Exogenous p16 gene therapy combined with X-ray irradiation suppresses the growth of human glioma cells

In this study, we infected human glioma U251 cells with a replication-defective recombinant adenovirus carrying the p16 gene. This adenovirus constructed was able to transfect exogenous p16 into the human glioma cells efficiently, and direct a high level of p16 protein expression. Tumor-inhibition experiments demonstrated that treatment with the adenovirus-p16 significantly inhibited the growth of glioma cells in vitro as well as the in vivo development of tumors in nude mice bearing a brain glioma. The combination of adenovirus-p16 gene treatment and X-ray irradiation resulted in a greater inhibition of tumor growth. Adenovirus-mediated p16 gene therapy conferred a significant antitumor effect against human glioma cells both in vitro and in vivo, and that there was a synergistic effect when X-ray irradiation was also used.

Effect of adenoviral vector-mediated rat antisense AT1B gene transfer on neointima proliferation after rat carotid injury

Objective: Angiotensin Ⅱ is a growth-promoting factor for vascular smooth muscle cells in culture andin the intact animal. The biological effects of angiotensin Ⅱ are manifested only by binding to specific receptors oncell membranes. In the study, we observed that the effect of rat antisense AT1B gene transfer mediated by adenoviral vector-on neointimal proliferation following rat carotid injury. Methods: Antisense AT1B gene was transductedinto the carotid by adenoviral vector after carotid bal1oon injury and the restenosis model was established in SD rat.We measured neointima/media area ratio in local artery at day 21 after gene transfer. Results: Rat antisense AT1Bgene was successfully transducted into local carotid after the carotid balloon injury. Neointima/media area ratiowas significantly reduced (47 %, P<0. 01) at day 21 after gene transfer compared with the control group. Conclusion: The results suggest it is possible that antisense AT1B gene transfer as a potential therapeutic approach prevent neointimal hyperplasia.

腺病毒载体介导的大鼠反义血管紧张素Ⅱ受体Ⅰ_B基因转移对大鼠颈动脉损伤后新生内膜增殖的影响

目的探讨腺病毒载体介导的大鼠反义血管紧张素Ⅱ受体ⅠＢ（ＡＴ１Ｂ）ＲＮＡ转移对大鼠颈动脉损伤后新生内膜的影响。方法利用重组腺病毒载体将大鼠反义ＡＴ１ＢＲＮＡ转移至大鼠颈动脉球囊损伤模型中，２１天后观察其对新生内膜形成的影响。结果用腺病毒载体转导大鼠反义ＡＴ１ＢＲＮＡ至大鼠球囊损伤的颈动脉，２１天后，与对照组相比，损伤血管新生内膜／中层面积比降低了４７％（Ｐ＜０．００１）。

腺病毒载体介导反义Src基因治疗胶质瘤

目的 探讨腺病毒载体介导的反义Src基因对胶质瘤生长的作用及其机制.方法 应用携带反义Src基因的重组腺病毒体外感染C6胶质瘤细胞,观察其对细胞形态、生长曲线和克隆形成率的影响.建立大鼠胶质瘤动物模型,原位注射重组腺病毒.观察其治疗作用,Western blot检测肿瘤组织Src、Ras、MAPK蛋白的表达,实时逆转录-聚合酶链反应（Real-time RT-PCR）检测肿瘤组织Caspase-3、Caspase-8 mRNA的表达.结果 体外研究表明感染反义Src基因的C6胶质瘤细胞生长受到显著抑制.体内研究表明应用携带反义Src基因的腺病毒原位注射治疗大鼠胶质瘤能够抑制肿瘤生长,减少Src、Ras、MAPK蛋白的表达,增加Caspase-3、Caspase-8 mRNA的表达.结论 腺病毒载体介导的反义Src基因能够抑制大鼠胶质瘤细胞的生长.Src-Ras-MAPK信号通路参与胶质瘤的生长,抑制该信号通路可以增加凋亡通路关键蛋白Caspase-3、Caspase-8的表达.

腺病毒介导反义IGF-1抑制鼠胶质瘤细胞增殖的实验研究

目的重组腺病毒反义ＩＧＦ－１基因（ＡｄＨＣＭＶ－ＩＧＦ－１Ａ）治疗大鼠Ｃ６胶质瘤。方法体外克隆反义ＩＧＦ－１３００ｂＰ基因片段重组入腺病毒，经扩增纯化，测定滴度，体外体内感染Ｃ６胶质瘤细胞，观察ＩＧＦ－１的表达及肿瘤大小、生存期变化。结果重组腺病毒反义ＩＧＦ－１滴度６．５×１０１０ｐｆｕ／ｍｌ，反义ＩＧＦ－１基因序列正确，体外Ｃ６－Ａｄ－ＩＧＦ－１Ａ的ＩＧＦ－１表达降低，Ａｄ－ＩＣＦ－１Ａ治疗皮下Ｃ６肿瘤细胞接种组，肿瘤完全消失。与对照组相比有显著性差异（Ｐ＜０．０１），Ａｄ－ＩＧＦ－１Ａ治疗脑内Ｃ６肿瘤细胞接种组，大鼠生存期超过９０天，而对照组分别为１６．５±１．４天（Ａｄ－ｌａｃｚ组）、１５．７±１．６天（生理盐水组），Ｐ＜０．００１。结论重组腺病毒反义ＩＧＦ－１可抑制Ｃ６细胞ＩＧＦ－１的表达，ＡｄＨＣＭＶ－ＩＧＦ－１Ａ治疗大鼠Ｃ６胶质瘤效果显著。

