玉屏风联合糖皮质激素治疗过敏性紫癜的疗效观察以及对相关炎症因子表达的影响

目的探讨玉屏风联合糖皮质激素治疗过敏性紫癜的临床疗效,以及对相关炎症因子表达的影响。方法将80例紫癜患儿均分成两组进行对照试验,对照组采用一般常规激素疗法,实验组在对照组基础上加用玉屏风,观察患者激素减量时间、使用总量、治愈率以及复发例数;治疗前及治疗后,检测两组患者外周血中IL⁃2、IL⁃4的表达水平,使用免疫组化技术检测GRα的表达,比较两组之间差异。结果实验组患者在激素使用量、治愈率及复发例数方面明显优于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。两组患者在接受治疗后对IL⁃2、IL⁃4进行比较,实验组其IL⁃2水平较对照组有明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),而IL⁃4显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);对两组患者治疗前后外周血单个核细胞中GRα的表达对比,对照组在接受治疗后GRα的表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),而实验组无明显降低,差异有统计学意义(P>0.05),在接受治疗后对照组GRα的表达明显高于实验组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论玉屏风联合糖皮质激素治疗过敏性紫癜疗效显著,可能与玉屏风具有免疫调节及提升单个核细胞中GRα的表达有关。

JAB1、LPS对糖皮质激素受体转录激活活性的影响

目的 体外观察JAB1基因转染对糖皮质激素受体转录活性的调控作用。方法 采用体外培养COS 7细胞 ,脂质体法共转染含全长人JAB1基因质粒pCDNA3.1 JAB1、pCMV hGRα及含CAT报告基因质粒pMAMneo CAT ,设置不同剂量梯度的pCDNA3.1 JAB1质粒 ,转染 36h后用ELISA方法检测氯霉素乙酰转移酶 (CAT)活性来观察JAB1基因转染对GR转录激活活性的影响。结果 随着pCDNA3.1 JAB1质粒剂量的增加 ,CAT浓度也逐渐上升 ,表明GR的转录激活活性也逐渐增加。LPS能显著地降低CAT浓度 ,但共转染 pCDNA3.1 JAB1质粒可反转CAT活性的降低。结论 JAB1能增强GR的转录激活活性 ,LPS能抑制GR的转录激活能力。

氢化可的松对脓毒症大鼠肺组织糖皮质激素受体-a及核转录因子-κB表达的影响

目的研究氢化可的松对脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织糖皮质激素受体-a及核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法将大鼠随机分为生理盐水组(对照组)、脓毒症组(CLP组)、治疗组(HC组),每组各15只;CLP组和治疗组大鼠采用盲肠结扎穿孔法(CLP)法制备大鼠脓毒症模型;治疗组(HC组)从舌下静脉注射氢化可的松5mg/kg,对照组则注射等渗生理盐水。测定肺组织湿/干比重(W/D),同时用免疫组织化学法分析肺组织糖皮质激素受体-a、NF-κB表达情况及检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)水平。结果氧合指数水平:脓毒症组和治疗组均较对照组大鼠显著降低(P<0.01),治疗组(HC组)大鼠的氧合指数则较脓毒症组(CLP组)大鼠显著升高(P<0.05)。脓毒症组和治疗组大鼠肺组织湿/干比重(W/D)、TNF-α、IL-1β、NF-κB的表达水平均较对照组大鼠显著升高(P<0.01);与脓毒症组对比,治疗组肺组织糖皮质激素受体-a的表达明显增多(P<0.05),TNF-α、IL-1β水平和肺组织NF-κB的表达均明显降低(P<0.05)。结论氢化可的松对脓毒症急性肺损伤具有一定的保护作用,其机制可能与抑制NF-κB表达有关。

TNF-α和IL-1对大鼠肝细胞糖皮质激素受体表达及功能的影响

目的 研究TNF α和IL 1对大鼠肝细胞糖皮质激素受体 (GR)的表达和转录激活能力的影响 ,探讨炎性细胞因子诱发糖皮质激素抵抗的内在机制。方法 免疫细胞化学染色分析经TNF α和IL 1刺激培养后BRL 3A大鼠肝细胞株GR的表达和核转位变化 ,应用糖皮质激素反应元件报告质粒pMAMneo CAT分析系统观察GR的转录激活能力改变。结果 BRL 3A细胞经TNF α和IL 1刺激培养 12h后 ,其胞浆和胞核GR蛋白水平的表达明显降低 ,尤以核内GR降低更加显著 ;转染pMAMneo CAT质粒的肝细胞在地塞米松存在情况下 ,经TNF α和IL 1刺激后CAT含量显著下降 ,两者协同效果更加明显。结论 TNF α和IL 1可以通过降低BRL 3细胞GR的表达和核转位而抑制GR的转录激活能力 ,这可能是炎性细胞因子诱发糖皮质激素抵抗的主要机制。

