Optimization of Polysaccharide Extraction from Radix Glehniae Root Bark by Response Surface Methodology and Anti-immunosuppressive Activity Analysis

[ Objective ] This study aimed to establish and optimize the extraction technology of polysaccharides from Radix Glehniae root bark, and to explore the processing methods of Radix Glehniae in producing areas. [ Method ] Based on the single-factor experiment, with polysaccharide content and polysaccharide yield as indices, various factors affecting polysaccharide yield from Radix Glehniae root bark were investigated by central composite design-response surface method. Mo- reover, immune functions of cyclophosphamide-induced blood-deficient mice in various polysaccharide groups were compared to investigate the effects of root bark removal of Radix Glehniae on medicinal quality. [ Result] Ultrasonic extraction was the appropriate extraction technology of polysaccharides from Radix Glehniae root bark. The optimal ultrasonic extraction conditions were ultrasonic time 36 min, ultrasonic power 460 W, solid-liquid ratio 1： 10, ethanol concentration 80%, under which polysaccharide yield reached 16.08%. Polysaccharides extracted from Radix Glehniae root （ALP） and Radix Glehniae root bark （BLP） could effec- tively improve immune function of blood-deficient mice with no significant differences. [ Conclusion] Radix Glehniae could be used without removal of root bark. The optimized extraction process was stable and feasible, which laid a solid foundation for further comprehensive development and utilization of Radix Glehniae root bark.

Radix Glehniae extract inhibits the migration and invasion abilities of lung cancer cells

Objective: To investigate the effect of Radix Glehniae on the migration and invasion abilities of lung cancer cells, and to explore the underlying mechanism. Method: Normal human bronchial cell line 16 HBE and lung cancer cell line SK-MES-1 were cultured in vitro. Radix Glehniae extract was prepared to treat the two kinds of cells. The proliferation ability of 16 HBE cells was determined by CCK-8 assay. The migration and invasion abilities of SK-MES-1 cells were determined by Transwell and Matrigel assays, respectively. The expression of TIMP2 m RNA in SK-MES-1 cells was detected by fluorescence quantitative PCR(q-PCR). The secretion level of TIMP2 protein by SK-MES-1 cells was measured by ELISA experiment. Results: Radix Glehniae extract caused no toxic effects on 16 HBE cells at the concentrations of 1 mg/ml to 15 mg/ml. Radix Glehniae extract(from 5 mg/ml to 15 mg/ml) significantly inhibited SK-MES-1 cell migration and invasion abilities, as well as upregulated TIMP2 m RNA expression and enhanced TIMP2 secretion by SK-MES-1 cells. Conclusion: Radix Glehniae can inhibit the migration and invasion behaviors of lung cancer cells by upregulating TIMP2 expression and secretion.

A review of research on coumarins from Radix Glehniae

Radix Glehniae,with a wide range of chemical components of various pharmacological effects,is widely used in the prevention and treatment of various diseases in clinical practice.It has a broad prospect of development and application.Coumarin,as one of its major active components,also displays good biological activities for analgesia and sedation,antibacteria,antivirus,anti HIV,anti-inflammation,anti-tumor,anti mutation,tyrosinase inhibition,vasodilation and blood pressure reduction.The aim of the present review is to discuss the studies on coumarin components,content determination,pharmacological activities,processing methods and provide a guide for the further development and utilization of Radix Glehniae.

国医大师禤国维治疗儿童特应性皮炎用药规律的挖掘

【目的】采用数据挖掘技术挖掘国医大师禤国维教授治疗儿童特应性皮炎的组方用药规律。【方法】收集禤国维教授门诊治疗儿童特应性皮炎的有效病例的病案资料,采用频数统计、关联规则分析、聚类分析等方法对录入的病案数据进行统计分析。【结果】共收录处方242首,涉及中药101味。常用药物为23味,高频药物(频数>100次)共16味,分别为甘草、防风、北沙参、紫苏叶、麦冬、徐长卿、布渣叶、白鲜皮、玄参、薏苡仁、蝉蜕、百合、生地黄、地肤子、茯神、芡实。药物的性味归经分析显示,药物大多偏甘寒,主要归脾、胃、肝经。关联规则分析得到常用药物组合24个,关联规则20条。聚类分析得到2个核心药物组合。【结论】禤国维治疗儿童特应性皮炎以“清、补、和”三法为主,“扶正御邪,平调阴阳”的用药原则贯穿治疗始终。

