艾灸对实验性RA大鼠海马下丘脑垂体GR表达影响的研究

目的:在观察艾灸对实验性RA大鼠抗炎效应的基础上,研究艾灸对海马、下丘脑及垂体GR表达的影响,探索艾灸治疗RA的GR机制。方法:将雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、艾灸组,用福氏完全佐剂塑造大鼠实验性RA病理模型,艾灸"肾俞"、"足三里"治疗,测定大鼠右后足容积,采用免疫组化法检测海马、下丘脑、垂体GR表达。结果:造模后模型组大鼠足肿胀度明显高于空白对照组(P<0.01),艾灸组大鼠足肿胀度明显低于模型组(P<0.01);海马GR表达,模型组与空白组比较有增高趋势(P>0.05),艾灸组明显低于模型组(P<0.01);下丘脑GR表达,模型组明显高于空白对照组(P<0.01),艾灸组较模型组明显降低(P<0.01);垂体GR表达,模型组较空白对照组显著升高(P<0.01),而艾灸组与模型组比较无显著性差异(P>0.05)。结论:艾灸对实验性RA具有抗炎效应,艾灸对RA大鼠海马、下丘脑GR表达的调控可能是其实现抗炎效应的重要机制。

运动过程中糖皮质激素受体减少的机制探讨——GR mRNA的变化

同步观察大鼠在 7周递增负荷训练过程中血浆皮质酮、肝胞液糖皮质激素受体 (GR)和肝脏GRmRNA的动态变化 ,试图从GRmRNA水平上探讨运动应激后GR变化的机制。SD大鼠随机分为对照组 ,训练 3周组 ,训练 5周组 ,训练 7周组 ,训练 7周 +恢复 1周组。动物训练采用递增负荷的跑台训练。采用放射配体结合分析法测定肝胞液GR结合量 ;定量RT -PCR检测肝GRmRNA表达。结果发现 :(1) 7周递增负荷训练过程中 ,血浆皮质酮浓度表现为不断增加 ,至第 7周达最高 ,第 8周 (恢复周 )又降至接近对照组水平。 (2 )大鼠在 7周递增负荷训练过程中 ,肝胞液GR呈持续下降 ,至训练第 7周降至最低 ,恢复 1周后大鼠肝胞液GR有回升。 (3)在 7周递增负荷训练过程中 ,肝脏GRmRNA的变化与肝胞液GR的变化相近 ,与肝胞液GR的变化不同 ,恢复 1周后肝GRmRNA已恢复至正常水平。结果表明 ,递增运动负荷训练过程中GR结合容量的减少至少部分地发生在mRNA水平上 ,即由于GRmRNA的减少 ,造成GR分子的合成减少。但是 ,GR结合容量的恢复速度比GRmRNA慢 ,提示训练过程中 ,大鼠肝GR结合容量的减少不全是GRmRNA减少的结果 ,可能还有其他影响因素 ,比如GR结合活性的减少和 /或GR蛋白分解加速。

艾灸调整实验性RA大鼠HPAA功能的GR机制研究

目的:探索艾灸调整实验性类风湿性关节炎(RA)大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPAA)功能的糖皮质激素受体(GR)机制。方法:将SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、艾灸组、艾灸加注射RU28362组,用福氏完全佐剂塑造实验性RA病理模型,以GR激动剂RU28362腹腔注射作为干预研究手段,艾灸"肾俞"、"足三里"穴治疗,检测大鼠足容积,用ELISA法测定大鼠血浆CRH、ACTH、GC含量。结果:模型组大鼠足肿胀度明显高于空白对照组(P<0.01),艾灸组大鼠足肿胀度明显低于模型组(P<0.01),艾灸加注射RU28362组足肿胀度与模型组比较无显著性差异(P>0.05);与空白组对照组比较,模型组血浆CRH、GC含量显著增高(P<0.01),ACTH含量显著降低(P<0.05);艾灸组血浆CRH、GC含量明显低于模型组(P<0.01),ACTH含量明显高于模型组(P<0.05),但艾灸加注射RU28362组血浆CRH、ACTH、GC含量与模型组比较无显著性差异(P>0.05)。结论:艾灸对实验性RA具有明显的抗炎效应;艾灸对实验性RA大鼠的HPAA功能紊乱有良性调整作用;海马GR在艾灸调整实验性RA大鼠HPAA功能中具有重要作用。