乌司他丁、地塞米松对急性坏死性胰腺炎大鼠TNF-α、IL-10和GR的影响

目的探讨急性坏死性胰腺炎大鼠(acute necrotizing pancreatitis,ANP)TNF-α、IL-10和糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)的变化规律及乌司他丁(ULI)、地塞米松(DEX)干预对上述指标的影响。方法80只SD雄性大鼠随机分为5组:①假手术组(S组,n=16);②急性胰腺炎组(A组,n=16);③ULI组(U组,n=16);④DEX组(D组,n=16);⑤ULI+DEX组(UD组,n=16)。除S组外,其余各组均通过逆行胰胆管注射5%牛磺胆酸钠制作ANP模型。分别在模型制作成功后8h和12h,观察大鼠胰腺病理改变判断ANP严重程度;酶法检测血清淀粉酶(amylase,AMY)水平,ELISA检测血清TNF-α、IL-10蛋白水平以及RT-PCR检测全血有核细胞GR的mRNA表达。结果①A组大鼠表现为典型ANP病理改变,包括间质水肿、炎细胞浸润、出血和胰腺坏死。ULI和DEX单用或两药联用均可减轻ANP的炎症反应,两者联合应用可能存在协同效应。②A组血清TNF-α、IL-10显著高于S组(P<0.01),ULI和DEX无论是单独应用还是联合应用均可使TNF-α下降以及IL-10上升。③在术后8h和12h,U组、D组GRmRNA表达显著低于S组(分别为P<0.05和P<0.01);术后12hUD组GRmRNA组显著高于A组(P<0.05)。结论TNF-α、IL-10以及GR的改变与ANP的炎症反应存在相关性,而ULI和DEX可能通过影响这些因素达到缓解ANP的作用;两药联合应用可能存在协同作用。

慢性肾功能衰竭肾阳虚型大鼠肾组织细胞糖皮质激素受体、细胞白介素-1β及肿瘤坏死因子-α的变化

目的研究肾阳虚型慢性肾功能衰竭(CRF)大鼠肾组织细胞糖皮质激素受体(GR)及白介素-1(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等炎性因子的变化,探讨CRF肾阳虚证的证候学基础。方法采用腺嘌呤灌胃复制肾阳虚型CRF模型,并设正常组、模型组(腺嘌呤每日200 mg/kg)、济生肾气丸组(腺嘌呤每日200 mg/kg+济生肾气丸每日40 g/kg)、保肾康组(腺嘌呤每日200 mg/kg+保肾康每日33.3 mg/kg),保肾康为对照组。实验全过程24 d,第1～12日每日灌胃1次,第12日后隔日灌胃1次。实验结束,用酶联免疫吸附法测定肾组织IL-1β、INF-α及GR的水平。结果模型组大鼠肾组织细胞IL-1β、INF-α水平明显升高,GR水平明显降低。济生肾气丸组、保肾康组与模型组比较IL-1β、INF-α水平显著降低,GR水平显著升高。济生肾气丸组同保肾康组比较IL-1β、INF-α明显降低,GR水平明显升高。结论 IL-1β、INF-α及GR与CRF肾阳虚证密切相关;济生肾气丸能降低IL-1β、TNF-a水平,并能提高GR的活性。