北沙参提取物改善阴虚便秘作用研究

本研究旨在探索北沙参提取物改善便秘的效应及机制,探索不同加工方式的差异。采用UHPLC-HRMS法测定北沙参水提物主要成分;采用洛哌丁胺和左甲状腺素钠建立阴虚便秘大鼠模型后,灌胃给予两种加工方式北沙参水提物(生药量1 g/kg)7天,检测大鼠代谢指标,观察结肠组织形态变化;阿利新蓝染色法及免疫组织化学法观察结肠组织中粘液分泌情况及5-羟色胺4受体(5-HT4R)的表达。结果表明:未去皮水提物较去皮水提物中成分更为丰富;两种提取物给药干预后,第一黑便时间和小肠推进率均显著改善(P<0.05),结肠黏蛋白、5-HT4R显著增加(P<0.05)。本研究阐明北沙参水提物通过增加结肠黏液分泌,修复肠道黏液屏障,调节5-HT途径,兴奋肠道平滑肌,从而实现缓解便秘的作用。

北沙参种子内源抑制物质活性研究

研究北沙参种子和果皮各分离相对白菜种子萌发和幼苗的影响,探讨北沙参种子内源抑制物的活性。对北沙参种子不同部位的浸提液通过系统溶剂法进行分离,分离出石油醚相、二氯甲烷相、乙酸乙酯相、正丁醇相、甲醇相和水相,并以各分离相对白菜种子进行萌发实验,测定北沙参种子内源抑制物生物活性。结果显示,①北沙参种子、果皮各分离相对白菜种子萌发均有一定的抑制作用,其中抑制作用最强的是甲醇相,其次是乙酸乙酯相;与对照组相比,各处理组的发芽指数均有一定程度的下降;甲醇相的平均发芽天数显著长于其他处理。②北沙参种子、果皮各分离相在抑制白菜幼苗根长和芽长方面表现出明显的差异,其中,甲醇相的抑制作用最显著,其次为乙酸乙酯相。与萌发指标结果一致。北沙参种子不同部位分离相对白菜种子萌发及幼苗存在不同程度的抑制作用,表明北沙参种子、果皮均含有高活性抑制物质,主要存在于甲醇相和乙酸乙酯相,因此,北沙参种子中的内源抑制物是导致其休眠的主要原因。

北沙参标准汤剂制备及质量评价方法研究

目的:制备15批北沙参标准汤剂,并以出膏率、指标成分含量及转移率、特征图谱为指标建立北沙参标准汤剂质量评价方法。方法:采用紫外分光光度法测定北沙参饮片及标准汤剂中的多糖含量,计算转移率、出膏率;采用HPLC对15批北沙参饮片及标准汤剂进行特征图谱检测,并结合质谱对特征峰进行指认。结果:15批北沙参饮片中的多糖含量为35.31%~48.70%,标准汤剂中多糖的含量为52.49%~71.98%,多糖转移率为30.82%~59.98%,出膏率为17.8%~40.0%。将北沙参饮片和标准汤剂特征图谱进行比对,饮片与标准汤剂均呈现10个共有峰,结合质谱分析指认了其中7个成分。结论:15批北沙参饮片与标准汤剂的化学物质基本一致,研究数据可作为北沙参标准汤剂的工艺及质量控制依据,也可为配方颗粒标准的制订及工业化制备提供基本数据支持。

超高效液相色谱法测定北沙参中花椒毒素含量

为建立北沙参中花椒毒素含量的测定方法,采用超高效液相色谱,色谱柱为ACQUITY UPLC^(®)HSS T31.8μm(2.1×100 mm×1.8μm),流动相为50%甲醇乙腈-0.1%磷酸溶液,流速0.3 mL/min,柱温30℃,检测波长323 nm,进样量为1μL。在该色谱条件下,在2.005~80.217μg/mL范围内,北沙参中花椒毒素浓度与峰面积线性关系良好(R=0.9998)。方法精密度RSD为0.23%、重复性RSD为0.87%、稳定性RSD为0.91%、加样回收率在97.0%~105.5%(RSD=2.6%)。该方法快速、准确、便捷,可应用于北沙参中花椒毒素含量的测定。

