多西他赛治疗老年前列腺癌患者的疗效及其对患者P-糖蛋白表达的影响分析

目的 探讨老年前列腺癌患者治疗中多西他赛的应用效果及其对P-糖蛋白表达的影响。方法 73例老年前列腺癌患者,经随机数字表法分为对照组(36例)与研究组(37例)。对照组采用比卡鲁胺治疗,研究组采用比卡鲁胺联合多西他赛治疗。对比两组P-糖蛋白表达、临床疗效及治疗前后生活质量。结果 治疗后,研究组治疗总有效率81.08%高于对照组的55.56%,差异有统计学意义(P<0.05);研究组P-糖蛋白阳性表达率18.92%低于对照组的58.33%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,两组物质生活、躯体功能、社会功能及心理功能评分均明显高于本组治疗前,研究组物质生活评分(74.26±3.46)分、躯体功能评分(86.14±5.31)分、社会功能评分(81.36±3.61)分、心理功能评分(79.84±4.51)分均明显高于对照组的(62.14±3.47)、(76.58±5.28)、(72.64±3.56)、(71.16±4.48)分,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 老年前列腺癌患者治疗中应用多西他赛,可有效降低P-糖蛋白阳性表达率,有效提高治疗效果,生活质量明显改善,具有推广价值。

CA724、miR-183、lncRNA ZFAS1在结肠癌患者血清中的表达及意义

目的分析糖蛋白抗原724(CA724)、微小RNA-183(miR183)、长链非编码RNA(lncRNA)锌指蛋白反义链1(ZFAS1)在结肠癌患者血清中的表达与意义。方法将103例结肠癌患者纳入观察组,同期体检的95例健康体检者纳入对照组。采集2组血液检测对比CA724、miR183、lncRNA ZFAS1差异;同时收集患者的年龄、性别等资料,分析CA724、miR183、lncRNA ZFAS1表达与患者临床病理特征之间的关系。结果观察组血清CA724[(26.79±3.36)U/ml]、miR183相对表达量[(2.57±0.46)]、lncRNA ZFAS1相对表达量[(3.75±0.84)]均高于对照组[(5.20±1.05)U/ml、(1.05±0.21)、(1.23±0.39)],差异有统计学意义(P<0.05)。CA724、miR183、lncRNA ZFAS1表达与结肠癌患者的年龄、性别、体重指数(BMI)、肿瘤大小无关,与患者的临床分期、淋巴结转移、分化程度有关(P<0.05)。结论CA724、miR183、lncRNA ZFAS1在结肠癌患者血清内呈高表达,其表达与患者临床分期、淋巴结转移、分化程度联系紧密,可能参与肿瘤的病情发展,临床需予以高度重视。

CT灌注参数联合血清LRG1、CA19-9在早期胰腺癌诊断中的价值

目的探讨CT灌注参数联合血清富含亮氨酸α-2糖蛋白1(LRG1)、血清癌抗原19-9(CA19-9)在早期胰腺癌诊断中的价值。方法选取2019年6月至2022年6月该院收治的102例早期胰腺癌患者作为胰腺癌组,另选取同期收治的50例肿块型胰腺炎患者作为胰腺炎组。检测并比较两组患者CT灌注参数[血容量(BV)、对比剂平均通过时间(MTT)、血流量(BF)、表面通透性(PS)]及血清LRG1、CA19-9水平;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析CT灌注参数、LRG1、CA19-9单独及联合预测早期胰腺癌的价值。结果胰腺癌组患者BV、BF、PS低于胰腺炎组,而MTT高于胰腺炎组,差异均有统计学意义(P<0.05);胰腺癌组血清LRG1、CA19-9水平显著高于胰腺炎组(P<0.05);ROC曲线分析结果显示,BV、MTT、BF、PS与血清LRG1、CA19-9联合检测早期胰腺癌的曲线下面积(AUC)优于各指标单独检测。结论CT灌注参数、血清LRG1、CA19-9均可作为预测胰腺癌的标志物,且联合检测可提高早期胰腺癌的诊断率。