清醒小鼠严重颅脑闭合性撞击伤后外周血TNF-α IL-1β皮质醇和肝脏GR蛋白表达的变化

目的研究小鼠严重闭合性脑创伤后外周血中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的变化与肝脏糖皮质激素受体(GR)变化的关系。方法利用BIM-III型小型多功能动物撞击机对小鼠清醒致伤,于致伤后30min、2h、8h、24h、48h、72h采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组外周血清中细胞因子的含量,放免法检测皮质醇含量,WesternBlot免疫印迹法检测肝脏GR的蛋白水平的变化。结果致伤后外周血中TNF-α、IL-1β、皮质醇较对照组有明显升高,均具有两个峰值特征;GR在致伤2h后开始出现蛋白水平表达降低,72h仍未完全恢复正常。结论严重颅脑外伤后外周组织存在糖皮质激素抵抗,与TNF-α、IL-1β关系密切。

艾灸对实验性类风湿性关节炎大鼠海马GR、MEL1B表达影响的研究

目的:探索艾灸治疗实验性类风湿性关节炎(RA)大鼠海马中枢的功能机制。方法:将SD大鼠随机分为空白对照组、RA模型组、艾灸组,用弗氏完全佐剂制造实验性RA病理模型,艾灸"肾俞"、"足三里"穴治疗,用免疫组化法测定大鼠海马糖皮质激素受体(GR)表达,用原位杂交法检测海马褪黑激素受体1B(MEL1B)表达。结果:模型组与空白组比较,GR表达有增高趋势(P>0.05),艾灸组显著低于模型组(P<0.01)。模型组与空白组比较,MEL1B光密度值显著增高(P<0.01),艾灸组明显低于模型组(P<0.05)。结论:艾灸对实验性RA海马中枢有良性调整作用,海马GR、MEL1B在艾灸治疗实验性RA大鼠抗炎效应中具有重要作用。

PTSD样大鼠海马MR和GR变化的研究

目的研究PTSD大鼠海马神经元核受体MR(mineralocorticoid receptor,盐皮质激素受体)和GR(glu-cocorticoid receptor糖皮质激素受体)表达的变化。方法采用国际认定的SPS方法刺激大鼠建立PTSD大鼠模型,分别取SPS处理后24h、7d、14d大鼠脑组织;同时取正常脑组织(非SPS刺激)作为对照,应用免疫组化、Western Blot方法分别进行各组海马神经元GR和MR表达变化的观察及定量检测。结果(1)经SPS处理后,免疫组化和Western Blot结果显示海马神经元MR表达呈现随着24h、7d、14d逐渐下调的趋势;(2)经SPS处理后,免疫组化和Western Blot结果显示海马神经元GR表达于24h时下调,而7d、14d时呈现逐渐回升趋势。结论大鼠经SPS处理后,海马MR表现为持续下调状态;而GR表达为短暂下调,随后回调,揭示PTSD大鼠海马神经元核受体—MR和GR的表达变化可能是引发海马功能降低的重要因素之一。

