新活素对急性心肌梗死患者内皮功能影响的临床研究

目的探讨急性心肌梗死患者在常规治疗的基础上加用新活素对血管内皮功能的影响。方法选择急性心肌梗死患者60例,随机分为实验组30例及对照组30例。对照组患者给予常规药物治疗,实验组患者在常规治疗基础上即刻静脉注射新活素。治疗前及治疗后2周超声观察肱动脉内皮依赖性舒张功能(FMD)的变化。2组分别在治疗前及治疗后2周采集静脉血,所有标本收集后统一检测。ELISA测定2组患者治疗前及治疗后血清NO及内皮素1含量。结果实验组治疗后FMD较对照组明显升高(15.09±1.13 vs 9.14±2.82,P<0.05);实验组治疗后血清NO含量较治疗前明显升高[(45.09±5.65)μmol/L vs(37.67±5.43)μmol/L,P<0.05],内皮素1含量较治疗前明显降低[(72.08±20.94)ng/L vs(84.56±23.83)ng/L,P<0.05];实验组治疗后血清NO含量较对照组明显升高,内皮素1含量较对照组明显降低。结论新活素能够通过增加血液中NO含量,降低内皮素1含量,改善急性心肌梗死患者的血管内皮功能,是其治疗急性心肌梗死的机制之一。

降血压肽对人脐静脉内皮细胞eNOS、iNOS 、ET-1 mRNA表达的影响

目的和方法:采用RT-PCR技术分析降血压肽(ACEIP)对人脐静脉内皮细胞内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮素-1(ET-1)mRNA表达水平的影响,从而探讨降血压肽降血压的部分作用机制。结果:与对照组比较,不同剂量的降血压肽可降低ET-1、iNOSmRNA的表达;升高eNOSmRNA的表达,均以ACEIP中剂量组效果最明显(P<0.01)。结论:降血压肽降低血压的机制可能与其降低人脐静脉内皮细胞ET-1、iNOS的基因表达;诱导eNOS基因表达有关。

Exendin-4介导的猪髋动脉内皮细胞NO释放与细胞内钙离子浓度变化的关系

目的观察Exendin-4（Ex-4）介导的猪髋动脉内皮细胞（PIEC）内一氧化氮（NO）释放与钙离子变化的关系,探讨Ex-4影响内皮细胞功能的机制。方法免疫荧光法检测确认PIEC上存在胰高血糖素样肽-1受体（GLP-1R）。NO荧光探针（DAF-FM DA）标记细胞内NO,荧光酶标仪检测Ex-4作用内皮细胞后不同时间点[加药前（0h）,加药后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12h,共13个时点]细胞内NO释放情况;钙离子荧光探针（Fura-2 AM）标记细胞内钙,荧光酶标仪检测细胞内3个不同时段（0~30min,4~4.5h,8~8.5h）钙浓度变化情况;评价Ex-4诱导PIEC释放NO与细胞内钙的关系。结果 PIEC上有GLP-1R表达。Ex-4引起PIEC内NO增加,且有时间依赖关系,与0h比较,4h开始NO明显增高（P〈0.05）,8h时细胞内NO含量较其他各时点均明显增高（P〈0.05）。Ex-4干预后0~30min、4~4.5h和8~8.5h 3个时段细胞内钙均较对照组高（2.042±2.115 vs 0.634±0.352,P〈0.01;0.413±0.154 vs 0.113±0.111,P〈0.01;0.309±0.133 vs 0.063±0.120,P〈0.01）。Ex-4干预PIEC后NO释放前期前段（0~30min）,细胞内钙逐渐上升（拟合曲线：y=0.106x＋1.326）;NO释放中期前段（4~4.5h,y=0.003x＋0.374）和NO释放后期前段（8~8.5h,y=-0.001x＋0.324）细胞内钙浓度虽同NO一样也高于对照组,但没有明显的变化趋势。结论 Ex-4可增加内皮细胞内NO释放,该过程与细胞内钙变化密切相关。

