水解物对CHO细胞培养工艺的影响

目的对比3种水解物对CHO悬浮培养细胞生长的影响,以及对细胞分泌表达的抗体质量的影响。方法应用3种不同来源的水解物,采用摇瓶培养CHO细胞,观察培养过程中细胞密度、活性和代谢产物的变化,以及抗体质量的影响。结果水解物对CHO生长无显著促进作用、但可大幅度提高抗体产量;对抗体糖型无显著影响,可显著影响抗体电荷分布。结论3种水解物中,Preteose peptone和Phytone peptone对CHO有很好的促进作用。但Preteose peptone含有动物然产分,随着各国药监对动物来源成分监管制度的严格,将进一步限制Preteose peptone的应用,因此Phytone peptone具有优势。

半乳糖凝集素糖结合的新模式：一个糖结合域的双重配体结合(英文)

半乳糖凝集素家族通过糖识别结构域(CRD)可以专一性识别和结合含β-半乳糖的多糖配体来发挥其生物学功能.到目前发现的CRD对β-半乳糖的识别模式是非常保守的,在结构已知的半乳糖凝集素结构中,一个CRD只能结合一个多糖配体分子.最近,通过对人源半乳糖凝聚素-3 CRD与对硝基TF二糖(TFN)复合物的晶体结构解析首次发现,一个CRD可以同时结合2个TFN分子.与这2个TFN分子有双向结合的残基突变体E165A结构分析显示,一个残基的突变引起的结构上的微小变化会使结合位点2丧失结合糖底物的能力,而位点1的配体结合却不受影响.这表明,结合位点1对糖底物保守的识别和结合是基本的、主要的,而结合位点2对于糖有条件的结合,是额外的、次要的.序列比对和立体化学分析显示,参与新位点2结合的关键残基在其他半乳糖凝集素分子中都是保守的,而它们参与糖配体结合并不常见,表明它们作用的发挥是有条件的.可能在复杂寡聚结构的情况下,如有多重分支结构,双重结合位点将有利于对这类配体分子的辨识和结合,已有一系列研究报道,具有分支结构的寡糖与半乳糖分子的亲和势明显高于单价糖配体,与上述分析相一致.对这类双重位点糖结合的可能生物学意义进行了讨论.