血清HCgp-39、CA-125水平与子宫内膜癌患者临床病理特征的相关性

目的:分析血清人软骨糖蛋白39(HCgp-39)、糖类抗原(CA)-125水平与子宫内膜癌(EC)患者临床病理特征的相关性。方法:前瞻性选取2018年12月至2020年12月本院收治的84例EC患者作为研究对象,均检测血清HCgp-39、CA-125水平,并经诊刮活检病理检查评估患者临床病理特征。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析血清HCgp-39、CA-125水平对EC患者不同病理特征的预测价值。结果:经诊刮活检病理结果显示,84例患者中国际妇产科协会(FIGO)分期Ⅰ-Ⅱ期72例,Ⅲ-Ⅳ期12例;淋巴结转移11例,无转移73例;Ⅲ-Ⅳ期患者、淋巴结转移患者血清HCgp-39、CA-125水平分别高于Ⅰ-Ⅱ期、淋巴结无转移患者,差异有统计学意义(P<0.05);不同病理类型、组织分化程度患者血清HCgp-39、CA-125水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);绘制ROC曲线,血清HCgp-39、CA-125水平及联合检测预测EC患者Ⅲ-Ⅳ期、淋巴结转移的AUC>0.7,具有较高的预测价值。结论:血清HCgp-39、CA-125水平与EC患者的临床病理特征有关。

不同H9N2亚型禽流感病毒分离株致病力研究及HA抗原性变异分析

【目的】了解近年来中国H9N2亚型禽流感病毒毒力变化和抗原性变异的特点,【方法】对分离于1998—2008年间的25株H9N2亚型禽流感病毒分离株进行了EID50、ELD50、MDT、ICPI、IVPI和8周龄SPF鸡人工感染排毒试验,测定了部分分离株与抗H9N2亚型禽流感病毒Hp参考株HA蛋白单抗2A4和F6的血凝抑制(HI)和中和反应特性,对具有不同反应特性分离株的HA基因进行了序列分析。【结果】不同分离株呈现致病力差异,具多态性特征,3#、12#和14#分离株致病力偏强,能引起部分SPF鸡发病和死亡,人工感染8周龄SPF鸡排毒时间更早,排毒期更长。3#和12#分离株与单抗2A4和F6呈现特殊的反应特性,单抗不能抑制3#和12#的血凝特性,也不能中和病毒感染CEF细胞。HA蛋白氨基酸序列分析表明,3#和12#分离株145位氨基酸发生漂变(S→N),导致与单抗的血凝抑制反应特性丢失,说明该位点(S145)为H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白的一个抗原表位,是血凝抑制抗体结合位点。S145N的漂变导致在145—147位氨基酸多出一个糖基化位点NGT,可能是分离株毒力增强的原因。【结论】本研究结果表明,H9N2亚型禽流感病毒呈现变异趋势,出现了有致病力和抗原性变异流行毒株。S145为H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白的一个抗原表位,但有该位点漂变导致的抗原变异毒株出现,并可逃避免疫作用,对该病的防控提出了新的挑战。

鱼类传染性造血器官坏死病病毒糖蛋白的截短表达及免疫原性检测

目的研究鱼类传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)糖蛋白不同区域对免疫原性的影响。方法本研究通过DNAStar 6.0软件分析糖蛋白跨膜区、疏水性及抗原性后,对其进行截短表达;纯化后的糖蛋白制备兔抗血清,ELISA检测兔抗血清的效价,用间接免疫荧光技术检测纯化后蛋白的免疫原性。结果 SDS-PAGE结果显示,截短糖蛋白相对分子质量(Mr)为40 000,纯化后的糖蛋白经高效液相色谱检测纯度达到90%。利用纯化后的蛋白制备兔抗血清,ELISA结果显示,所制备的兔抗血清与糖蛋白的反应效价为1∶80 000,与IHNV-Sn株细胞培养物的反应效价为1∶20 000;间接免疫荧光结果显示,兔抗血清与IHNV-Sn分离株及参考毒株均能发生特异性的反应。结论实验所表达的糖蛋白与天然的病毒表面糖蛋白具有几乎相同的免疫原性。

两株狂犬病病毒强毒株糖蛋白基因的克隆及潜在抗原表位分析

通过RT-PCR分别获得了狂犬病病毒强毒CVS株、DRV82株糖蛋白基因,进行克隆及测序,并推导出氨基酸序列,与犬用疫苗弱毒株ERA、SRV9、犬源性街毒株CGX及人用疫苗株PG的糖蛋白序列进行比较。结果表明,以上狂犬病病毒毒株间的核苷酸同源性为83.1%～99.2%,氨基酸序列同源性为87.0%～98.5%。经Jameson-Wolf抗原表位优势图分析,CVS株与其他各株相比发现在304位、372位抗原表位优势升高;而DRV82株与其它各株差异不明显。抗原优势变化可能导致狂犬病病毒糖蛋白出现新的潜在抗原位点,为下一步构建不同毒株的狂犬病病毒糖蛋白重组疫苗奠定了基础。

