GLI3基因表达与新疆维吾尔族先天性马蹄内翻足发病的关系

目的探讨GLI3基因表达与新疆维吾尔族先天性马蹄内翻足(ICTEV)发病之间的关系。方法选择新疆地区84例ICTEV患儿(维吾尔族51例,汉族33例)和39例足部创伤正常儿童(维吾尔族25例,汉族14例),分别采用实时荧光定量PCR、Western blot法检测足部肌肉组织中的GLI3 mRNA及蛋白。结果观察组足部肌肉组织中GLI3 mRNA及蛋白相对表达量分别为0.61±0.02、68.72±3.05,对照组分别为0.07±0.01、22.38±1.74,P均<0.01;观察组维吾尔族患儿足部肌肉组织中GLI3 mRNA及蛋白相对表达量分别为0.73±0.01、83.01±4.42,汉族患儿分别为0.40±0.02、56.85±3.50,P均<0.05;对照组维吾尔族和汉族患儿足部肌肉组织中GLI3mRNA及蛋白相对表达量比较,P均>0.05。结论 GLI3基因表达与新疆维吾尔族ICTEV的发病有一定关系,维吾尔族可能更易受GLI3基因表达水平的影响而导致ICTEV的发生。

黄牛Gli3基因第10外显子多态性及其与生长性状相关性

利用PCR-SSCP和DNA测序技术研究708头黄牛Gli3基因第10外显子的多态性,发现此外显子存在SSCP多态。对不同SSCP带型的对应片段进行测序分析,共发现2个新的SNP多态位点(NW_001494928:g.205649T>C,205754A>C),这2个SNP完全连锁。南阳牛不同基因型与生长发育性状的相关性分析显示,CC基因型个体的24月龄平均日增体质量指标显著大于TT基因型个体(P<0.05),其余各项指标基因型间差异不显著(P>0.05)。因此,该位点有可能作为南阳牛生长性状辅助选择的标记之一。秦川牛和郏县红牛群体中没有发现与该基因座多态显著相关的性状。

GLI3基因新发突变致多指（趾）畸形一家系

目的对1个先天性多指(趾)畸形家系进行GLI家族锌指3基因(GLI3)突变分析,进一步丰富GLI3的突变谱。方法收集1例临床诊断为多指(趾)畸形的患儿资料,提取患儿外周血DNA,应用全外显子测序方法检测与患儿症状相关的致病基因,并在家系其他成员中应用Sanger测序进行验证。结果该家系中包括患儿在内的4位多指(趾)畸形患者位于7p14.1的GLI3基因存在c.2783delG(p.Arg928Profs24X)框移突变。在该家系的正常成员中未检测到该位点突变。经查询HGMD、Clinvar及dbSNP数据库均未见相关报道。该病例多指(趾)畸形诊断明确,其突变位点为新突变。GLI3基因的c.2783delG(p.Arg928Profs24X)框移突变可能为该家系的发病原因。结论本研究发现新发突变GLI3[c.2783delG(p.Arg928Profs24X)],进一步丰富了GLI3基因的突变谱,为深入研究多指(趾)畸形的发病机制提供了新的内容。

常染色体显性Pallister-Hall综合征患儿1例的GLI3基因变异分析

目的探讨1例Pallister-Hall综合征(PHS)患儿的临床特点及遗传学病因。方法选取2020年6月2日于南方医科大学珠江医院就诊的1例PHS患儿为研究对象。对患儿进行全外显子组检测,对候选变异进行Sanger测序家系验证。结果基因检测提示患儿携带GLI3基因(NM_000168)c.3320_3330delGGTACGAGCAG(p.G1107Afs×18)杂合变异,其父母均未携带相同变异。结论GLI3基因c.3320_3330delGGTACGAGCAG(p.G1107Afs×18)移码变异可能是患儿的遗传学病因。对于以下丘脑错构瘤、中心性多指(趾)畸形为主要特征的患儿,应考虑PHS并进行GLI3基因的变异检测。