反义c-myc重组腺病毒对人肝细胞癌细胞的实验性治疗

目的 研究携带反义c myc的重组腺病毒 (Ad Asmyc)对人肝细胞癌细胞体外、体内的治疗作用及其机制。方法 用Ad Asmyc感染人肝细胞癌细胞系BEL 740 2和QSG 770 1,绘制细胞生长曲线 ,进行克隆形成实验 ,研究Ad Asmyc在体外的抗瘤作用 ,在瘤内注射Ad Asmyc,观察裸鼠皮下移植瘤的生长情况。应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)及Westernblot检测相关基因表达 ,应用流式细胞术、梯形DNA、DNA原位末端标记研究细胞周期及细胞凋亡情况。结果 感染Ad Asmyc后 ,BEL 740 2及QSG 770 1细胞内c myc基因表达降低 ,肿瘤细胞的生长受到明显抑制 ,而且出现了G1期阻滞及凋亡 ,体内注射Ad Asmyc后裸鼠皮下移植瘤的生长也得到明显抑制。结论 Ad Asmyc在体外及体内可使肝细胞癌出现细胞生长抑制 ,发生凋亡 ,具有明显的抗癌作用 ,是有应用前景的抗癌药物。

携带反义c-myc的重组腺病毒安全性研究

目的 研究携带反义c myc的重组腺病毒 (Ad ASmyc)潜在的副作用 ,评价其安全性 ,为其进一步进入临床试验提供依据。方法 用Ad ASmyc感染HeLa细胞 ,制备细胞提取液后反复两次感染HeLa细胞 ,观察Ad ASmyc的繁殖、扩增 ,以及对HeLa细胞的作用 ,RT PCR检测其DNA的转录 ;确定Ad ASmyc对作为正常细胞的人胚肺二倍体细胞 2BS的感染能力 ,绘制细胞生长曲线 ,观察Ad ASmyc对正常细胞的毒性 ;给Balb/c小鼠腹腔注射重组腺病毒后 ,每日观察一般状况 ,化验肝、肾功能 ,PCR检测Ad ASmyc在重要脏器中的分布 ,显微镜观察重要脏器的病理学变化。结果 Ad ASmyc是一复制缺陷型腺病毒 ,它能高效感染 2BS细胞 ,但并不影响其生长 ,小鼠体内应用后 ,无急性毒性症状发生 ,在肝、肾、胃、脾内可检测到腺病毒的分布。但在注射 10 9pfu第 6天、第 12天的小鼠肝组织内可观察到轻微炎症。结论 Ad ASmyc应用是安全的 ,可以进入临床试验。

反义血管紧张素Ⅱ受体Ⅰ_B基因转移对大鼠颈动脉损伤后新生内膜的影响

目的 探讨腺病毒载体介导的大鼠反义血管紧张素Ⅱ受体ⅠB(AT1B)RNA转移对大鼠颈动脉损伤后新生内膜的影响。方法 利用重组腺病毒载体将大鼠反义AT1B RNA转移至大鼠颈动脉球囊损伤模型中 ,2 1天后观察其对新生内膜形成的影响。结果 用腺病毒载体转导大鼠反义AT1BRNA至大鼠球囊损伤的颈动脉 ,与对照组相比 ,2 1天后损伤血管新生内膜 /中层面积比降低了 4 7%(P <0 0 0 1)。结论 反义AT1BRNA对血管成形术后再狭窄可能有一定的预防作用。

重组腺病毒载体介导血管抑素基因治疗大鼠脑胶质瘤的实验研究

目的 研究以重组缺陷型腺病毒为载体的血管抑素基因治疗脑胶质瘤。方法 RT PCR法克隆angiostatin基因 ,构建携带血管抑素 (angiostatin)基因的重组腺病毒载体 ,体外检测angio statin的重组腺病毒载体对内皮细胞生长的抑制作用。建立皮下及脑胶质瘤大鼠模型 ,给予体内基因治疗。结果 克隆得到约 1 1Kb的angiostatin基因。构建重组腺病毒载体AdhCMV AGS ,体外试验表明 ,可以强烈抑制内皮细胞的生长。体内试验表明重组腺病毒可以在体内有效表达Angiostatin ,并且有效抑制胶质瘤的生长 ,使荷脑胶质瘤大鼠存活 90天以上。结论 以重组腺病毒为载体的血管抑素基因治疗脑胶质瘤效果显著 。