大豆主要过敏原Gly m Bd 30K蛋白单克隆抗体的制备与应用

利用大豆主要过敏原Gly m Bd 30K蛋白抗原表位蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合。采用半固体培养基法和有限稀释法相结合的方法快速筛选获得稳定分泌的特异性杂交瘤细胞,用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,应用蛋白A亲和层析法进行抗体纯化。采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型;通过间接ELISA、Western Blotting鉴定该单克隆抗体的特性和交叉性。利用双单抗夹心ELISA法检测大豆过敏原。结果表明:获得6株可稳定分泌鼠抗大豆主要过敏原Gly m Bd 30K蛋白的单克隆抗体,分别命名为1C10,1D12,2D1,4B4,5F9,6B12,其Ig亚型除1D12和4B4为IgG2a外,其余均为IgG1,且6株单抗效价均在10-5以上。ELISA和Western Blotting分析表明该6株单抗均能特异性识别大豆主要过敏原Gly m Bd 30K蛋白,并且建立双单抗夹心ELISA的方法可以准确检测出大豆过敏原的存在。鼠抗大豆主要过敏原Gly m Bd 30K蛋白抗原表位区蛋白的单克隆抗体的成功制备,以及双单抗夹心ELISA检测系统的建立,为大豆主要过敏原蛋白的检测奠定了基础,也可以为食品中大豆过敏原的检出提供依据。

致敏大豆蛋白P34及其清除方法的研究进展

大豆作为“八大”过敏食品之一,其过敏患者数量约占食物过敏总人数的25%。如何降低大豆产品的致敏性,保证消费者的安全,已经成为食品安全领域一个热议的话题。大豆中含有多种致敏因子,如Gly-m Bd 30K蛋白、Gly-m Bd 28K蛋白和Gly-m Bd 28K蛋白等。其中Gly-m Bd 30K蛋白作为致敏性最强的过敏原,能被65%的大豆过敏患者血清识别,在几种过敏蛋白中占着较突出的地位。本文综述了Gly-m Bd 30K蛋白的抗原表位、去除方法的研究现状。其中,酶法处理、超高压法、挤压膨化法等降低大豆致敏性的研究已取得了一定的成果,这为进一步提高大豆及其制品的品质质量,保证其在食品工业和畜牧业方面的安全利用提供了科学参考。