C肽对高糖状态下人脐静脉内皮细胞体外表达eNOS的影响

目的 :探讨在高糖状态下C肽对人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)体外表达内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)的影响。方法 :将培养成功的HUVEC在不同浓度的C肽和葡萄糖环境下孵育72h ,提取细胞总RNA ,应用半定量逆转录聚合酶链反应 (SQ -RT -PCR)法 ,检测eNOSmRNA表达的情况。结果 :生理浓度葡萄糖 (5 5mmol/L)状态下 ,低浓度的C肽 (0 3nmol/L)使HUVECeNOSmRNA表达减弱(P<0.01) ,生理浓度 (3nmol/L)和高浓度(30nmol/L)的C肽可使eNOSmRNA的表达明显增强(P<0.01) ;高浓度葡萄糖(33.3mmol/L)状态使HU VECeNOSmRNA表达减弱(P<0.01) ,加入生理浓度或高浓度C肽后 ,eNOSmRNA表达增强(P<0.01)。结论 :HUVEC体外eNOSmRNA表达可受C肽浓度影响 ;高浓度或生理浓度C肽可缓解高糖对HUVECeNOS表达的抑制作用。

降钙素基因相关肽对内皮细胞细胞间黏附分子1、NOS 和组织金属蛋白酶抑制剂2表达的影响

目的：探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对内皮细胞的保护作用机制。方法：用 CGRP 分别作用于培养的正常内皮细胞和经联胺诱导的内皮细胞后,收集细胞用免疫细胞化学和 RT-PCR 方法检测细胞间黏附分子1 (ICAM-1)、一氧化氮合酶(NOS)和组织金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)的表达。结果：联胺诱导的内皮细胞可使 ICAM-1的表达增强,而使 NOS 和 TIMP-2的表达下降。当 CGRP 作用于正常内皮细胞和联胺诱导后的内皮细胞,对 ICAM-1的表达有明显的下调作用,对 NOS 和 TIMP-2的表达则有明显的上调作用。结论：CGRP 对内皮细胞的保护调节作用可通过下调 ICAM-1和上调 NOS 和 TIMP-2的表达来实现,提示 CGRP 在动脉粥样硬化防治方面可能发挥重要作用。

冠心病患者内皮细胞的损伤及其机制

目的了解冠心病（ＣＡＤ）患者动脉内皮细胞的损伤情况，探讨内皮细胞功能障碍与冠心病的机制。方法采用二维超声检测ＣＡＤ患者肱动脉血管内径（内皮依赖性和内皮非依赖性舒缩功能），同时采用放射免疫法测其血浆平均一氧化氮（ＮＯ）、内皮素（ＥＴ）、ＥＴ／ＮＯ比值、肾素活性（ＰＲＡ）、心钠素（ＡＮＰ）浓度，并以３２例健康人为对照。结果ＣＡＤ组内皮依赖性血管舒缩功能与对照组相比明显降低，内皮非依赖性血管舒缩功能与对照组无显著差异；与对照组相比，ＣＡＤ组血浆平均ＥＴ、ＰＲＡ、ＥＴ／ＮＯ显著升高，而血浆ＮＯ、ＡＮＰ水平显著降低。结论内皮功能障碍及其内源性血管活性物质的失衡在ＣＡＤ的发病机制中起重要作用。

降血压肽对人脐静脉内皮细胞功能的影响

目的 研究降血压肽ACEIP对脐静脉内皮细胞释放内皮素 (ET)、一氧化氮 (NO)的影响。方法 按15 0 ,30 0 ,6 0 0 μg/ml不同剂量的降血压肽作用于脐静脉内皮细胞 ,进行细胞生长试验及细胞培养液中NO、ET含量的检测。结果 与空白对照组比较 ,不同剂量的降血压肽可升高培养液中NO含量 ,降低ET含量 ;去甲肾上腺素的促进脐静脉内皮细胞的生长以及其促进脐静脉内皮细胞分泌ET、降低培养液中NO含量的作用可被降血压肽拮抗。结论 降血压肽对血管内皮细胞功能具有保护作用。

左卡尼汀对冠心病患者血管内皮功能的保护作用

目的探讨左卡尼汀对冠心病患者血管内皮功能的保护作用。方法选取武汉科技大学附属天佑医院2014年4月至2016年12月符合标准的60例冠心病患者,按随机数字表法分为治疗组和对照组,每组30例,对照组采用常规治疗,治疗组在对照组治疗基础上加用左卡尼汀2.0 g静脉滴注,每天1次,连续7 d。检测两组患者治疗前,治疗后24 h、7 d的一氧化氮(NO)和血浆降钙素基因相关肽(CGRP)水平,统计两组患者随访3个月内心脏不良事件发生率及再入院率。结果两组患者治疗前NO和CGRP水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);与治疗前比较,两组患者治疗后NO和CGRP水平均有不同程度升高,且治疗组较对照组升高更明显,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗组患者心律失常、心力衰竭(NYHA 3~4级)和再入院比例均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);两组患者再发急性冠状动脉综合征比例及病死率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论左卡尼汀能够保护冠心病患者的血管内皮功能,减少心脏不良事件发生。