辽东楤木根皮和人参茎叶总皂苷提取物对过度训练大鼠海马盐皮质类固醇受体MR,糖皮质激素受体GR蛋白表达的影响

研究目的:为了加快机体的恢复,提高机体对大运动负荷的适应能力,我们从分子生物学和生物化学角度探讨长时间大运动量训练和不同中药提取物对海马的调节,进一步探索加快机体恢复,提高运动能力的调理方式,为科学训练提供理论依据。研究方法:Wistar大鼠77只,随机分为五组:正常对照组(NC组)12只、运动对照组(EC组)17只、运动+人参组(PG组)16只、运动+辽东楤木低剂量组(LA组)16只、运动+辽东楤木高剂量组(HA组)16只,采用6周递增负荷游泳训练模型,最后一次训练结束,随机剔除多余大鼠,使各组样本数均为8只,24h后,取样。采用不同的方法对大鼠脑组织(海马)代谢和调节指标进行测定。研究结果:各组MR无显著差异。与NC组相比较,EC组GR蛋白表达极显著下降,P<0.01。与EC组相比较,PG、LA和HA组GR蛋白表达显著升高(P<0.01;P<0.05;P<0.05)。与PG组相比较,LA和HA组GR蛋白表达明显下降(P<0.05)。研究结论:过度训练可导致海马GR蛋白表达显著降低,提示过度训练导致运动性高皮质酮血症出现与海马中GR蛋白表达下降引起的海马损伤及功能失调,HPA轴负反馈障碍有关。人参和辽东楤木提取物均可提高海马GR蛋白的表达,对于改善海马对HPA轴负反馈的调节,对降低过度训练导致的应激反应(高皮质醇血症),避免免疫抑制的发生具有积极作用,且人参提取物优于高、低剂量的辽东楤木提取物。

在应激低反应期新生大鼠的海马和视交叉上核核受体-MR、GR表达的变化

目的搞清新生大鼠HPA轴改变在应激低反应时期(stress hyporesponsive period、SHRP))的核受体-MR(盐皮质激素受体)和GR(糖皮质激素受体)在海马和视交叉上核(SCN)的表达变化。从而进一步了解新生大鼠发育时间对MR和GR的影响。方法本研究应用免疫荧光技术研究了生后4d(PD4)和生后12d(PD12)的新生大鼠海马和SCN的MR、GR的表达。同时采用RIA方法测定了血清中皮质类固醇的浓度水平。结果RIA结果显示在应激低反应期给予刺激,血清皮质类固醇水平没有明显改变。在海马,PD12较PD4,MR-和GR-i mmunoreactivity在CA1区表达增强;在齿状回没有明显变化;在海马门(hilus)减弱。而在海马的CA3区和SCN中,PD4 GR-ir强烈表达,在PD12却下降。同时也发现在hilus细胞出现GR和nestin(巢蛋白)阳性表达的共存,但是却没有发现MR和nestin的共存。结论新生大鼠阶段,发育时间对MR和GR的影响因区域不同影响不同。GR和nestin(巢蛋白)的共存为探讨在新生大鼠阶段GR对神经干细胞的分化有否影响提供了实验资料。本研究也为进一步研究新生大鼠应激低反应状态下海马及SCN与低活性的HPA轴的关系提供了形态学依据。

糖皮质激素受体GR真核表达载体的构建与鉴定

目的:构建糖皮质激素GR的真核表达载体,为探讨GR与中医肾阳虚的关系奠定基础。方法:以GR基因为靶基因,以pBS/U6-Neo质粒为载体,设计构建重组体,根据GR mRNA基因序列,设计有小发夹结构的2对寡核苷酸序列,克隆到空载体pBS/U6-Neo,转化DH5a菌株,提取质粒,进行PCR鉴定和测序分析。结果:经PCR鉴定筛出的重组体测序结果与目的序列相同,重组载体构建成功。结论:利用RNA干扰技术可成功构建小干扰RNA重组体,为后续稳定转染及培育转基因小鼠奠定基础。

