起始值的82%,转入常温后持续降低;40℃处理3 h,3种丝状体的Fv/Fm均降为起始值的65%,恢复培养16 h后,活性未见恢复;40℃胁迫8 h,所有材料的Fv/Fm均降为0。

坛紫菜自由丝状体对无机碳的利用

Freeliving Porphyra haitanensis conchocelis was cultured under continual light, then it was treated with Van, DIDS and SITS, the inhibitors of inorganic carbon utilization, to study the mechanism of inorganic carbon utilization in the conchocelis. The results indicate that Van inhibits the utilization of inorganic carbon most, with a rate of 71.3%, and the rates of DIDS and SITS are relatively lower, 42% and 35.5% respectively. The inhibition rate of Az is 25.3%, which indicates the external CA is not an important part of its inorganic carbon uptake. A complementary conclusion is that the main part of inorganic carbon absorption in P.haitanensis conchocelis is through active transport of HCO3- and CO2.

^(60)Co-γ射线诱变条斑紫菜丝状体的研究

利用^（６０）Ｃｏ－γ射线对条斑紫菜Ｐｏｒｐｈｙｒａ ｙｅｚｏｅｎｓｉｓ 自由丝状体进行诱变。经照射后，丝 状体受到严重损伤，但部分仍具钻入贝壳的能力。部分丝状体发生颜色变异，而且后代叶状 体也表现为相同的颜色。部分未变异的丝状体在放散出壳孢子，并萌发成幼苗后也表达了 颜色变异。低剂量的照射可以促进藻体的生长，并产生形态上的变异。对照射藻体的海上栽 培实验也进行了观察和测量。

幽门螺杆菌丝状体的形成和回复性的研究

目的:探讨幽门螺杆菌在不利环境因素作用下是否可以球形体以外的其他单细胞形式生存。方法:运用幽门螺杆菌于自然界或体内可能遭遇到的胁迫条件,如抗生素、酸性环境和水体为诱导因素作用于幽门螺杆菌,观察其形态学转变和菌体蛋白的表达状况。结果:在亚致死剂量胺曲南和氨苄青霉素作用下,幽门螺杆菌可形成丝状体,当去除抗生素后,幽门螺杆菌丝状体可逐步回复成螺旋状的繁殖体,丝状体经免疫组化法和DNA酶切图谱法进行特异性鉴定呈阳性,幽门螺杆菌丝状体也可见于水体中,与螺旋状幽门螺杆菌相比,丝状体在双向电泳上的菌体蛋白表达谱有改变。结论:丝状体的形成作为幽门螺杆菌生命周期的一个时相,可能是该菌抗逆生存的适应性调节机制,对幽门螺杆菌传播和感染复发的机制尚需进一步研究。

光温与坛紫菜自由丝状体生长发育的关系

于1993年3月-1994年4月，在实验室内可控条件下，用坛紫菜自由丝状体为材料，研究温度（13-33℃）、光强[5-40μmol／（m2·s）]和光周期（8－24h）对其生长发育的影响。结果表明：（1）17-21℃，丝状体生长快速健康；25-29℃，适于孢子囊枝的形成，27℃较佳；丝状体在温度高于29℃时开始死亡，丝状藻丝对高温的耐受力比孢子囊枝差；17-21℃，适于壳孢子的形成。（2）丝状体的生长随着光强的增加和光照时间的延长而加快。（3）实验光强下，光周期≤12h，孢子囊枝的形成量随光照时间的增加而增加；光周期长于12h，孢子囊枝基本不形成。（4）藻丝的色泽随光强的增加由红色趋于黄色，不同温度下，形态和色泽与生长速度和发育程度有关。（5）在实验光强下，壳孢子的形成量与光强关系不大。认为坛紫菜自由丝状体的生长发育与光温条件密切相关，据此，可以调控丝状体的生长发育进程，获得理想的生长发育阶段的材料。

坛紫菜丝状体种质保存技术的研究

采用液体培养基、固体培养基以及胶囊化冷冻法保存坛紫菜丝状体种质,探讨了不同保存条件对其生存的影响。结果表明:液体培养基保存丝状体,在低温5℃,培育30d时,藻丝的增重率为-0.67%;温度为10℃,有利于延长更换培养液的时间,即使120d不换培养液,丝状体也能正常生长。固体培养基保存丝状体,在5℃时固体平板上的细菌生长慢、数量少,但藻丝无法适应低温条件,逐渐死亡;丝状体在10℃固体平板上生长缓慢,但保存100d以上仍然正常生长,达到了长期保存的目的。在胶囊化低温保存中,丝状体存活率较高,而且随着保存时间的延长,成活率没有显著的变化,保持在75%以上。