血液中一氧化氮和内皮素与开角型青光眼的关系

目的探讨一氧化氮（ＮＯ），内皮素（ＥＴ－１）与开角型青光眼（ＰＯＡＧ）的关系。方法测定ＰＯＡＧ及对照组血清中的亚硝酸盐／硝酸盐（ＮＯ２－／ＮＯ３－），一氧化氮合酶（ＮＯＳ）和血浆中的ＥＴ－１，并测量ＰＯＡＧ患者的沿盘面积比，将其与相应的ＮＯ２－／ＮＯ３－，ＮＯＳ，ＥＴ－１进行相关性分析。结果 （１）ＰＯＡＧ中ＮＯ减少，ＥＴ－１升高。（２）在ＰＯＡＧ早期视野损害阶段，ＮＯ减低，ＥＴ－１升高校中晚期视野损害阶段明显。（３）ＰＯＡＧ的沿盘面积比与ＮＯ２－／ＮＯ３－呈负相关，与ＥＴ－１呈正相关。结论在ＰＯＡＧ患者，可能有某些因素使ＮＯ减少，ＥＴ－１增加，造成了青光眼性视神经损害。

开角型青光眼与一氧化氮和内皮素的关系

目的:探讨开角型青光眼与一氧化氮和内皮素的关系。方法:测定开角型青光眼(POAG)及对照组血清中的亚硝酸盐/硝酸盐(NO_2/NO_3),一氧化氮合酶(NOS)和血浆中的内皮素(ET_1),以No_2^-/No_3^-来间接反映一氧化氮(NO)的生成量,并利用计算机图像处理技术,测量POAG患者的沿盘面积比,将其与相应的No_2^-/No_3^-、NOS、ET_1进行相关性分析。结果:(1)POAG中NO减少,ET_1升高,与对照组比较,统计学上有显著性差异。(2)在POAG早期视野损害阶段,NO减低、ET_1升高较中晚期视野损害阶段明显。POAG的沿盘面积比与No_2^-/No_3^-呈负相关,与ET_1呈正相关。结论:在POAG患者,可能有某些因素使内皮细胞分泌或释放NO减少,ET_1增加,导致供应视神经的血管收缩或痉挛,造成了青光眼性视神经损害。

扁杏仁肽对血管内皮功能的影响

目的探究扁杏仁肽对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vascular endothelial cells,HUVECs)内皮功能的影响。方法体外培养HUVECs,以150,300和600μg·mL^(-1)不同剂量的扁杏仁全肽、扁杏仁谷蛋白肽给药,进行细胞生长增殖试验及细胞培养液中一氧化氮(NO)和内皮素(ET)含量的检测。结果细胞培养48h后,与对照组相比,所有剂量的扁杏仁全肽和扁杏仁谷蛋白肽对HUVECs均有显著的抑制作用(P<0.01),同时显著地减弱去甲肾上腺素对细胞增殖的促进作用(P<0.01);在不同剂量扁杏仁全肽和扁杏仁谷蛋白肽干预下培养细胞48h,与对照组相比,培养液中NO含量显著升高、ET含量显著降低(P<0.01),同时对去甲肾上腺素具有显著的拮抗作用(P<0.01)。结论扁杏仁全肽特别是扁杏仁谷蛋白肽对血管内皮功能具有很强的保护作用。