IL-6、TNF-α、GR-α、GR-βmRNA与常见眼眶疾病患者对糖皮质激素敏感性的关系

目的分析白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)α亚型(GR)及β亚型(GR-β)mRNA与常见眼眶疾病如甲状腺相关性眼病(thyroid-associated ophthalmopathy,TAO)和特发性眼眶炎性假瘤患者(idiopathic orbital inflammatory pseudotumor,IOIP)与糖皮质激素(glucocorticoid,GC)敏感性的关系。方法收集首都医科大学附属北京同仁医院眼肿瘤门诊TAO患者62例及IOIP患者36例,包括糖皮质激素敏感组和抵抗组。收集EDTA-K 2外周抗凝血,将标本一分为二,分为处理组和对照组。处理组加入终浓度为100 nmol/L的地塞米松,对照组加入等体积的二甲基亚砜,室温下处理7 h。实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,q-PCR)法检测患者外周血白细胞GR-α、GR-β、IL-6及TNF-α的mRNA表达量,分析其与患者对GC敏感性的关系。受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评价GR-α/β指标区分患者对GC敏感性的效能。结果TAO敏感组和抵抗组IL-6、TNF-α、GR-α及β的差异无统计学意义(P>0.05);GR-α/β的差异有统计学意义(P<0.05);GR-α/β的ROC曲线下面积(area under the ROC curve,AUC)为0.70(95%CI:0.54~0.87),临界值取1.255,此时灵敏度和特异度分别为85%和53%。IOIP敏感组与抵抗组IL-6、TNF-α及GR-α的差异无统计学意义(P>0.05);GR-β及GR-α/β在两组之间差异有统计学意义(P<0.05);GR-α/β的AUC为0.77(95%CI:0.58~0.95),临界值取1.005,此时灵敏度和特异度分别为90%和72%。结论GR-α/β有望成为预测TAO和IOIP患者对GC敏感性的指标。

烧伤小鼠肝组织糖皮质激素受体的变化

目的 观察烧伤小鼠 2 4h内肝组织糖皮质激素受体在蛋白及mRNA水平的时相变化特点。方法 将 6 0只BALB/C小鼠随机分为正常对照组和实验组 ,实验组给予背部Ⅲ度 15 %～ 2 0 %烧伤。分别于伤后 2、4、6、12、2 4h测定血清皮质酮浓度 ,用Westernblotting、RT -PCR在蛋白质和mRNA水平测定肝组织糖皮质激素受体。结果 烧伤小鼠血清皮质酮浓度 2～ 4h达到高峰 ,2 4h仍未恢复正常 ;肝组织糖皮质激素受体在蛋白质水平 4～ 6h降至最低 ;而mRNA水平仅仅在伤后 2h有短暂降低。结论 烧伤应激引起小鼠血清皮质酮水平明显升高 ,其受体在蛋白及mRNA水平均可降低 ,但蛋白的降低不仅仅发生在mRNA水平。

抑郁症中糖皮质激素受体与CD4^+ CD25^+调节性T细胞的关系及其所致免疫失衡机制的初步探讨

目的研究抑郁症患者外周血细胞因子白介素-10(IL-10)、转化生长因子β(TGF-β)的变化、CD4+ CD25+调节性T细胞(Treg)的数量及其特征性标志叉头样转录因子P3(Foxp3)的表达与糖皮质激素受体(GR)的表达之间的关系,探讨抑郁症患者免疫失衡的可能机制。方法纳入36例抑郁症患者和36名正常对照,根据Hamilton抑郁量表总分将患者划分为轻、中和重不同抑郁程度组;利用ELISA方法测定受试者外周血血清细胞因子IL-10、TGF-β浓度;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测GR的α及β两种亚型(GRα、GRβ)、Foxp3 mRNA表达水平;免疫磁珠分离CD4+ CD25+ Treg,共聚焦显微镜观察Foxp3与GR在CD4+ CD25+ Treg上的共表达。结果与正常对照组比较,患者组血清IL-10、TGF-β的水平降低(P<0.05),外周血CD4+CD25+Treg数量及在CD4+T细胞中的比例明显少于对照组(P<0.01),且重度抑郁组上述指标明显低于中度和轻度抑郁组(P<0.01)。抑郁各组单个核细胞GRαmRNA和FoxP3 mRNA表达水平随抑郁程度而降低(P<0.01),GRβmRNA却在重度抑郁组表达增加。共聚焦显微镜下可观察到重度抑郁患者CD4+ CD25+ Treg上GR与Foxp3表达显著减少。结论糖皮质激素受体可能通过影响调节性T细胞的功能和数量在抑郁症患者免疫失衡的病理生理机制中发挥着重要的作用。

运动过程中糖皮质激素受体的变化

为探讨不同负荷量作用后的机体靶细胞GR的变化特征,本实验复制两种不同运动负荷量的动物运动模型,分别比较:（1）不同强度运动训练后大鼠心、肾胞液GR的变化;（2）7周递增运动负荷训练后大鼠肝胞液GR结合量的变化。采用竞争性蛋白结合分析法检测血浆皮质酮浓度;放射配体结合分析法测定靶细胞胞液糖皮质激素受体结合量。结果发现,运动后GR减少呈运动负荷量依赖性。对这种变化的可能机制和生理意义进行了讨论。