Dot-ELISA的囊虫病免疫诊断价值

本文用纯化糖蛋白抗原对１１６ 例囊虫病人血清进行Ｄｏｔ－ ＥＬＩＳＡ检测，阳性率为９６．８％ （１１２／１１６），３６ 例健康人血清皆为阴性，２７ 例肝吸虫病与包虫病人血清除２例外均为阴性，并以ＩＨＡ和ＥＬＩＳＡ作对照，结果表明Ｄｏｔ－ ＥＬＩＳＡ

禽马立克氏病毒糖蛋白B基因在家蚕中的表达

将马克克氏病毒（Marek'sdiseasevirus，MDV）糖蛋白B（gB）基因克隆入转移载体pBac－PAK8中，得到重组转移载体质粒pBacPAK（gB）。经限制性酶切图谱结合Southernblot分析鉴定表明，gB基因以正确方向插入转移载体，受多角体蛋白基因启动子控制。将此转移载体与经CvnI酶切线性化的亲本病毒Bm－BacPAK6DNA通过脂质体法共转梁家蚕细胞，只有发生重组的病毒才有复制增殖的能力。然后通过蓝白斑筛选、结合点杂交，纯化得到重组的空斑病毒vBM，用该重组病毒接种家蚕5龄幼虫，对表达产物进行SDS－PAGE分析，检测到gB基因在家蚕中高效表达，表达产物的分子量主要为97KD，表达量约为1mg／mL血淋巴。

一种植物由来的糖蛋白(郑氏植物蛋白)——肿瘤相同性抗原的研究

目的 :研究一种植物提取物的肿瘤相同抗原性及其在肿瘤早期诊断上的应用。方法 :采用3H掺入法测定了淋巴细胞和肿瘤细胞增殖反应 ;将人新鲜肿瘤组织块移植于小鼠 ,观察肿瘤在异种动物体内成活情况。瘤细胞DNA含量用流式细胞仪测定。通过凝胶层析及SDS PAGE等方法对该提取液进行了化学成分鉴定。结果 :该植物提取物对恶性肿瘤和癌前病变患者的淋巴细胞增殖有很强的刺激作用 (P <0 0 1) ,但对正常人淋巴细胞无刺激作用。提取物对 70 %以上肿瘤患者的肿瘤细胞增殖有刺激作用。将人新鲜肿瘤组织块移植到经该提取物预处理的幼鼠后 ,成活率达 90 %以上 ,而且可以成功传代 ;未经提取物预处理的小鼠 ,30天后肿瘤组织死亡而被吸收。经初步鉴定 ,该提取物的化学成分为 5 0kD的糖蛋白。结论 :该植物糖蛋白具有肿瘤抗原活性或肿瘤相同抗原性 ,这种特性可应用于肿瘤诊断、治疗和肿瘤疫苗制备等。

伪狂犬病毒gD基因在转基因烟草中的表达

将猪伪狂犬病毒 (pseudorabiesvirus ,PRV)最主要的保护性抗原基因gD完整编码区亚克隆到修饰的植物双元表达载体pBI 35SL中 ,使其置于强启动子CaMV 35S doubleenhancer TEV 5′UTR下游 ,构建的转基因植物双元表达质粒经农杆菌介导转化烟草 .PCR检测叶片筛选阳性植株 ,Southern杂交进一步证实gD已整合到转基因烟草基因组中 .固相酶联斑点试验和Western印迹表明 。

动态监测上皮性卵巢癌患者术后血清HE4及CA125水平的临床价值

目的探讨动态监测上皮性卵巢癌患者术后血清人附睾蛋白4(HE4)及糖蛋白抗原125(CA125)水平的临床价值。方法选择2013年3月至2014年10月间我院妇科诊治的72例上皮性卵巢癌患者为研究对象,均接受手术及术后化疗治疗,分别于术前、术后1 d及化疗6周后检测血清HE4及CA125水平,并比较随访两年时存活组和死亡组患者术前血清HE4及CA125水平。结果术前、术后及化疗后6周比较,患者血清HE4、CA125水平分别为(252.56±56.79)pmol/L和(140.54±39.84)U/m L、(166.42±37.78)pmol/L和(76.41±28.56)U/m L、(140.15±30.46)pmol/L和(55.61±16.56)U/m L,均呈明显下降趋势,差异有统计学意义(P<0.05);存活组血清HE4、CA125水平分别为(228.36±52.70)pmol/L和(126.39±31.38)U/m L,均显著低于死亡组的(385.47±60.38)pmol/L和(179.48±29.42)U/m L,差异有统计学意义(P<0.05)。结论血清HE4与CA125是上皮性卵巢的重要血清肿瘤标记物,动态监测血清HE4及CA125水平变化可以辅助判断患者的治疗效果及预后。

