HPLC-PAD法测定盐酸大观霉素含量及有关物质

目的建立了一种新的HPLC-PAD法测定盐酸大观霉素含量及其有关物质的分析方法。方法采用ApolloC18（250mm×4．6mm，5μm）色谱柱，以100mmol／L三氟乙酸为流动相，流速为1．0mL／min，柱温为30℃，柱后衍生氢氧化钠溶液浓度为21g／L，流速为0．5mL／min。脉冲安培检测器，工作电极为金电极（3mm），四电位工作模式。结果盐酸大观霉素在0．15～150μg／mL（r=0．9999）内线性关系良好，杂质A在0．05～50μg／mL（r=0．9999）内线性关系良好，杂质B在0．5～50μg／mL（r=1．0000）内线性关系良好，杂质C在0．5～50μg／mL（r=1．0000）内线性关系良好。大观霉素、杂质A、杂质B和杂质C的检测限分别为1．5、1．0、2．0和3．0ng。大观霉素、杂质A、杂质B和杂质C的精密度分别为1．5％、1．1％、1．6％和1．8％。大观霉素的回收率为96．7％～102．5％。结论该方法准确、灵敏，重复性和耐用性好，可用于盐酸大观霉素及其有关物质的实验室日常测定。

小儿豉翘清热颗粒HPLC-PAD指纹图谱的建立及有效成分含量测定

利用高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-PAD)分析检测技术,研究了提取条件(提取溶剂、提取时间)和色谱条件(洗脱溶剂、色谱柱、检测波长)的影响,最终建立了小儿豉翘清热颗粒的指纹图谱和有效成分栀子苷、连翘苷含量测定的方法.在Waters Symmtery-C18色谱柱温30℃、检测波长225nm处,以甲醇和0.1%(体积分数)的磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱建立的小儿豉翘清热颗粒HPLC-PAD的指纹图谱,30个色谱峰分离度良好,10批样品相似度较高(>0.98);栀子苷、连翘苷线性范围良好,相关系数(r)均大于0.999 9,相对标准偏差(Relative Standard Deviation,RSD)均小于3%,加样回收率均大于97%,RSD<3%(n=6).此方法特征性和专属性强,灵敏、准确,可作为小儿豉翘清热颗粒质量评价的方法.

果汁中9种酚酸类化合物的RP-HPLC-PAD分析

研究了同时测定5种果汁中没食子酸、儿茶酸、绿原酸、原儿茶酸、咖啡酸、表儿茶酸、阿魏酸、莽草酸和丁香酸等9种生物活性酚酸的反相高效液相色谱-光电二极管阵列检测新方法。采用ZorbaxEclipseXDB-C18色谱柱(5μm,250mm×4.6mmi.d.),流动相为甲醇-0.5%乙酸,梯度洗脱,流速1.0mL/min,以保留时间和特征光谱对分离出的组分予以定性确证,用峰面积进行定量。9种组分的质量浓度与其峰面积在一定的范围内有良好的线性关系,相关系数为0.9987～0.9999。9种组分的平均回收率为86.5%～98.8%(相对标准偏差为3.1%～5.8%)。检测限为0.2～1.0mg/L。结果表明,该方法也适用于其他复杂体系中没食子酸等9种生物活性成分的分析。

不同提取条件下墨旱莲的HPLC—PAD图谱分析

本文分别采用水煎煮法、30％乙醇回流、70％乙醇回流、30％甲醇回流、70％甲醇回流、索氏提取、微波提取和超声波提取法提取墨旱莲中的成分，采用HPLC分离、梯度洗脱和光电二极管阵列检测，以相对保留时间、相对峰面积、紫外吸收光谱作为指标分析不同提取条件下的图谱。结果不同提取条件对墨旱莲中的成分及成分谱有显著影响，色谱图中的11个共有峰和4个主要色谱峰在不同提取物中的比例及含量有较大差异，4个主要色谱峰中4号峰和8号峰（木犀草素）以70％乙醇回流提取产率最高，其次为70％甲醇索氏提取；6号峰和11号峰以70％甲醇索氏提取产率最高。

