胀果甘草(Glaycyrrhiza inflat Bat)组织培养物的有效成分分析

对胀果甘草(GlaycyrrhizainflatBat)的愈伤组织培养及毛状根农杆菌介导的遗传转化进行了研究,并对培养物进行了甘草有效成分分析。结果表明,培养的愈伤组织及毛状根的薄层层析图谱与甘草药材的非常接近,其化学成分有相当的相似;在愈伤组织及毛状根中均含有甘草的主要有效成分甘草酸和甘草次酸;不同来源的愈伤组织中甘草酸的含量不同,其中以根来源的愈伤组织中甘草酸含量最高;愈伤组织中各种氨基酸的含量均高于甘草药材。

多基原甘草质量标准探讨

目的分析多基原甘草质量现状及存在的问题,探索制约因素并提出解决方案。方法通过和企业座谈、实地调研、文献查询及甘草质量标准研究工作,分析当前甘草产业现状、药用标准问题及发展契机。结果以《中华人民共和国药典》(2020年版)含量测定标准,我国胀果甘草、光果甘草中甘草苷含量不合格率偏高,但3种基原的甘草存在其他具有药理作用的黄酮类化学成分,仅以甘草苷作为质量控制指标评价不够全面。结论建议进一步提高和完善《中华人民共和国药典》中胀果甘草和光果甘草质量标准,采用多种黄酮类成分作为甘草质量评价指标,进而推进我国甘草种植业发展。

发根农杆菌转化胀果甘草的研究

利用发根农杆菌R1601对药用植物胀果甘草(GlycyrrhizainflatBat)进行转化,诱导其产生发根.在发根诱导过程中,分别用不同菌液浓度、不同浸染时间对胀果甘草子叶、胚轴进行转化处理,统计、比较各条件下的发根率,为发根进行液体悬浮培养以及随后的规模性培养提供数据基础.结果表明,用稀释2倍的菌液浸染子叶8min时,发根诱导率最高,为56.49%.

四种前体对胀果甘草细胞悬浮培养生产甘草黄酮的调控效果评价

在胀果甘草细胞悬浮体系中加入苯丙氨酸、酪氨酸、肉桂酸和乙酸钠来研究前体对甘草细胞生产甘草黄酮的影响。结果显示,4种前体在合适的浓度下对细胞的生长没有明显的抑制作用,而且均能促进细胞内甘草黄酮的生物合成,但高浓度的肉桂酸对细胞的生长有一定的抑制作用。苯丙氨酸的最佳添加浓度为20 mg/L,酪氨酸、肉桂酸、乙酸钠的最佳添加浓度都是5 mg/L。此时,均可使培养体系的甘草黄酮产量高达100 mg/L以上,其中酪氨酸的添加使得产量高达对照的1.43倍。苯丙氨酸、肉桂酸和乙酸钠3种前体的添加时间均以第10天为宜,酪氨酸添加时间以第5天为最佳。而且,在添加苯丙氨酸和乙酸钠后的第3天收获细胞,此时细胞的生物量和甘草黄酮产量最大。此外,苯丙氨酸、乙酸钠的添加可以增加黄酮合成的关键酶之一——苯丙氨酸裂解酶的活性。酪氨酸对苯丙氨酸裂解酶影响不大,而肉桂酸的添加却导致其活性显著降低。

胀果甘草悬浮细胞中黄酮类化合物HPLC分析

用HPLC法建立野生胀果甘草与悬浮培养的胀果甘草细胞中黄酮类化合物的HPLC指纹图谱,并采用LC-MS技术推测HPLC共有峰中主要指纹峰的化学结构。采用Agilent EclipseXDB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈:0.1%冰醋酸,梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长310 nm。Agilent1100LC/MSD液质联用系统,ESI源。在设定的色谱条件下,分别得到的野生甘草与甘草细胞中黄酮类化合物指纹图谱,用中国药典相似度评价系统软件进行评价相似度为75.2%,根据LC-MS结果推断了HPLC共有峰中2个主要指纹峰分别为甘草苷和甘草素。结果表明野生甘草中绝大部分黄酮类化合物在甘草细胞中均有合成,使利用细胞悬浮培养生产的甘草黄酮类化合物成为可行的途径。