从阳明病理法探讨竹叶石膏汤证

竹叶石膏汤方载于《伤寒论·辨阴阳易差后劳复病脉证并治》中,但其并非“伤寒差后劳复”的专方,而为阳明病类方。其证可以看作是白虎汤证由经入腑,由实转虚的中间阶段,此时,阳明经腑同病,既有阳明经无形邪热,又有阳明胃腑阴伤气逆。在此阶段,随着阴液的不断损伤,疾病可能发生两类转归:若邪热鸱张,进一步损伤阳明肠腑津液,化燥成实,则可转为承气汤类证;若邪热持续耗损胃阴,则会进展为大气上逆之麦门冬汤证,甚至进一步由实转虚,发展为沙参麦冬汤证、益胃汤证。临床上,对于各种外感发热类疾病,凡属阳明热盛兼气阴两虚者,不必拘于是否为“差后劳复”,均可使用竹叶石膏汤化裁治疗;同时,对于各类内伤杂病,如糖尿病、甲状腺功能亢进、睡眠障碍、更年期综合征、热射病等疾病,亦可根据病机使用竹叶石膏汤化裁治疗。

北沙参药材的薄层色谱指纹图谱研究

目的:建立北沙参的薄层色谱指纹图谱,用于对北沙参药材进行真伪鉴别及质量控制。方法:以法卡林二醇、东莨菪素、伞形花内酯、异欧前胡素为对照品,采用薄层色谱法对10批不同采集地的北沙参商品药材及3批山东莱阳北沙参药材进行定性鉴别。采用双波长扫描法,以260 nm为参比波长,300 nm为检测波长,荧光模式进行扫描,得出北沙参的薄层扫描轮廓图。结果:由轮廓扫描图发现13批北沙参药材有8个主要峰,其中4个为法卡林二醇、东莨菪素、伞形花内酯、异欧前胡素,并且山东莱阳产北沙参中4个化合物的含量均高于其他10批商品药材。结论:该方法稳定、简便可行,可用于北沙参的真伪鉴别及质量控制。

新加沙参麦冬煎剂抑制肿瘤转移及其作用机制的实验研究

目的探讨新加沙参麦冬煎剂防治肿瘤转移的机制。方法结合动物模型、免疫组化、细胞分子生物学技术,观察新加沙参麦冬煎剂对荷瘤小鼠抑瘤率、转移抑制率、生命延长率的影响,检测实验小鼠皮下移植瘤血管内等细胞生长因子(VEGF)、血管内皮细胞第Ⅷ因子(CD34)、黏附因子(CD44V6)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶抑制酶(TIMP2)的表达情况。结果新加沙参麦冬煎剂治疗组的瘤重抑制率、肺转移抑制率、生命延长率分别为37.3%,58.3%和20.8%;皮下移植瘤CD44V6、VEGF表达、微血管密度(MVD)明显低于空白组(P<0.01),TIMP2表达记分明显高出其他组(P<0.01)。小鼠肺转移灶数与VEGF、CD44V6、MVD呈线性相关,相关系数分别为0.490,0.398,0.455。结论①新加沙参麦冬煎剂对小鼠LA795高转移肺腺癌模型有较好抑制转移、抑制肿瘤生长和延长荷瘤小鼠生存时间的作用。②新加沙参麦冬煎剂可通过调控肿瘤转移过程中黏附、基质降解、血管生成相关分子的表达,多途径、多靶点防治肿瘤的转移。

北沙参粗多糖的提取及对阴虚小鼠的免疫调节作用

目的研究北沙参粗多糖(GLP)的滋阴和免疫调节作用。方法提取GLP,制备阴虚小鼠模型,观察对小鼠体重变化、脾脏抗体生成细胞(AFC)、迟发型超敏反应(DTH)和腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响。结果GLP可使阴虚小鼠体重明显增加;亦能显著增加阴虚小鼠脾脏AFC的数量,增强DTH反应,而对腹腔MΦ的吞噬百分率和吞噬指数无明显影响。结论GLP具有滋阴补虚作用,可增强体液免疫和细胞免疫功能。

北沙参栽培品种与药材质量的相关性研究

目的:探讨北沙参不同栽培品种与药材质量的关系。方法:接文献方法和药典规定检测北沙参不同栽培品种的多糖、欧前胡素、浸出物等成分含量。结果:白条参的可溶性糖、粗多糖、总糖、水浸出物、醇浸出物等含量较另两个品种高(P<0.05),欧前胡素以大红袍含量最高(P<0.05)。结论:用于抑制体液免疫和细胞免疫以及抑制T、B细胞的增生作用时,用白条参效果较好;用于镇静、解痉、平喘等作用时,用大红袍入药更加科学。