HPLC-PAD同时测定玛咖中8种酰胺类化合物含量

为了建立同时测定玛咖中亚麻酰胺、亚油酰胺、十六烷酰胺、甲氧亚麻酰胺、甲氧亚油酰胺、甲氧十六烷酰胺、油酰胺和十八烷酰胺含量的HPLC-PAD方法,样品用正己烷超声波辅助提取,采用Waters Symmetry Shield色谱柱（C18,5μm,4.6 mm×250.0 mm）,以乙腈-水溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长为200 nm,外标法定量。结果显示,8种酰胺类化合物在0.05~10.00 mg/L具有良好的线性,相关系数≥0.999,检出限为0.08~0.22 mg/kg,定量限为0.26~0.76 mg/kg。20 mg/kg、50 mg/kg和100 mg/kg添加水平的加标样回收率为77.0%~117.0%,相对标准偏差为1.58%~5.12%。表明该方法操作简单,重复性和稳定性好,适合玛咖中8种酰胺类化合物同时检测和定量分析。

HPLC-PAD法测定齐墩果酸原料及片剂中的齐墩果酸含量

目的建立反相高效液相色谱法测定齐墩果酸原料及片剂中齐墩果酸含量的方法,同时利用二极管阵列检测器建立了齐墩果酸峰纯度的鉴定方法. 方法色谱柱为Nova-Pak C18,流动相为乙睛-水(65∶ 35),流速0.8 ml·min-1,检测波长210 nm,柱温25℃.结果齐墩果酸在3.48～17.40 μg范围内线性关系良好(r=0.999 9),检出限为0.3 mg·L-1 (3σ),平均回收率为99.5%. 结论该方法简便,准确,线性范围宽,重现性好,适于对含有该成分的药物进行质量评价.

HPLC-PAD外标法及UPLC-MS/MS内标法测定乳及乳制品中三聚氰胺的含量

分别建立高效液相色谱-二极管阵列法(HPLC-PAD)、超高压液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定乳及乳制品中三聚氰胺含量的方法。利用HPLC-PAD外标法进行样品中三聚氰胺的初筛,利用UPLC-MS/MS法进行确证,以13C315N3-三聚氰胺为同位素内标定量。乳制品经乙腈、乙酸锌、盐酸溶液提取,质谱检测时,样品再经MCX固相萃取柱富集净化。HPLC-PAD法的定量限为4mg/kg,UPLC-MS/MS的定量限为0.05mg/kg;HPLC-PAD的添加回收率为95.7%～102.3%,UPLC-MS/MS的添加回收率为91.3%～95.7%(基质匹配曲线校正),两种方法的相对标准偏差(RSD)分别为1.98%～4.51%,1.60%～3.27%。

PAD在HPLC分析长春胺中的应用

本文报道用光电二极管阵列检测器(PAD)鉴定小蔓和大蔓长春花中的长春胺。并对经典制备方法得到的长春胺样品进行了纯度判断。利用建立的紫外光谱数据库对长春胺中的分解产物进行光谱检索和鉴定。测定了长春胺的稳定性。

HPLC-PAD法优化乌骨鸡活性肽分离纯化

乌骨鸡是一种具有药用价值的鸡种,乌骨鸡的鸡肉蛋白通过酶促水解后可获得多肽产物乌骨鸡活性肽,营养价值高,分离纯化活性肽是研究乌骨鸡应用价值的基础。利用装置C18反相色谱柱或TSKgel凝胶色谱柱的高效液相色谱仪进行乌骨鸡活性肽的分离优化,针对流动相、流速进行优化的同时,参考波长、进样量,以出峰数为主,结合分离度等考察分离效果。结果表明:C18柱的出峰数随甲醇含量及流速的降低而增加;三氟乙酸或磷酸盐作缓冲液时出峰数基本一致,但分离度不同;综合因素得pH 6.0磷酸盐/6%甲醇/水体系的流动相、0.2 mL/min的流速为该实验下的最佳分离条件。TSKgel柱的乙腈分离效果优于甲醇,梯度洗脱效果较好;综合因素得出0.1%三氟乙酸/(10%~25%)乙腈/水体系的流动相、0.5 mL/min的流速为该实验下的最佳分离条件。