H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白S145N变异株致病性及抗原特性

为确定近年来H9N2亚型禽流感病毒(AIV)HA蛋白S145N点突变对病毒毒力变化和抗原性变异的影响,笔者对从全国不同地区分离的12株H9N2亚型AIV HA蛋白S145N变异株和HP疫苗参考株进行了半数鸡胚感染量(EID50)、半数鸡胚致死量(ELD50)、平均鸡胚致死时间(MDT)、雏鸡脑内致病指数(ICPI)、鸡静脉致病指数(IVPI)和8周龄SPF鸡感染排毒试验,并与抗H9N2亚型AIV HP参考株HA蛋白单抗2A4和F6的血凝抑制(HI)和中和反应特性进行测定。结果发现,H9N2亚型AIV HA蛋白S145N变异株毒力偏强,能引起部分SPF鸡发病和死亡,感染8周龄SPF鸡排毒时间更早,排毒期更长。单抗2A4和F6不能抑制H9N2亚型AIV HA蛋白S145N变异株的血凝特性,也不能中和病毒感染CEF细胞。研究结果表明,H9N2亚型AIV呈现变异趋势,有毒力增强和抗原性变异毒株出现。S145为H9N2亚型AIV HA蛋白的1个抗原位点,是血凝抑制抗体结合的位点,但有该位点漂变导致抗原变异毒株出现,并可逃避免疫作用。这提示该病的防控面临着新的挑战。

猪瘟病毒E2蛋白抗原表位集中区的原核表达及鉴定

为获得猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白抗原表位集中区原核重组目的蛋白,建立CSFV抗原和抗体快速检测方法。通过扩增CSFV E2蛋白抗原表位集中区基因,亚克隆至表达载pET-30a(+),构建重组原核表达载体pET-30a-E2-1,转化至宿主菌Rostta(DE3)后进行诱导表达。SDS-PAGE分析显示,出现与目的蛋白大小一致的蛋白条带,分子质量大小为31ku。对重组蛋白表达条件进行优化,最终获得其诱导表达的最佳温度为18℃,最佳IPTG浓度为0.1mmol/L。目的蛋白以包涵体形式存在,其表达量约占菌体总蛋白含量的46%。Western blot分析显示,目的蛋白不仅能与兔抗CSFV高免血清反应,还可以与载体特异性标签His单抗反应,表明融合蛋白具有良好的抗原性,为CSFV抗原和抗体检测试剂盒的研制奠定了基础。

马立克氏病病毒Rispens株B抗原基因的克隆及其重组鸡痘病毒的构建

马立克氏病病毒（Ｍａｒｅｋ’ｓＤｉｓｅａｓｅＶｉｒｕｓ，ＭＤＶ）是马立克氏病（ＭＤ）的病原，是第一个能用实验证明具有致肿瘤作用的疱疹病毒，也是研究病毒性肿瘤特别是疱疹病毒肿瘤的理想的实验模型。ＭＤ还是第一个广泛使用疫苗预防的肿瘤性病毒病。应用免疫扩散...

一种牛精子膜蛋白的纯化及在生殖中的作用

牛精子经 φ =0 .5%的NP 4 0洗脱后 ,先经伴刀豆凝集素ConA(ConcanavalinA)亲和层析分离 ,经SDS PAGE电泳 ,得到相对分子质量Mr 分别为 32× 10 3,2 6× 10 3,2 0× 10 3的 3种与ConA结合的糖蛋白CBG(ConAbindingglycoprotein) .再将亲和层析分离所得蛋白成分经葡聚糖凝胶 (SephadexG 10 0 )层析柱进一步纯化 ,得到Mr 为 2 6× 10 3的单一成分 .将 2 6× 10 3CBG免疫兔后制得抗血清 ,经PAP免疫组织化学染色发现 :2 6× 10 3的CBG抗原主要分布于牛精子的顶体区 ,同时鼠精子表面也有同样分布 ,说明 2 6× 10 3的CBG抗原具有种间保守性 .后将 2 6× 10 3的CBG免疫雌鼠 ,发现其产仔率由对照组的 (8.5± 2 .6 )只 (n =12 )减少到 (4 .3± 1.8)只 (n =2 4 ) ,经t检验 (不配对 ,单尾 ) ,二者间差异极显著 (p <0 .0 0 1) .本实验结果表明 :2 6× 10 3的CBG在精卵结合中可能发挥重要作用 ,并有可能开发为人工避孕疫苗 .

