siRNA-Gli-1联合BCNU抑制胶质瘤细胞U251增殖

目的探讨siRNA-Gli-1联合卡莫司汀(BCNU)对人脑胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响和作用机制。方法 U251细胞按处理方式不同分为5组:BCNU组(BCNU)、siRNA-Gli-1组(siRNA-Gli-1)、联合组(siRNA-Gli-1+BCNU)、空转组(转染试剂LipofectamineTM2000,lipo)和空白组(细胞培养液RPMI1640)。U251细胞转染siRNA-Gli-1,半定量PCR和Western blot方法检测Gli-1表达及siRNA-Gli-1联合BCNU对BCL-2、CyclinD1和BAX表达的影响;MTT法检测细胞生长抑制率、流式细胞仪检测细胞周期、Annexin V法检测细胞凋亡,观察siRNA-Gli-1联合BCNU对U251细胞增殖能力的改变。结果 siRNA-Gli-1组和联合组中Gli-1 mRNA表达较其他3组明显下降(分别为40.35±0.17、45.20±0.23、93.30±0.43、98.60±0.06和95.93±0.21,P<0.05);BCL-2、CyclinD1表达显著下降,BAX蛋白表达增加或无变化,联合组较siRNA-Gli-1组更明显(P<0.05);与空白组和空转组相比,BCNU组、siRNA-Gli-1组和联合组细胞凋亡率增加(分别为0.76%±0.70%、0.53%±0.82%、12.87%±0.57%、22.23%±0.39%和28.76%±1.55%,P<0.01),细胞分裂明显阻滞于G0/G1期,S期减少;siRNA-Gli-1组、BCNU组和联合组细胞生长抑制率均随时间的延长而升高(P<0.05)。结论 siRNA-Gli-1联合BCNU抑制胶质瘤U251细胞的增殖机制可能与阻滞细胞周期、增强BAX和抑制BCL-2表达有关。

Hh信号通路特异性抑制剂环靶胺对胃癌细胞侵袭转移的影响及其机制探讨

目的观察Hedgehog(Hh)信号通路特异性抑制剂环靶胺对人胃癌细胞侵袭转移的影响,并探讨其机制。方法用不同浓度的环靶胺处理人胃癌细胞MGC-803,MTT法检测细胞的增殖能力,Transwell小室观察细胞的迁移、侵袭等转移能力,qRT-PCR法检测Hh信通路相关蛋白Smo、Gli-1和转移相关因子基质金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA表达,Western blotting法检测Gli-1、MMP-9蛋白表达。结果随着环靶胺浓度的增加和作用时间的延长,胃癌细胞增殖抑制率逐渐增加(P均<0.05);环靶胺处理胃癌细胞24 h,40μmol/L处理的细胞侵袭和转移的穿膜细胞数均少于0μmol/L(P均<0.05),40μmol/L处理的细胞Gli-1、Smo、MMP-9 mRNA相对表达量均低于0μmol/L(P均<0.05),40μmol/L处理的细胞Gli-1、MMP-9蛋白相对表达量均低于0μmol/L(P均<0.05)。结论环靶胺能通过抑制Hh信号通路下调MMP-9表达,从而抑制胃癌细胞MGC-803的侵袭和转移。