HPLC-PAD法测定硫酸新霉素含量及其有关物质

建立反相高效液相色谱-脉冲安培检测法(RP-HPLC-PAD)测定硫酸新霉素含量及有关物质方法。采用Thermo Acclaim^(TM) AmG C_(18)(4.6 mm×150 mm,3μm)色谱柱,以2%三氟乙酸溶液[含0.01%五氟丙酸+0.6%氢氧化钠]为流动相,采用积分脉冲安培电化学检测器四电位波形做为检测波形进行检测。测得新霉素B和新霉素C及13个杂质分离良好,新霉素B和新霉素C的检出限均为1.75 ng,定量限均为3.5 ng,新霉素B在0.14～27.89μg/mL内线性关系良好(r=0.998 5),新霉素C在0.14～4.69μg/mL内线性关系良好(r=0.999 6)。该HPLC-PAD法专属性强、灵敏度高、线性范围宽,具有良好的应用前景,为硫酸新霉素标准制定和质量控制提供了依据。

HPLC-PAD法测定不同品种核桃分心木中没食子酸、柚皮素

目的：建立采用超声提取,反相高效液相色谱-二极管阵列检测法测定核桃分心木中没食子酸和柚皮素的含量的方法。方法：色谱柱：安捷伦HC-C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相：甲醇（A）-0.1%磷酸溶液（B）,梯度洗脱;检测波长：276 nm;柱温：30℃;流速：1.0 m L/min。结果：没食子酸和柚皮素分别在2.0~80μg/m L（r=0.9999）和1.0~60μg/m L（r=0.9999）浓度范围内呈良好的线性关系,平均回收率分别为99.7%（RSD=1.84%,n=5）和101.2%（RSD=2.65%,n=5）。分心木中含有具有抗炎、抗病毒、抗菌的没食子酸和柚皮素,平均含量分别为268.3μg/g和102.2μg/g。结论：HPLC-PAD测定没食子酸和柚皮素的方法简便、快速、有效、灵敏、准确、具有良好的重复性和回收率,可作为分心木中没食子酸和柚皮素的定量分析方法。

HPLC-PAD法测定西洋参类保健食品中10种皂苷的含量

目的建立同时测定西洋参类保健食品中人参皂苷Rg1、Rg2、Rg3、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rf含量的高效液相色谱-二极管阵列检测法(HPLC-PAD).方法采用Kromasil C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;以乙腈(A)-水(B)为流动相进行梯度洗脱;流速1.0 mL·min^-1;检测波长203 nm;柱温35℃.结果10种人参皂苷的浓度在其各自线性范围内,与峰面积呈良好的线性关系,r值均≥0.99.该方法平均回收率为93.0%~101.8%,RSD均小于4.0%(n=6).结论本法准确可靠、灵敏度高、重现性好,可作为西洋参类保健食品的质量控制方法.

HPLC-PAD法同时测定复方黄柏液涂剂中9种成分的含量

目的：建立同时测定复方黄柏液涂剂中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、盐酸黄柏碱、连翘酯苷A、异绿原酸B、异绿原酸C、盐酸小檗碱和连翘苷含量的方法。方法：采用高效液相色谱法,色谱柱为Agilent extend C18（250 mm×4.6 mm,5μm）,以乙腈-0.5%磷酸为流动相（梯度洗脱）,流速为1.0 m L·min^-1;柱温为25℃;PAD检测器。结果：9种成分含量测定的线性关系良好,线性范围和相关系数分别为12.37-185.55（r=0.999 9）、38.80-582.06（r=1.000 0）、15.90-238.50（r=0.999 9）、1.52-22.86（r=0.999 8）、48.26-723.87（r=1.000 0）、5.90-88.56（r=0.999 3）、6.58-98.64（r=1.000 0）、9.79-119.58（r=0.999 9）、16.91-253.71μg·m L^-1（r=0.999 9）;平均加样回收率分别为98.63%、102.57%、101.31%、97.95%、102.59%、98.41%、97.59%、98.77%、101.31%;方法的精密度良好,RSD均小于2.0%（n=6）。结论：该方法准确,可靠,可用于复方黄柏液涂剂的质量控制。

