谷氨酰内切酶的原核表达及生物化学特性分析

目的原核表达谷氨酰内切酶,评价其生物化学特性。方法 PQE60Glu△Cmut5质粒转化大肠埃希菌M15,经异丙基β-D-硫代半乳糖(IPTG)诱导、Ni-NTA亲和层析等步骤获得重组谷氨酰内切酶。以偶氮酪蛋白为底物测定其酶活性,分析底物浓度、温度、pH、金属离子和EDTA对酶活性的影响。采用SDS-PAGE电泳和质谱研究谷氨酰内切酶对Hb的酶解作用。结果重组谷氨酰内切酶可以在M15菌中高效表达,并具有较高的酶活性。SDS-PAGE分析显示其相对分子质量约33 000。谷氨酰内切酶的Km值为0.26 mmol/L,最适反应温度为55℃,最适pH为8.0,Ca2+和Mg2+能激活酶活性,Fe2+、Zn2+、Mn2+和EDTA则对酶活性有抑制作用。SDS-PAGE和质谱分析显示重组谷氨酰内切酶对Hb有特异性水解作用。结论谷氨酰内切酶在大肠埃希菌M15中能获得高效表达,具有特有的生物化学特性和严格的底物水解特异性。

地衣芽孢杆菌谷氨酰内切酶的克隆表达与性质研究

谷氨酰内切酶在食品行业应用广,但来源受限。以地衣芽孢杆菌ATCCl4580基因组DNA为模板,PCR扩增出670bp大小的谷氨酰内切酶基因,克隆入表达载体pET28a(+),转化Escherichia coli BL21(DE3),经IPTG诱导,重组蛋白主要以包涵体形式存在。通过与硫氧还蛋白融合、降低诱导温度和共表达分子伴侣三种策略,以期增加重组蛋白可溶性,结果表明分子伴侣对可溶性有明显提高作用,而低温和硫氧还蛋白影响甚微。将重组蛋白样品与底物(Z-Phe-Leu-Glu-pNA)进行孵育反应,结果表明,该酶可有效水解谷氨酸残基的羧基,释放出4-硝基苯胺。酶学性质研究表明,此酶的最适反应温度为42℃,最适作用pH为8.0,金属离子Mn2+对酶活有较好的激活作用。

健康体检者空腹血糖、胰岛素抵抗与血清谷氨酰转肽酶水平的相关性研究

目的 探讨健康体检者血清谷氨酰转肽酶（γ-GT）与FPG、IR间的关系. 方法 纳入793名健康体检者,根据FPG中位数5.42 mmol/L与胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）中位数2.04,分为高FPG（HF）组和正常FPG（NF）组,IR组和IS组,比较各组γ-GT水平. 结果 HF、IR组γ-GT水平均高于NF、IS组（P＜0.01）.Spearman相关分析显示,γ-GT与FPG、FIns及HOMA-IR呈正相关.Logistic回归分析结果显示,FPG（OR=1.615,95％CI：1.208～2.158）、TG（OR=4.104,95％CI：2.650～6.357）、FIns（OR=2.866,95％CI：1.114～7.372）及饮酒情况（OR=3.068,95％CI：1.935～4.864）是γ-GT水平升高的危险因素. 结论 FPG、FIns与血清γ-GT水平相关,γ-GT可能成为T2DM发生风险的预测因素.

血清γ-谷氨酰转肽酶水平与老年2型糖尿病患者并发急性冠状动脉综合征的相关性研究

目的探讨血清γ-谷氨酰转肽酶（GGT）水平与老年2型糖尿病患者并发急性冠状动脉综合征的相关因素。方法选取2013年3月至2014年11月滨州医学院附属医院收治的46例老年2型糖尿病并发急性冠状动脉综合征患者作为研究组，选取同期收治单纯老年2型糖尿病患者50例作为对照组，比较两组患者的一般临床资料和血清学指标。结果研究组体质量指数（BMI）、GGT、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL—C）均高于对照组，高密度脂蛋白胆固醇（HDL—C）低于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）。BMI、GGT、TG、TC、LDL—C及HDL—C均为老年2型糖尿病患者并发急性冠状动脉综合征的危险因素。结论血清γ-谷氨酰转肽酶为老年2型糖尿病患者并发急性冠状动脉综合征独立危险因素，2型糖尿病老年患者血清γ-谷氨酰转肽酶值可反映出急性冠状动脉综合征发生风险。