盐胁迫对胀果甘草种子萌发和幼苗生理特性的影响

[目的]研究盐胁迫对胀果甘草种子萌发和幼苗生理特性的影响。[方法]以胀果甘草种子为材料,分别采用浓度为0、50、100、200和300 mmol/L的NaCl和Na2SO4以及浓度分别为0、25、50、75和100 mmol/L的NaHCO3进行处理,研究盐胁迫对胀果甘草种子萌发和幼苗生理特性的影响。[结果]3种盐胁迫对胀果甘草的种子萌发率、萌发指数和活力指数的影响差异明显,对胀果甘草种子萌发影响的强弱顺序为:NaHCO3>Na2SO4>NaCl。在3种盐胁迫下,幼苗子叶、胚根脯氨酸(Pro)、丙二醛(MDA)和可溶性蛋白含量随盐浓度的升高而升高;幼苗子叶SOD活性随盐浓度的升高一直处于下降趋势;胚根SOD活性随盐浓度升高先上升后下降。[结论]3种盐胁迫对胀果甘草种子萌发和幼苗生理特性均有明显的影响。

甘草内生真菌多样性及群落结构

以新疆塔里木盆地的光果甘草(Glycyrrhiza glabra)和胀果甘草(G.inflate)为研究对象,采用变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术研究甘草内生真菌的多样性及群落结构。结果显示,光果甘草和胀果甘草间及同一种类不同组织间的内生真菌多样性和群落结构均存在明显差异。其中,胀果甘草根(B1)的内生真菌多样性最丰富,光果甘草果(L4)的内生真菌多样性最差。对DGGE条带进行回收测序,共获得25条序列,归于枝顶孢属(Acremonium)、绿僵菌属(Metarhizium)、绿僵虫草属(Metacordyceps)、镰刀菌属(Fusarium)、链格孢属(Alternaria)、枝孢属(Cladosporium)、锤舌菌属(Leotiomycetes)、链格孢属(Alternaria)、帚枝霉属(Sarocladium)、假裸囊菌属(Pseudogymnoascus)、曲霉属(Aspergillus)11个真菌属,其中链格孢属为优势菌属,占总数的32%。甘草根、茎、叶、果、皮组织的内生真菌存在丰富的多样性,其中根与茎组织多样性最丰富。研究结果表明,新疆塔里木盆地药用植物甘草蕴藏着丰富的内生真菌资源,可作为一种较理想的分离内生真菌的植物来源。

新疆胀果甘草内生菌的分离和鉴定

对采自新疆的健康野生胀果甘草不同组织中的内生菌进行分离,确立了分离的条件为5%NaClO4浸5min,分离纯化得到149株细菌和2种真菌。通过形态学观察和革兰氏染色,细菌中芽孢杆菌为93株,杆状菌56株,使用法国梅里埃细菌自动鉴定仪对其进行鉴定,得到鉴定结果的细菌属于13个属,真菌显微形态鉴定属于Penicillium青霉菌属和Fusarium镰刀菌属。

胀果甘草化学成分的研究(Ⅲ)

继前文工作,本文报道从胀果甘草(Glycyrrhiza inflata Bat)根及根茎用95％乙醇渗滤后的提取部分中获得的另外五个化合物的结构鉴定。经理化性质及波谱分析,分别鉴定为胡萝卜甙(Daucosterol)、甘草查尔酮甲(Licochalcone A)、β-谷甾醇(β-Sitosterol),异芒柄花甙(Isoononin)和4＇,7一二羟基黄酮(4＇,7-Dihydroxy-flavone)。其中胡萝卜甙和异芒柄花甙为首次从该植物中获得。药理实验表明,甘草查尔酮甲对H_2O_2诱异的溶血有极好的抑制作用(97.3％),但甘草甙在三个体外氧化体系中都没有明显的活性。