HPLC-PAD-ELSD法同时测定牛黄降压丸中6个成分的含量

目的:建立高效液相色谱-二极管阵列检测-蒸发光散射检测(HPLC-PAD-ELSD)法同时测定牛黄降压丸中芍药苷、阿魏酸、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、黄芩苷、胆酸、黄芪甲苷含量的方法。方法:以L9(34)正交试验优化提取条件。采用Waters Sunfire C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.2%甲酸溶液为流动相,梯度洗脱;流速为1.0 ml·min^(-1)。芍药苷、阿魏酸、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、黄芩苷检测波长为278 nm;胆酸、黄芪甲苷使用ELSD检测器,漂移管温度为100℃,氮气流速为3.0 L·min^(-1)。结果:芍药苷、阿魏酸、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、黄芩苷、胆酸、黄芪甲苷进样浓度分别在6.14~98.21μg·ml-1(r=0.9994)、10.84~173.50μg·ml-1(r=0.9998)、1.13~18.06μg·ml-1(r=0.9996)、301.98~4831.73μg·ml-1(r=0.9997)、3.44~55.02μg·ml-1(r=0.9991)、2.38~38.02μg·ml-1(r=0.9999)范围内与峰面积呈现良好的线性关系;平均加样回收率分别为103.0%,100.4%,101.5%,99.0%,102.4%,101.0%,RSD分别为0.6%,0.4%,1.0%,0.6%,0.7%,1.1%(n=9)。牛黄降压丸最佳提取方法为:采用50 ml 70%乙醇30℃超声提取30 min。结论:所建立的方法准确、灵敏度高、重复性好,可用于牛黄降压丸的质量控制。

HPLC-PAD法测定硫酸依替米星注射液有关物质及含量

目的:建立硫酸依替米星注射液有关物质及含量的反相高效液相色谱-脉冲安培电化学(HPLC-PAD)法。方法:采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6 mm×250 mm,5μm或效能相当的色谱柱),柱温35℃。以0.2 mol·L^-1三氟乙酸溶液(含0.05%五氟丙酸,1.5 g·L^-1无水硫酸钠,0.8%(V/V)的50%氢氧化钠溶液,用50%氢氧化钠溶液调节pH值至3.5)-乙腈(95∶5)为流动相,流速为每分钟1.0 mL。柱后加碱(50%氢氧化钠溶液1→25,流速每分钟0.5 mL)。用积分脉冲安培电化学检测器检测。结果:依替米星在0.075~50μg·mL^-1(r=0.9996)内线性关系良好;单个最大杂质的重复性试验的RSD(n=6)为1.4%,总杂质的重复性试验的RSD(n=6)为1.7%,含量测定的重复性试验的RSD(n=6)为0.8%;方法的检测限(S/N=3)为75 ng·mL^-1,定量限(S/N=10)为250 ng·mL^-1;供试品溶液在12 h内稳定性良好。9批样品用药典方法(反相高效液相色谱-蒸发光散射法)和HPLC-PAD法测定,HPLC-PAD法的总杂和杂质个数结果偏高,其中6批样品HPLC-PAD法的含量结果偏低。结论:经方法学验证,该方法可以用于硫酸依替米星注射液有关物质及含量的测定。

HPLC-PDA同时测定白术-白芍单味药、药对、复方中5种有效成分的含量

目的建立白术、白芍、白术-白芍、痛泻要方中白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ,芍药苷、芍药内酯苷的HPLC-PDA色谱分析方法,同时测定5种成分在单味药、药对、复方中的含量,为探究配伍对化学成分的影响提供科学依据。方法采用Thermo Fisher C18(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,以乙腈(A)-水(B)为流动相梯度洗脱;运行时间:32 min;柱温:30℃;流速:1 ml·min-1;检测波长:白术内酯Ⅰ及白术内酯Ⅲ为222 nm,白术内酯Ⅱ为278 nm,芍药苷、芍药内酯苷为232 nm;进样量:10μl。结果对检测结果进行线性考察,以峰面积(Y)与浓度(X)进行线性回归,白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ,芍药苷、芍药内酯苷的线性范围分别为0.008 0~0.320 0μg(r_1=0.999 9)、0.004 1~0.160 0μg(r_2=0.999 8)、0.210 0~0.840 0μg(r_3=0.999 7)、1.750 0~70.000 0μg(r_4=0.999 8)、1.000 0~40.000 0μg(r5=0.999 6);加样回收试验、精密度试验、重复性试验良好,稳定性试验证明在24 h内稳定,结果准确可靠。在单味药、药对与复方中,5种有效成分含量的高低顺序依次是芍药苷>芍药内酯苷>白术内酯Ⅲ>白术内酯Ⅰ>白术内酯Ⅱ。比较白术与白芍配伍前后的含量发现,白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的含量较配伍前均有所升高,而芍药苷和芍药内酯苷的含量较配伍之前的含量均降低;比较药对与复方中5种成分的含量发现,白术内酯Ⅰ的含量药对较复方明显升高,白术内酯Ⅱ、Ⅲ,芍药苷、芍药内酯苷的含量明显降低。结论该法可同时对单味药、药对以及复方的质量控制进行评价;通过比较单味药、药对、复方中有效成分含量的变化,表明配伍可以对药物的有效成分产生影响。

