Glt25d1基因通过调节NKT细胞及Treg细胞比例加重Con A诱导的免疫性肝损伤

目的 探讨胶原β(1-O)半乳糖基转移酶[collagen β(1-O) galactosyltransferase 1,COLGALT1/GLT25D1]基因在刀豆蛋白A(concanavalin A,Con A)诱导的自身免疫性肝损伤中的作用及可能机制。方法 6~8周雌性野生型(wild type,WT)小鼠和Glt25d1基因敲低杂合子(Glt25d1^(+/-))小鼠分别分为2组(对照组和Con A造模组),每组中WT小鼠和Glt25d1^(+/-)小鼠均各有6只。Con A以10 mg/kg体质量的剂量经内眦静脉丛给药。于造模后12 h处死小鼠。留取血浆,检测血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate transaminase,AST)水平,留取肝组织,用于肝组织病理学评估和肝脏GLT25D1蛋白表达量测定。制备肝脏、脾脏及外周血单细胞悬液,运用流式细胞术比较两种小鼠的调节性T(regulatory T,Treg)细胞、自然杀伤T(natural killer T,NKT)细胞比例,并比较NKT细胞表面凋亡相关因子配体(factor related apoptosis ligand,FasL)表达差异。结果 对照组和Con A造模组中Glt25d1^(+/-)小鼠肝组织GLT25D1表达量均显著低于WT小鼠(对照组:0.342±0.168 vs1.144±0.169,t=5.841,P=0.004;Con A造模组:0.264±0.087 vs 0.964±0.058,t=11.640,P=0.0003)。经Con A诱导12 h后,Glt25d1^(+/-)小鼠ALT水平显著高于WT小鼠[(10155.2±4489.5)U/L vs (3078.5±111.0)U/L;t=-3.522,P=0.024]。肝组织HE染色显示Glt25d1^(+/-)小鼠肝板结构损坏更为严重,肝脏坏死区域更加广泛,汇管区炎性细胞浸润更加显著。流式细胞术检测显示,Con A造模组中Glt25d1^(+/-)小鼠脾脏中Treg细胞频数较WT小鼠显著减少[(7.849±1.116)%vs (9.892±1.762)%;t=2.978,P=0.008],肝脏NKT细胞频数[(9.244±6.898)%vs (3.376±4.794)%;t=-2.253,P=0.037]和NKT细胞FasL表达量[(29.62±4.960)%vs (16.43±3.964)%;t=-5.027,P=0.001]显著高于WT小鼠。结论 Glt25d1基因敲低加重Con A诱导的免疫性肝损伤,其机制可能与其降低Treg细胞频数、增加NKT细胞频数及增强NKT细胞功能有关。