高速逆流色谱法分离纯化甘草查尔酮甲和胀果香豆素甲

采用高速逆流色谱法,从胀果甘草的乙醇粗提物中分离纯化甘草查尔酮甲和胀果香豆素甲。甘草查尔酮甲和胀果香豆素甲的结构用1H-NMR、13C-NMR、UV、FTIR和EI-MS鉴定。纯度用HPLC方法测定,采用归一化计算。分离采用的溶剂系统为正己烷-氯仿-甲醇-水(5:6:3:2),上相做固定相,下相做流动相,流动相流速为1.8 mL／min,甘草查尔酮甲和胀果香豆素甲的纯度分别为95.0％和98.8％。纯化采用的溶剂系统为正己烷-氯仿-甲醇-水(1.5:6:3:2),上相做固定相,下相做流动相,流动相流速为1.5 mL／min。纯化后甘草查尔酮甲和胀果香豆素甲的纯度分别为99.1％和99.6％。该方法操作简单,费用低廉,重现性好,可做为高纯度甘草查尔酮甲和胀果香豆素甲化学对照品的制备分离方法。

甘遂半夏汤加减甘遂及不同品种甘草对腹水模型大鼠肝脏CYP450m RNA的影响

目的观察含不同品种甘草的甘遂半夏汤加减甘遂甘草反药组合对腹水模型大鼠肝脏CYP450 mRNA的影响。方法采用Walker-256细胞制造癌性腹水模型,将Wistar大鼠按体质量随机分为空白组、模型组、阳性对照组、全方炙甘草组、全方炙光果甘草组、全方炙胀果甘草组、去遂炙甘草组、去遂炙光果甘草组、去遂炙胀果甘草组、去炙甘草组、去炙甘草醋甘遂组,共计11组。空白组和模型组灌胃蒸馏水,其余各给药组灌胃相应药物。给药11天后,摘取肝脏,液氮保存,进行PCR实验。结果在CYP2E1 mRNA表达方面,全方炙甘草组、全方炙胀果甘草表达下调,且优于全方去掉一味或两味反药。三个甘草品种的甘遂半夏汤的CYP3A1 mRNA、CYP3A2 mRNA表达上调,且优于全方去掉一味或两味反药。结论 (1)全方炙甘草组、全方炙胀果甘草组在CYP450表达方面表现出一定的药效作用,其中全方炙甘草组优于全方炙胀果甘草,且均优于全方去掉一味或两味反药组。(2)全方炙光果甘草组则未表现出一定的药效作用,但也未表现出毒性作用,弱于去掉一味或两味反药。

胀果甘草中皂甙Ⅰ和Ⅱ的结构鉴定

胀果甘草中皂甙Ⅰ和Ⅱ的结构鉴定邹坤，赵玉英，张如意（北京医科大学植化教研室北京１０００８３）继前文工作（１，２，３），我们利用大孔吸附树脂初步分离，ＨＰＬＣ进一步分离，从胀果甘草（Ｇｌｙｃｙ－ｒｒｈｉｚａｉｎｆｌａｔａＢａｔ）根及根茎的１０％乙醇提取...

胀果甘草多糖的分离纯化及其理化性质

目的对新疆地产胀果甘草Glycyrrhiza inflataBat.中获得的一种水溶性多糖(GIP-2)进行分离纯化,并测定其部分理化参数。方法采用脱脂、回流提取、乙醇沉淀、Sevag法除蛋白,从胀果甘草药材中提取粗多糖,透析后经DEAE-52离子交换层析和Sepharose CL-6B、Sephadex G-50凝胶柱层析分离纯化得到一种水溶性多糖(GIP-2);UV及IR法检测其性质;自动旋光仪测定旋光度;高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)分析其纯度和分子量范围;完全酸水解法鉴定多糖的单糖组分。结果胀果甘草多糖GIP-2为黄白色粉末,无甜味,易溶于水;UV检测192 nm处有明显吸收峰,260、280 nm处均无吸收峰,证明被测物为多糖,且不含核酸及蛋白质;IR分析结果显示,在3393、2932、1616、1423、1101 cm-1处表现为典型的多糖吸收峰;GIP-2分子量>2000 kDa,主要由葡萄糖、阿拉伯糖和半乳糖组成,其摩尔比为3.3:11.7:1.0。结论提取分离所得胀果甘草多糖GIP-2为单一、纯净的多糖。