HPLC法测定注射用葡萄糖酸依诺沙星含量及有关物质

建立较科学合理的高效液相色谱法测定注射用葡萄糖酸依诺沙星的含量及有关物质。采用Hypersil ODS2色谱柱，乙腈-磷酸盐缓冲液-0．05mol．L^-1四丁基溴化铵溶液（5：37．5：1）为流动相，流速为1mL·min^-1，进样量为20μL，检测波长为266nm。葡萄糖酸依诺沙星在12．5-250μg·mL^-1浓度范围内线性关系良好（r=0．99993），平均回收率为99．6％（RSD为1．0％）。与原标准方法相比，该方法能更好分离样品中的杂质，柱效及对称因子都较理想。该方法准确快速灵敏，可用于葡萄糖酸依诺沙星含量测定及有关物质的检查。

RP-HPLC梯度洗脱法测定桑叶中芦丁和绿原酸的含量

建立了同时测定桑叶中芦丁和绿原酸含量的方法，采用Kromasil C18柱（4．6mm×250mm，5μm），以甲醇-0．5％磷酸的水溶液为流动相，梯度洗脱程序为0min[V（甲醇）＋V（O．5％磷酸）=30＋70]-15min [V（甲醇）＋V（O．5％磷酸）=30＋70]-20min[V]v（甲醇）＋V（0．5％磷酸）-50＋50]-35min[V（甲醇）＋V（0．5％磷酸-50＋50]；流量0．8mL·min^-1;检测波长350nm；柱温25℃；光电二极管阵列检测器（PAD）。结果表明，芦丁线性范围为0．218～1．962μg，r=0．9993，样品的平均加样回收率为101．3％，RSD1．1％；绿原酸线性范围为0．654～5．886μg，r=0．9997，样品的平均加样回收率为98．2％，RSD1．1％；绿原酸线性范围为0．654～5．886μg，r=0．9997，样品的平均加样回收率为98．2％，RSD1．5％。该法快速简便，专属性强，重复性好，可作为桑叶中芦丁的定量分析方法。

RP-HPLC梯度洗脱法测定杏香兔耳风不同部位中绿原酸和芦丁的含量

目的:建立高效液相色谱法同时测定杏香兔耳风不同部位中绿原酸和芦丁的含量。方法:采用KromasilC18柱(4.6mm×250mm,5μm),以甲醇-水为流动相,梯度洗脱程序为0min(25:75)-13min(25:75)-14min(45:55)-30min(45:55)-40min(75:25);流速0.8ml·min-1;检测波长350nm;柱温25℃;光电二极管阵列检测器(PAD)。结果:绿原酸线性范围为0.430～3.870μg,r=0.9996,样品的平均加样回收率为98.9%(RSD=1.7%);芦丁线性范围为0.252～2.268μg,r=0.9995,样品的平均加样回收率为97.6%(RSD=2.3%)。结论:方法快速简便,专属性强,重复性好,可作为杏香兔耳风中绿原酸和芦丁的定量分析方法。

HPLC测定葡萄糖酸盐的研究

首次应用ＨＰＬＣ测定发酵法制葡萄糖酸盐产品的质量，研究了不同色谱体系、流动相酸度对葡萄糖酸盐分离的影响；测定了多种葡萄糖酸盐（钠盐、钾盐、锌盐、锰盐、镁盐）并在所测样品中成功地分离出多个有机杂质；应用二极管阵列检测器（ＰＡＤ）对样品中杂质的来源和结构进行了初步研究；讨论了葡萄糖酸盐的现行化学测定法与液相色谱测定法之间的差异。本法简便、快速。