补肾方药对老年大鼠学习记忆相关信号分子mRNA表达的影响

目的观察经典补肾方药——左归丸、右归丸对老年大鼠学习记忆相关信号分子糖皮质激素受体(GR)、N-甲基-D-天冬氨酸受体1(NR1)、N-甲基-D-天冬氨酸受体-2B亚基(NR2B)、钙调蛋白(CaM)、钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)-α、CAMP反应元件结合蛋白(CREB)及活性调节细胞骨架蛋白(Arc)mRNA变化的影响。方法以自然衰老(24月龄)SD雄性大鼠为动物模型,随机分为老年对照组、老年糖皮质激素(GC)拮抗组、老年左归组和老年右归组,另设一组青年对照组(5月龄)。采用原位杂交法检测大鼠海马CA1、CA2-3分区GR、NR1及NR2B mRNA表达变化,实时定量PCR法观察海马组织CaM、CaMKⅡ-α、CREB及Arc mRNA表达变化及补肾方药对上述指标异常变化的改善作用。结果与青年对照组比较,老年大鼠海马GR、NR1、NR2B、CaM、CaMKⅡ-α、CREB及Arc mRNA表达均明显降低(P<0.05);补肾方药左归丸、右归丸及GR拮抗剂RU38486能不同程度地改善上述指标的异常变化。结论老年大鼠学习记忆能力减退可能与GR介导的学习记忆相关信号通路异常有关;补肾方药左归丸、右归丸及RU38486可能通过下调老年大鼠高水平皮质酮、上调学习记忆相关信号分子mRNA的表达,进而改善老年大鼠空间学习记忆能力。

人参皂苷Rg_1诱导人肝HL-7702细胞糖皮质激素受体报告基因表达的作用

目的探讨人参皂苷Rg1(ginsenoside Rg1,G-Rg1)对人肝HL-7702细胞糖皮质激素受体(GR)的调节作用。方法将含有糖皮质激素受体反应元件(GRE)的荧光素酶报告基因的表达质粒载体pGRE-tk-LUC与内参照基因载体质粒pRL-SV40,通过脂质体介导瞬时转染至人肝HL-7702细胞中,利用双荧光素酶报告基因检测系统,观察报告基因的表达变化;利用Western blotting方法检测药物对细胞GR蛋白表达的影响。结果G-Rg1与地塞米松均可诱导pGRF-tk-LUC报告基因表达,且呈剂量依赖性,而且这种诱导作用可以被糖皮质激素受体阻断剂RU486(Mifepristone)所阻断,G-Rg1对细胞GR蛋白表达有显著的抑制作用。结论G-Rg1在体外能够表现出一些类似糖皮质激素样的生物活性,可能是GR的配体。

大鼠创伤后应激障碍模型的建立及其海马糖皮质激素受体的变化

目的 建立较理想的创伤后应激障碍 (PTSD)动物模型 ,并初步探讨脑组织糖皮质激素受体 (GR)变化规律。方法 采用频率 2 5Hz、波宽 1ms、串长 10s、串隔 7min、强度 10 0 μA的恒流、单脉冲电流 ,反复刺激大鼠海马建立PTSD模型 ,观察实验动物情感行为改变 ;并利用Westernblot法检测脑组织GR表达。结果 通过反复惊厥阈下电刺激海马 ,成功诱发了实验动物较长时程的明显活动习性改变、警觉水平增高、惊恐行为、环境适应能力下降、躲藏逃避反应等多种PTSD样情感行为障碍 ;电刺激停止后 1周内海马GR表达明显增高。结论 海马惊厥阈下电刺激可基本满足PTSD主要临床表现 。