马立克氏病病毒囊膜糖蛋白B抗原Ⅰ型特异性和群共同性决定簇的单克隆抗体

用能表达马立克氏病病毒（ＭＤＶ）糖蛋白Ｂ（ｇＢ）的重组杆状病毒感染的Ｓｆ９细胞免疫小鼠，制备针对ＭＤＶｇＢ的单克隆抗体。以Ⅰ型马立克氏病病毒ＧＡ株感染的鸡胚成纤维细胞作为检测抗原，同时以免疫荧光试验（ＩＦＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）来筛选杂交瘤细胞，结果获得了ＩＦＡ和ＥＬＩＳＡ均为阳性的２株单克隆抗体细胞株，定名为ＢＡ４和ＢＤ８。在ＩＦＡ和免疫沉淀试验中，单抗ＢＤ８与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型ＭＤＶ均呈阳性反应；单抗ＢＡ４只对Ⅰ型ＭＤＶ（包括ＣＶＩ９８８疫苗株）呈阳性反应。免疫沉淀反应进一步确证２株单抗识别的是ＭＤＶ糖蛋白Ｂ抗原。

马立克氏病病毒Rispens株和RL株B抗原基因的分离、克隆及初步酶切分析

将马立克氏病病毒（ＭＤＶ）血清Ⅰ型Ｒｉｓｐｅｎｓ株和ＲＬ株分别接种于原代鸡胚成纤维细胞，待出现８０％以上细胞病变后收获，经蛋白酶Ｋ消化，酚、氯仿抽提，乙醇沉淀细胞和病毒的总ＤＮＡ（ｔｏｔａｌＤＮＡ）。以此为模板，根据已发表的Ｂ抗原基因核苷酸序列设计１对引物，通过聚合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增出１条约２．８５ｋｂ的特异性条带，斑点杂交证实其为Ｂ抗原基因。双酶切消化后，克隆到质粒ｐＵＣ１９中。酶切分析表明，在这２株病毒的Ｂ抗原基因上，ＨｉｎｄⅢ、ＥｃｏＲＶ、ＢａｍＨＩ、ＥｃｏＲＩ的酶切位点分布与超强毒ＲＢＩＢ株、标准强毒ＧＡ株的完全相同。

放射免疫沉淀试验鉴定单纯疱疹病毒糖蛋白C

用放射免疫沉淀试验和单纯疱疹病毒1型、2型(HSV—1/HSV-2)型间重组株作物理谱图的方法.鉴定出抗HSV的单克隆抗体(McAb) 1A12、Mad-2、2D11、CM-D3、2A8和1C_4的靶抗原是一组分子量在105～130Ka之间的糖蛋白,其编码基因定位于长单一序列(UL)上,在0.536～0.682遗传单位之间,与gC的编码基因部分重叠。故认为这些McAbs的靶抗原为gC,其中,Mad-2和CM-D3分别为HSV-1和HSV-2型特异性,其靶抗原分别为gC-1和gC-2。ELISA阻断试验结果表明,4株型共同性McAbs 1A12、2D11、2A8和1C4.抗gC上4个独立的抗原位点。

猪瘟病毒基因2型流行毒株和疫苗C株抗血清与相应E2蛋白交叉免疫反应性分析

为研究猪瘟病毒(CSFV)2.1基因亚型病毒株和疫苗C株E2蛋白与相应抗血清的免疫反应性差异,本研究在分析4株CSFV浙江流行株(QZ-14、JH-14、QZ-07和HZ-08)与疫苗C株E2变异程度的基础上,制备了流行病毒株和疫苗C株全病毒猪抗血清以及针对流行株E2的单克隆抗体(MAb)4F4,比较了它们与同源株和异源株重组杆状病毒表达的E2蛋白的亲和性。结果显示,4株浙江分离株中2株(QZ-14和JH-14)属于亚型2.1d,另2株(QZ-07和HZ-08)为亚型2.1b,它们与C株E2的核苷酸同源性在82%~84%;间接免疫荧光鉴定显示MAb 4F4能够识别4株流行株,但不与C株反应;接种流行株的动物均出现不同程度临床症状;ELISA分析显示疫苗C株血清与流行株E2蛋白的反应性约为C株E2蛋白的27%~49%,2株流行株感染血清与C株E2蛋白反应性约为流行株E2蛋白的34%~50%,免疫印迹分析显示类似结果。以上结果表明CSFV基因2型流行株与疫苗C株E2蛋白的差异显著影响其与相应抗血清的交叉免疫反应性,这一现象是否与C株猪瘟疫苗免疫保护效果下降有关还有待于进一步研究。