胶质瘤相关癌基因同源蛋白2促进结肠癌细胞系SW620的上皮-间质转化

背景与目的:胶质瘤相关癌基因同源蛋白2(glioma-associated oncogene homologue 2,GLI2)是Hedgehog信号通路重要的转录因子,不仅参与正常的细胞分化,而且在多种肿瘤细胞中异常激活,与肿瘤转移密切相关。探讨GLI2与结肠癌细胞系SW620上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的关系及其可能机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测人结肠癌细胞系SW620、SW480、HCT116和HT29中E-cadherinmRNA表达,以GLI2干扰慢病毒感染SW620细胞,用RTFQ-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中GLI2 mRNA表达和蛋白水平,采用Transwell小室检测细胞侵袭、迁移能力,黏附实验检测同、异种细胞间黏附能力,Western blot检测细胞中p-AKT、N-cadherin、vimentin、MMP2和E-cadherin蛋白水平。结果:4种细胞系中,SW620的E-cadherin mRNA表达最低(P<0.05),SW620转染72 h后,可见明显的荧光表达;与空病毒组和对照组相比,干扰组细胞的GLI2表达降低(P<0.05);细胞侵袭和迁移能力减弱(P<0.05);同种细胞黏附能力增强(P<0.05);异种细胞黏附能力减弱(P<0.05);p-AKT、N-cadherin、vimentin和MMP-2的表达降低(P<0.05)、E-cadherin表达增加(P<0.05)。结论:GLI2可能通过上调p-AKT、N-cadherin、vimentin和MMP-2表达和抑制E-cadherin表达来促进结肠癌细胞系SW620的EMT。

α-硫辛酸对高糖作用后βTc6细胞的保护作用

目的:研究α-硫辛酸对高糖毒性作用后βTc6细胞胰岛素基因、肌腱膜纤维肉瘤癌基因同系物A(MafA)基因表达的影响,对细胞的保护作用及其机制。方法:培养βTc6细胞,分为NG组(5mmol/L葡萄糖)、HG组(16.7mmol/L葡萄糖)和HG+ALA组(16.7mmol/L葡萄糖+200μmol/Lα-硫辛酸);培养48h后收集细胞培养液,检测胰岛素浓度并提取细胞总RNA,逆转录-聚合酶链反应检测胰岛素及MafAmRNA水平。结果:HG组与NG组比较,胰岛素和MafAmRNA的表达下降(P<0.05或P<0.01);HG+ALA组与HG组相比,胰岛素和MafAmRNA的表达均提高(均P<0.01);而与NG组相比,胰岛素和MafAmRNA的表达差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论:糖毒性可能通过激活βTc6细胞内氧化应激反应使MafA的表达下降,进而导致胰岛素基因表达下降;α-硫辛酸可能通过上调MafA的表达而对β细胞起到保护作用。