Y-box结合蛋白1通过Gli2调控肝祖细胞增殖

目的探索Y-box结合蛋白1(YB-1)对肝祖细胞(HPC)增殖的影响及机制。方法慢病毒载体系统下调YB-1的表达,细胞增殖实验和流式细胞术检测细胞增殖和细胞周期;RNA测序分析YB-1对HPC表达谱的影响;染色质免疫共沉淀结合高通量测序(ChIP-sequence)检测YB-1在HPC中的靶基因;实时PCR和蛋白质印迹检测相关基因表达;ChIP-PCR验证YB-1与Gli2启动子结合;荧光素酶报告基因实验分析YB-1调控Gli2的转录;Gli1/Gli2阻滞剂与HPC共培养并检测细胞增殖。结果YB-1 mRNA下调67%和75%后HPC增殖率分别下降58%和70%;RNA-sequence显示YB-1能调控Hedgehog信号通路、Wnt信号通路以及MAPK信号通路;ChIP-sequence显示YB-1在HPC中的靶基因参与细胞粘附、Wnt信号通路、Hedgehog信号通路,且YB-1能结合于Gli2启动子区;ChIP-PCR和荧光素酶报告基因实验表明YB-1能与Gli2结合并正调控其转录;实时PCR和蛋白质印迹证实YB-1可以调控Hedgehog信号通路上多种信号分子的表达;与对照组相比,Gli1/Gli2阻滞剂处理后处于有丝分裂期的HPC细胞数下降60%以上。结论YB-1能与Gli2启动子区结合并正向调控其转录,进而调控HPC增殖。

硼酸钠对人肝癌HepG2细胞Hedgehog信号通路蛋白表达的影响

目的观察硼酸钠对人肝癌HepG2细胞Hedgehog信号通路蛋白表达的影响。方法将HepG2细胞随机分为两组,实验组用4.0 mmol/L硼酸钠处理24 h,对照组不做处理;收集细胞,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测细胞中Hedgehog信号通路蛋白Gli2、Ptch1、Cyclin D1 mRNA,Western blotting法检测细胞中Hedgehog信号通路蛋白Gli2、Ptch1、Cyclin D1。结果实验组细胞中Gli2、Ptch1、Cyclin D1 mRNA相对表达量分别为0.58±0.05、0.64±0.08、0.35±0.03,相应的蛋白相对表达量分别1.14±0.03、0.93±0.02、1.86±0.02,均低于对照组,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论硼酸钠可下调人肝癌HepG2细胞中Hedgehog信号通路蛋白的表达,为新型抗肿瘤药物的研发及作用靶点提供了依据。