北沙参多糖的提取工艺、理化性质和生物活性研究进展

北沙参是伞形科植物珊瑚菜的干燥根,为常用药食两用资源。北沙参多糖作为北沙参主要成分之一,具有良好的生物活性。北沙参多糖的提取分为溶剂提取和辅助提取两大类,然而不同的提取方法的多糖得率、结构及生物活性不尽相同,本文介绍了其总糖含量、分子量、单糖组成、糖苷键构型等理化性质。目前对北沙参多糖的生物活性研究主要集中在免疫调节、抗氧化、抗肿瘤、抗炎及降血糖等方面,在医药、保健功能食品等领域有着良好的前景。本文就国内外学者对北沙参多糖的提取工艺、分离纯化、结构特征及生物活性研究进行了系统性的总结和归纳,同时也指出了北沙参多糖的高级结构、作用机制及构效关系尚不明确的问题,为其深入研究及有效开发利用提供科学参考。

去皮晒干对北沙参挥发油成分的影响

目的比较直接晒干与去皮晒干北沙参挥发油成分差异,为确定合理的产地加工方法提供参考。方法采集北沙参植株根部,分别直接晒干和烫后去皮晒干,以水蒸气蒸馏法提取挥发油,采用Agilent7890A-5973N型气相-质谱联用仪进行分析。结果直接晒干与去皮晒干北沙参挥发油成分具有明显差异,直接晒干北沙参挥发油以萜类和醛酮类化合物为主,去皮晒干北沙参挥发油中的萜类化合物相对含有量显著降低,直接晒干能够保留种类更多的化合物。结论直接晒干较去皮晒干更能保证北沙参药材质量。

沙参麦冬汤联合化疗对肺癌患者免疫功能的影响研究

目的：观察和分析沙参麦冬汤联合紫杉醇＋顺铂（TP）化疗方案对肺癌患者免疫功能的影响。方法：选取60例接受化疗的肺癌患者作为研究对象,将其随机分为观察组和对照组,每组各30例。对照组患者应用TP化疗方案进行治疗,观察组患者加用口服沙参麦冬汤。两组患者治疗前、后的CD3＋T淋巴细胞比例、CD4＋T淋巴细胞比例、CD8＋T淋巴细胞比例、CD4＋/CD8＋T淋巴细胞比值、NK细胞活性等免疫指标进行检测和比较;对两组患者的KPS评分变化、体质量变化等临床受益情况进行观察和比较;对两组患者在治疗期间的不良反应进行评价和比较。结果：经过治疗后,对照组患者的CD4＋/CD8＋T淋巴细胞比值较治疗前显著下降（P〈0.05）,观察组患者的CD3＋T淋巴细胞比例、CD4＋T淋巴细胞比例、CD4＋/CD8＋T淋巴细胞比值均较治疗前显著上升（P〈0.05）,而且均显著高于对照组（P〈0.05）;观察组中KPS评分变化为＂稳定＂、体质量变化为＂改善＂或＂稳定＂的患者比例均显著高于对照组（P〈0.05）,KPS评分变化为＂降低＂和体质量变化为＂降低＂的患者比例显著低于对照组（P〈0.05）;在治疗期间,观察组中发生0~Ⅰ期的轻度白细胞减少的患者比例显著高于对照组,而发生Ⅱ~Ⅳ期的中、重度白细胞减少的患者比例显著低于对照组（P〈0.05）。结论：TP化疗方案具有抑制肺癌患者免疫功能的作用,在TP化疗方案的基础上加用沙参麦冬汤可改善患者的免疫功能、提高其生活质量、增加其临床受益,并具有减轻白细胞减少等不良反应的作用。

北沙参及易混品的ITS2分子鉴定

目的北沙参(Glehniae Radix)药材性状与桔梗科(Campanulaceae)的南沙参(Adenophora tetraphylla(Thunb.)Fisch.)、轮叶党参(Codonopsis lanceolata(Sieb et Zucc)Benth.et Hook.)等类似,易产生混淆。作者通过对不同产地北沙参及其混淆品的ITS2(Internal Transcribed Spacer2)分子鉴定,探讨ITS2条形码序列对北沙参药材鉴定可行性。方法对样品进行DNA提取,并运用PCR扩增方法进行ITS2序列扩增,采用双向测序的方法对PCR产物进行测序。测序结果运用DNAMAN软件对测序结果进行拼接,用MEGA5.1软件对序列结果进行分析并建立K2P模型的NJ树,并预测ITS2的二级结构。结果与结论不同产地北沙参的ITS2序列一致,并且从NJ树可明显区分北沙参及其混淆品。