人乳腺癌细胞系MCF-7细胞中糖皮质激素受体的表达及其调节

目的研究地塞米松(Dex)在MCF-7细胞中是否具有糖皮质激素受体(GR)的表达,以及Dex对其受体表达的调节。方法采用氨基安替比林法测定GR拮抗剂(RU486)作用MCF-7细胞后能否阻断糖皮质激素的效应,采用放射配体结合分析法检测MCF-7细胞中GR的表达及Dex对其调节作用。结果 RU486可完全阻断Dex对MCF-7细胞活性的诱导作用;在细胞中存在高亲和力、低容量GR;Dex明显降低GR结合活性,且具有时间、剂量依赖性。结论在MCF-7细胞中存在GR,Dex调节MCF-7细胞增殖分化的作用通过 GR介导,Dex对MCF-7细胞GR的结合活性具有向下调节作用,且呈时间、剂量依赖性。

地塞米松、甲状腺素对大鼠胎肺表面活性物质影响及机制的初步研究

本文用大鼠胎肺组织块无血清培养观察地塞米松（Ｄｅｘ）、甲状腺素（Ｔ＿４）对大鼠胎肺表面活性物质（ＰＳ）的作用特点。Ｄｅｘ效应在胚胎１８、１９天最显著，并随Ｄｅｘ浓度增加而增高，但高浓度Ｄｅｘ对胎肺糖皮质激素受体（ＧＣＲ）有向下调节作用。Ｔ＿４可促进ＰＳ增加，并与Ｄｅｘ有协同作用，对胎肺ＧＣＲ有向上调节作用。本文为临床合理应用Ｄｅｘ或联合Ｔ＿４预防新生儿呼吸窘迫综合征提供实验基础。

糖皮质激素受体与阴阳虚证关系的初步探讨

通过临床和动物实验研究的总结回顾 ,探讨糖皮质激素受体 (GR)与阴阳虚证的关系。研究结果提示糖皮质激素受体降低是阴阳虚证发展到一定阶段的病理基础之一 ,且GR下降无特异性 ;参附汤、生脉饮救治阴阳虚证的机理之一是通过增加细胞内GRmRNA的表达以升高GR ;并就以往的研究成果 ,提出了新的假说及相应的研究思路。

外周血单个核的细胞中糖皮质激素受体亚型与突发性聋预后的相关性

目的探讨外周血单个核的细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)亚型与突发性聋(sudden sensorineural hearing loss,SSNHL)预后的相关性以及糖皮质激素(glucocorticoid,GC)治疗对GR亚型表达的影响。方法选择27例应用GC治疗的SSNHL患者,根据听力预后分为有效组(PTA改善≥15dB)15例和无效组(PTA改善<15dB)12例,6例听力正常的鼻中隔偏曲志愿者为对照组。采用实时荧光定量PCR(quantitative real time PCR,QRT-PCR)检测各组对象外周血单个核细胞中的GRαmRNA、GRβmRNA和SRp30cmRNA的表达水平,并随访3个月以上。分析GRαmRNA、GRβmR-NA、SRp30cmRNA表达量和GRαmRNA/GRβmRNA比值在有效组、无效组和对照组间的差异以及SSNHL患者GC治疗前后的差异。结果 27例SSNHL患者中采用鼓室灌注GC治疗20例,静脉滴注GC治疗7例,治疗后有效15例,无效12例。有效组、无效组和对照组间PBMCs中GRαmRNA、GRβmRNA、SRp30cmRNA表达量和GRαmRNA/GRβmRNA比值比较差异无统计学意义。鼓室灌注GC治疗前后均留取血标本15例,其中有效8例,无效7例,有效组GC灌注后PBMCs中GRαmRNA和GRβmRNA表达量均较灌注前下降(ZGRα=-2.380,PGRα=0.017;ZGRβ=-2.521,PGRβ=0.012),而无效组GC灌注前后两者的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论本组SSNHL患者治疗前PBMCs中GRαmRNA、GRβmRNA、SRp30cmRNA表达量和GRαmRNA/GRβmRNA比值均与SSNHL的听力预后无相关性,尚不能用来预测SSNHL患者对GC的敏感性和听力预后;但鼓室灌注GC治疗后GRαmRNA和GRβmRNA表达量下调可能提示有较好的听力预后。