NOSTRIN基因高表达诱导脐静脉内皮细胞生物活性改变的研究

目的研究人内皮型一氧化氮合酶运输介导物（endothelial nitric oxide synthase traffic inducer, NOSTRIN）基因在体外培养的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）中的过度表达对该细胞生物学特性的影响。方法脂质体介导转染体外培养的HU-VEC，G418筛选阳性克隆。免疫组织化学法检测第八因子相关抗原（FⅧRAg）的表达；细胞计数法绘制细胞生长曲线以观察细胞的增殖能力；Western印迹检测细胞中NOSTRIN和eNOS蛋白质的表达；分光光度法和硝酸还原酶法分别测定细胞培养上清中eNOS的活性和NO代谢产物亚硝酸基／亚硝基（NO2^-／NO3^-）水平；光镜、电镜观察细胞的形态和超微结构。结果转染前后细胞均为血管内皮来源细胞；转染NOSTRIN基因后细胞的增殖能力明显降低；Western印迹显示细胞转染NOSTRIN基因后其表达量明显增高，而eNOS蛋白质的表达量在各组细胞之间无差异（P〉0．05）；转染NOSTRIN的细胞培养上清中eNOS活性[（11．727±3．09）U／ml]与转染空载体细胞[（22．69±3．36）U／ml]和对照组细胞[（21．85±3．47）U／ml]比较降低显著（P〈0．01），同时转染NOSTRIN细胞培养上清中NO2^-／NO3^-[（25．56±2．49）μmol／L]，与转染空载体细胞[（48．37±2．61）μmol／L]和对照组[（49．06±2．78）μmol／L]比较显著降低（P〈0．01）；光镜和电镜观察看到转染NOSTRIN后对HUVEC有损伤作用（HUVEC拉长、微绒毛变短、细胞膜损伤，胞浆内有脂滴空泡，核膜不完整）。结论NOSTRIN的高表达影响了HUVEC的生物学特性，对HUVEC有明显的损伤作用。

导管素相关抗菌肽在高糖损伤的心脏微血管内皮细胞中的作用

目的探讨导管素相关抗菌肽(CRAMP)对心脏微血管内皮细胞损伤的影响。方法分离培养小鼠成体心脏微血管内皮细胞, 采用高糖刺激微血管内皮细胞损伤模型;采用不同浓度小鼠重组CRAMP(0.15、0.5 mg/L)蛋白处理微血管内皮细胞;采用细胞计数试剂盒(CKK-8)染色检查细胞增殖活性;采用酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒检测微血管内皮细胞炎症因子的分泌、活性氧检测试剂盒检测细胞活性氧的水平;采用凋亡试剂盒检测细胞凋亡、基质胶检测小管形成和小管数量、一氧化氮(NO)检测试剂盒检测NO的水平、免疫印迹法检测细胞一氧化氮合成酶(eNOS)的表达。结果高糖组细胞增殖活性明显低于对照组[(52.2±5.4)%比(100.0±7.3)%], 0.15 mg/L CRAMP组和0.5 mg/L CRAMP组细胞增殖活性高于高糖组[(72.0±3.4)%比(84.2±5.8)%比(52.2±5.4)%(F=75.300, P<0.001)]。高糖组细胞肿瘤坏死因子-α的表达明显高于对照组和0.5 mg/L CRAMP组[(239.1±32.1)μg/L比(22.1±3.7)μg/L比(84.6±9.4)μg/L](F=197.300, P<0.001)。高糖组细胞活性氧的水平明显高于对照组和0.5 mg/L CRAMP组[(20.8±2.4)比(4.8±1.7)比(10.2±1.5)](F=105.700, P<0.001)。高糖组凋亡细胞数量明显高于对照组和0.5 mg/L CRAMP组[(21.2±3.1)%比(2.2±0.6)%比(9.5±1.2)%](F=141.900, P<0.001)。高糖组小管长度和数量低于对照组和0.5 mg/L CRAMP组[(87.8±9.1)μm比(337.0±37.2)μm比(206.5±16.3)μm(F=160.800, P<0.001)及(9.1±1.9)个/视野比(22.0±3.4)个/视野比(16.8±2.2)个/视野(F=36.200, P<0.001)]。高糖组细胞一氧化氮水平低于对照组, 0.5 mg/L CRAMP组细胞一氧化氮水平高于高糖组[(0.25±0.05)比(1.05±0.16)比(0.75±0.06)](F=83.200, P<0.001)。高糖组细胞内皮型eNOS的蛋白表达和mRNA转录水平低于对照组, 0.5 mg/L CRAMP组细胞内皮型eNOS的蛋白表达和mRNA水平高于高糖组[(0.07±0.03)比(0.81±0.05)比(0.54±0.07)(F=275.700, P<0.001)及(0.11±0.07)比(1.00±0.22)比(0.57±0.12)(F=50.600, P<0.001)]。结论 CRAMP蛋白可通过增加内皮型一氧化氮合酶介导的一氧化氮信号抑制心脏微血管内皮细胞的损伤。