水杨酸、茉莉酸甲酯及超声波对北沙参愈伤组织生长及产香豆素的影响

研究水杨酸（salicylic acid,SA）、茉莉酸甲酯（methyl jasmonate,Me JA）和超声波对北沙参愈伤组织生长的影响,并利用高效液相色谱法测定了经诱导处理后愈伤组织中香豆素（欧前胡素、异欧前胡素及补骨脂素为主要指标）含量的变化。结果表明：SA和Me JA均对北沙参愈伤组织的生长具有抑制作用,而一定时间的低强度超声波处理则能够促进北沙参愈伤组织生物量的增长;同时,结果表明此3种诱导因子均能够不同程度地促进香豆素合成,即当SA质量浓度达到8 mg/L时,欧前胡素的含量达到最大值,为对照的3.8倍;SA质量浓度为16 mg/L时,补骨脂素含量达最大值,为对照的1.70倍;当SA质量浓度在28～30 mg/L之间时,异欧前胡素的含量达到最大值,此范围内总香豆素含量也达最大值,约为对照的2.33倍;当Me JA浓度达400μmol/L时,补骨脂素和异欧前胡素含量达到最大值,分别为对照的6.09倍和5.53倍,总香豆素含量也达最大值14.86μg/g,为对照的5.11倍;当超声波处理30 min时,愈伤组织中欧前胡素和异欧前胡素的含量达最大值5.51μg/g和3.69μg/g,分别为对照的5.15倍和4.20倍;总香豆素含量也达最大值11.90μg/g,为对照的3.55倍;而补骨脂素含量则在超声处理10 min后达到最大值3.60μg/g,为对照的1.50倍。综上,比较3种诱导子对北沙参愈伤组织诱导处理后香豆素含量的变化发现,与SA和超声波相比,Me JA更能够有效地促进北沙参中次生代谢产物——香豆素的合成。

不同加工方法对北沙参多糖免疫调节功能的实验研究

目的:通过比较不同加工方法制得的北沙参中粗多糖(Polysaccharide of Radix Glehnia,GLP)对阴虚小鼠的免疫调节作用,探讨北沙参加工过程中去皮和不去皮的意义。方法:采用去皮和不去皮2种方法加工北沙参,分别提取去皮北沙参中的粗多糖(GLP1)和未去皮北沙参中的粗多糖(GLP2);制备阴虚小鼠模型,观察小鼠体质量变化,检测脾脏NK细胞杀伤活力、T淋巴细胞转化功能和小鼠血清抗绵羊红细胞抗体IgM含量。结果:GLP1和GLP2均可使阴虚小鼠体质量显著增加(P<0.05或P<0.01);显著增强甲亢型阴虚小鼠脾脏NK细胞杀伤率(P<0.05)和T淋巴细胞转化功能(P<0.01,P<0.05),提高血清IgM含量;且两种北沙参粗多糖(GLP1、GLP2)各相同剂量组之间的作用差异无统计学意义(P>0.05)。结论:两种北沙参粗多糖GLP1和GLP2在增强机体免疫功能方面差异无统计学意义,说明北沙参可以不去皮应用,为改进北沙参的传统加工方法提供了实验依据。

采用寡糖CZE指纹图谱鉴定北沙参和南沙参

目的利用中药多糖降解寡糖鉴别易混淆中药材北沙参和南沙参。方法采用水提醇沉法提取药材中的多糖,酸法控制降解多糖得到寡糖,1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生寡糖后采用毛细管区带电泳法(CZE)进行分离分析,电泳条件如下:未涂层熔融石英毛细管柱(70 cm×50μm,有效长度61 cm),以40 mmol·L-1硼砂缓冲溶液为运行缓冲液(p H=10.25),检测波长为245 nm,运行电压为18 k V,虹吸进样10 cm×8 s。利用得到的特征性寡糖指纹谱图,结合聚类分析(CA)鉴定北沙参和南沙参。结果采用本方法鉴定区分了不同来源的10批北沙参和南沙参药材。结论本方法可有效用于北沙参和南沙参的鉴定,结果可靠,重现性好,在中药材鉴定上具有良好的应用前景。