GLI3基因与单纯性马蹄内翻足的关联分析及其突变筛查

目的对GLI3基因与单纯性马蹄内翻足进行关联分析和突变筛查,探讨GLI3基因与单纯性马蹄内翻足的相关性。方法应用限制性片段长度多态性分析技术,分析84个单纯性马蹄内翻足核心家系中GLI3基因内两个单核苷酸多态(singlenuc leotide polymorphisms,SNP)位点的基因型,并应用ETDT软件统计分析各SNP位点基因型与单纯性马蹄内翻足的关联;应用变性梯度凝胶电泳技术对103例单纯性马蹄内翻足患者GLI3基因的第9至12外显子进行突变筛查。结果经ETDT分析,位于GLI3基因第4外显子的cSNPrs846266差异无统计学意义(χ2=3.3582,P>0.05);第14外显子的cSNPrs929387差异有统计学意义(χ2=7.2466,P<0.05),在单纯性马蹄内翻足核心家系中存在传递不平衡;发现1例患者及其母亲的第9外显子有108(G→A)的同义点突变。结论GLI3基因与单纯性马蹄内翻足相关,其第9至12外显子可能并非该病的突变热点。

GLI3基因在单纯性马蹄内翻足发病机制中的作用

目的探讨GLI3基因与单纯性马蹄内翻足（idiopathiccongenitaltalipesequinovarus，ICTEV）的相关性。方法应用变性梯度凝胶电泳技术检测GLI3基因编码区的突变。用逆转录-PCR方法研究GLI3基因在ICTEV患者下肢的表达情况。构建ICTEV大鼠模型，应用实时定量PCR、免疫组织化学染色和蛋白质免疫印迹（Westernblotting）方法研究Gli3基因在ICTEV模型鼠下肢肌肉组织中的表达。结果在84例ICTEV患者外周静脉血中未发现GLI3基因第1～8外显子以及第13外显子存在突变。在ICTEV患者及正常人下肢拇长屈肌中均未检测到GLI3基因的表达。不论在mRNA水平还是在蛋白质水平，Gli3基因在ICTEV模型胎鼠下肢组织中的表达均明显高于正常对照胎鼠。结论GLI3基因的编码区突变可能不是ICTEV发病的主要原因，但GLI3基因的表达异常与马蹄内翻足的发病可能有关。

GLI3基因在单纯性马蹄内翻足发生中的调控机制

目的探讨在单纯性马蹄内翻足发生过程中GLl3基因的凋控机制。方法构建荧光素酶报告基因表达载体，分析大鼠Glj3基因5’侧翼启动子区域的活性。用P-Match软件预测Gli3基因上游序列中转录因子的结合位点，并通过染色质免疫沉淀实验、凝胶迁移实验验证。用RNA干扰实验以及构建Hoxdl3表达载体，观察其在L6细胞中对Gli3基因表达的影响。结果在大鼠Gli3基因序列的启动子区域发现2个Hoxdl3的结合位点，染色质免疫沉淀和凝胶迁移实验证实Hoxdl3结合于结合位点2上。Hoxdl3表达下调时，Glj3基因表达明显上调。Hoxdl3基因表达上调时，Gj诏基因则表达下调。结论在大鼠胚胎肢体发育中，Hoxdl3蛋白可能与Gj馏基因启动子区的Hoxdl3结合位点2结合，调控Gj据的表达。

GLI3基因新突变导致多指（趾）并指（趾）畸形一家系

目的对1个先天性多指（趾）并指（趾）畸形（synpolydactyly）家系进行GLI3基因的突变分析。方法应用Sanger法检测先证者GLI3基因的突变，并在家系其他成员及100名正常对照中进行验证。结果测序显示该家系中的3例患者均发生了GLI3基因的C．480dupC（P．Alal6lfs）杂合移码突变，导致其蛋白质产物从第161位氨基酸开始编码紊乱。在该家系的正常成员以及100名无亲缘关系的正常对照中未检测到同样的突变。结论GLI3基因C．480dupC（P．Alal61fs）杂合突变可能为该家系的发病原因。上述突变的发现进一步丰富了GLI3基因的突变谱。

单核苷酸多态性微阵列联合染色体G显带核型分析产前诊断1例7p14.1-p12.3缺失胎儿

目的明确1例双足多趾及侧脑室增宽胎儿染色体拷贝数变异(copy number variants,CNVs)性质及来源,为产前遗传咨询提供依据。方法采用常规G显带技术分析胎儿脐血及其父母的外周血染色体核型,用单核苷酸多态性微阵列芯片(single nucleotide polymorphism array,SNP-array)对胎儿及其父母进行全基因组拷贝数变异分析。结果G显带结果显示胎儿的染色体核型为46,XN,del(7)(p14p12),其父母染色体核型均未见异常。SNP-array检测结果显示胎儿染色体7p14.1-p12.3区存在6.412Mb杂合缺失,其父母基因组拷贝数未见异常。结论胎儿染色体拷贝数杂合缺失为新发致病性突变,被诊断为Greig头多并指综合征(GCPS),缺失区域包含的GLI3是该综合征的关键基因。