单次地塞米松治疗对实验性脑出血后肺、脑组织的保护作用及机制

目的研究单次地塞米松(Dex)治疗对脑出血(ICH)后肺、脑组织的保护作用及可能机制。方法采用立体定向技术自体血尾状核注入法制备SD大鼠ICH模型,将大鼠分为假手术组、ICH模型组和Dex治疗组。采用HE染色观察血肿周围组织与肺组织的炎症反应情况,采用透射电镜观察各组肺组织超微结构变化。采用RT-PCR法半定量检测NF-κB p65 mRNA及糖皮质激素受体α(GRα)mRNA在脑与肺中的表达情况。结果(1)ICH模型组脑水肿明显,血肿周围炎症反应重,肺组织损伤以间质性肺炎表现为主,肺泡结构破坏;Dex治疗组脑水肿较ICH模型组明显减轻,肺组织炎性反应减少。(2)NF-κB p65 mRNA表达,ICH模型组脑出血后血肿周围脑组织(0.44±0.08)和肺组织(0.69±0.16)均较假手术组(分别为0.27±0.05和0.26±0.04)增高(P<0.01),Dex治疗组脑(0.1 7±0.14)及肺(0.17±0.03)组织中NF-κB p65 mRNA均明显低于ICH模型组和假手术组(P<0.01);ICH模型组GRα mRNA表达水平,无论在脑组织(0.47±0.07)还是在肺组织(0.49±0.07)均低于假手术组(分别为0.64±0.03和0.65±0.13)(P<0.01),Dex治疗组脑组织(1.01±0.09)和肺组织(0.89±0.08)GRαmRNA表达较ICH模型组和假手术组均明显增强(P<0.01)。结论 ICH后早期、单次给予Dex治疗可减轻脑组织损害,亦可明显改善继发肺损害,其可能作用机制为Dex提高了GRα mRNA水平并抑制NF-κB p65 mRNA表达。

脓毒症时骨骼肌细胞糖皮质激素受体表达与低氧诱导因子关系的研究

目的研究脓毒症时骨骼肌中糖皮质激素受体(GR)表达与低氧诱导因子(HIF-1α)的关系,进一步阐明脓毒症时骨骼肌蛋白高分解代谢的机制。方法 54只Balb/c小鼠随机分为对照组、脓毒症组和治疗组。脓毒症组通过采用腹腔注射脂多糖(10mg/kg)诱导脓毒症(n=24);治疗组(n=24)在伤前2h分别使用糖皮质激素受体拮抗剂(RU38486(10mg/kg)灌胃,余处理同脓毒症组。同时设立对照组(n=6),于伤后24、6、1、2h取材。利用蛋白免疫印迹(western blot)测定肌组织重链肌球蛋白(MHC),半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测GR和HIF-1αmRNA的表达变化。结果在内毒素注射6h后,脓毒症小鼠骨骼肌MHC的含量较对照组显著减少,伤前使用糖皮质激素受体拮抗剂RU38486灌胃,于6h后骨骼肌MHC含量增多,后期均高于脓毒症组。脓毒症小鼠GR与HIF-1αmRNA表达在整个实验过程中显著增加;使用RU38486灌胃后,于伤后6h GR mRNA的表达明显降低(P<0.05),并维持在较低水平,在整个治疗过程中HIF-1α明显降低。相关性分析表明,脓毒症中GR与HIF-1α的表达呈正相关。结论体内GR表达增高是脓毒症大鼠骨骼肌蛋白降解显著增加的原因之一,其作用可能是在基因水平与HIF-1α协同作用,进而导致骨骼肌蛋白分解增强。

肿瘤坏死因子及其单克隆抗体对肾病综合征复发患者糖皮质激素受体表达的影响

【目的】研究肿瘤坏死因子α（TNF-α及其单克隆抗体（简称单抗）对肾病综合征（NS）复发患者外周血单个核细胞（PBMC）糖皮质激素受体（GR）亚型表达的影响。[方法]25例NS患者根据病情分为NS复发组（A组，13例）、NS稳定组（B组，12例）；ELISA法检测两组及正常对照组（C组）TNF-α、TNF—α单抗干预前后的PBMC培养液上清中ORa、GRp的蛋白表达。【结果】干预前A组GRn表达低于B、c组，GR8表达高于B、C组，且差异均有显著性（P〈0．05）。TNF-α干预后三组GRβ表达较干预前高，A组GRa较干预前低，差异均有显著性（P〈0．05），TNF-α及其单抗干预后三组GR8表达较各TNF-α干预组低，A组GRd表达较其TNF-α干预组高（P〈0．05），较干预前则均无明显变化（P〉0．05）。TNF-α单抗干预后A组GRα表达较干预前高，GRf]表达较干预前低，且差异均有显著性（P〈0．05）。[结论]NS复发与GRa表达减低、GRβ表达亢进有关，TNF-α可能通过引起GR亚型比例改变参与Ns复发，而其单抗可缓解这种改变。

实时荧光定量RT-PCR检测糖皮质激素α-受体mRNA表达水平方法的建立

建立用荧光定量RT-PCR的方法检测人糖皮质激素α-受体(GR-α)mRNA水平的标准曲线.根据人糖皮质激素α-受体mRNA序列(GeneBank No.NM_000176)设计引物,反转录出cDNA,再插入到PMD18-T载体中.再根据cDNA设计引物和探针,采用Taq Man探针荧光定量RT-PCR的检测方法,构建人GR-α基因表达量的标准曲线.由PMD18-T-GR-α所构建的标准曲线线性关系良好(反应体系中含1×101-1×105拷贝数的人GR-α基因分子时,扩增反应Ct值与拷贝数的对数呈较好的线性关系)、灵敏度高(可检测出低于10个拷贝/μL的样品)、特异性强、准确可靠.

乌司他丁对脂多糖致大鼠急性肺损伤肺组织糖皮质激素受体的影响

目的探讨乌司他丁(UTI)对脂多糖(LPS)致大鼠急性肺损伤(ALI)组织糖皮质激素受体(GR)的影响,并了解其可能机制。方法清洁级成年雄性SD大鼠54只,随机分为3组:空白对照组(Con组,n=18),LPS组(n=18),脂多糖+乌司他丁组(LPS+UTI组,n=18)。各组又按照不同的时间点被分为4 h、8 h、12 h三个亚组。在各时间点处死大鼠,利用Western blot检测大鼠肺组织中GR的表达,实时荧光定量PCR检测GR m RNA的表达,同时酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺组织匀浆液中肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-10的浓度以及肺组织病理学的变化。结果与对照组相比,LPS组GR蛋白表达在各时间点降低(P<0.05),LPS+UTI组GR蛋白在各时间点的表达水平高于LPS组,低于Con组(P<0.05);与对照组相比,LPS组GR m RNA表达降低(P<0.05),LPS+UTI组GR m RNA在各时间点的表达水平略高于LPS组(P>0.05),低于Con组(P<0.05);与对照组相比,LPS组TNF-α的表达在各时间点升高(P<0.05),LPS+UTI组TNF-α的表达水平在各时间点低于LPS组,高于Con组(P<0.05);与对照组相比,LPS组IL-10的表达在各时间点升高(P<0.05),LPS+UTI组IL-10的表达水平在各时间点高于LPS组(P<0.05)。组织病理学检查显示:LPS组肺组织见肺泡结构破坏,炎性细胞浸润,肺泡间隔增宽,出血,水肿,LPS+UTI组肺组织病理损害较LPS组明显减轻。结论 UTI能提高GR的表达;TNF-α和IL-10出现高峰的时间不同。

乌司他丁对脂多糖致急性肺损伤大鼠肺组织糖皮质激素受体α和β表达的影响

目的探讨乌司他丁对急性肺损伤(acute lung injury,ALI)大鼠肺组织糖皮质激素受体α(glucocorticoid receptor alpha,GRα)、糖皮质激素受体β(glucocorticoid receptor beta,GRβ)表达的影响。方法将72只成年雄性SD大鼠随机分为3组:空白对照组(n=24)、脂多糖组(LPS组,n=24)和脂多糖加乌司他丁组(LU组,n=24),各组又分为4、8、12、24 h 4个不同时间点,每个时间点各6只。LPS组腹腔注射LPS(5 mg/kg);LU组腹腔注射LPS(5 mg/kg)后,即刻腹腔注射乌司他丁(10万U/kg)。各组补足生理盐水至腹腔注射总体积为1 ml。光镜下观察肺组织HE染色病理学变化;同时测定大鼠肺湿干重比(W/D);采用蛋白印迹分析技术检测GRα、GRβ的表达。以灰度值表示其相对表达水平。结果病理检查证实大鼠ALI造模成功。在各时间点3组大鼠肺组织GRα、GRβ的表达:LPS组大鼠肺组织GRα表达水平均低于对照组(P均<0.01),GRβ均高于对照组(P均<0.01);LU组GRα表达水平均高于LPS组(P均<0.05),但仍低于对照组(P均<0.05),GRβ与GRα相反。LPS组内各时间点肺组织GRα、GRβ表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),GRα于8 h降到最低,然后递升;GRβ于8 h达到最高,然后递降。LU组内各时间点肺组织GRα、GRβ表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),随时间延长GRα表达递降,GRβ递增并于8 h达到最高,然后递降。结论 ALI大鼠GRα和GRβ在肺组织中的表达较正常肺组织有所改变,乌司他丁对ALI大鼠有保护作用,可能与其可调控GRα和GRβ的表达有关。