甘遂半夏汤加减甘遂及不同品种甘草对腹水模型大鼠心肝肾功能的影响

目的通过分析含不同品种甘草的甘遂半夏汤加减反药组合对腹水模型大鼠的心肝肾脏功能指标的变化,探讨甘草品种对甘遂甘草配伍"反"或"不反"的影响。方法 Wistar大鼠220只随机分成11组,空白组、模型组、阳性药组、全方炙甘草组、全方胀果组、全方光果组、去遂炙甘草组、去遂胀果组、去遂光果组、去草组、去草遂组,除空白组和模型组外连续给药10天,然后腹主动脉取血,离心,检测心肝肾功能相关指标。分析方法选择方差分析,方差齐采用LSD方法,方差不齐采用Dunnet T3分析方法。结果 (1)在肝功能中TP和ALB合成方面,全方(炙胀果甘草)组的药效相对优于全方(炙光果甘草)组和全方(炙甘草)组,且三个全方组去掉一味反药或两味反药组在促进由于Walker-256细胞造成的大鼠肝脏ALB和TP合成降低方面的疗效优于三个全方组。(2)含甘遂与不同品种甘草反药组合的甘遂半夏汤全方在对Walker-256细胞造成的大鼠心功能、肾功能和肝功能中AST的含量、ALT的含量、AST/ALT比值和ALP含量变化方面无明显影响。结论甘草、光果甘草和胀果甘草这三个不同品种的甘草对甘遂甘草反药组合在心功能、肾功能和肝功能中AST的含量、ALT的含量、AST/ALT比值和ALP含量方面无明显影响,但在改善由于Walker-256细胞造成的大鼠肝脏蛋白合成异常方面,胀果甘草优于光果甘草和甘草。

胀果甘草细胞的悬浮培养

切取胀果甘草(Glycyrrhiza inflate)无菌苗的子叶、下胚轴和根段外植体进行愈伤组织的诱导和悬浮细胞培养,建立了胀果甘草细胞悬浮培养体系,测定了悬浮培养细胞的生长曲线,并且研究了接种量、条件培养和激素组合对胀果甘草悬浮细胞生长的影响.结果表明子叶来源的愈伤组织最适合作为胀果甘草细胞悬浮培养的起始培养物;悬浮培养的最佳接种量为35 g/L;条件培养基的最佳用量为总培养体积的1/3;最适合胀果甘草悬浮细胞生长的培养基是附加了NAA 1.0 mg/L+KT 0.5 mg/L激素组合的MS培养基.

响应面法优化新疆胀果甘草多糖的提取工艺

研究以乙醇为提取剂从新疆胀果甘草中提取多糖的工艺。在单因素实验的基础上,运用Box-Behnken中心组合实验和响应面法考察了提取温度、提取时间和料液比3个因素对甘草多糖提取率的影响,并优化了提取工艺。结果表明最佳工艺条件为:温度93℃,时间83min,料液比为21∶1(mg∶L)。在此条件下胀果甘草多糖提取率的预测值为10.59%,验证实验值为10.48%,两者相近,说明响应面法优化胀果甘草多糖提取的工艺可行。

胀果甘草原生境土壤盐分特征分析

通过野外调查采样和土样化学测定,分析胀果甘草原生境下土壤盐分的特征。结果表明:研究区土壤盐分普遍较高且表聚作用明显,土壤表层0～10 cm土层盐分均值高达32.08 g/kg,属典型的强度盐渍化土;土壤盐分组成中,含阳离子Ca2+、Na+、Mg2+、K+和阴离子Cl-、SO24、HCO3-,不含CO32-,土壤盐分的特征因子为Ca2+、C1-、SO42-、Na+,其盐渍类型主要为硫酸盐-氯化物型,重碳酸盐是土壤盐分的次要成分;该生境土壤中在整个垂直剖面上Ca2+的含量丰富,属典型钙质土。

胀果甘草酸性多糖的分离纯化、结构分析及免疫活性测定

目的分离纯化胀果甘草多糖,并对得到的3种酸性多糖组分结构及免疫活性进行分析。方法采用水提醇沉法提取胀果甘草粗多糖,经离子交换柱层析和凝胶柱层析分离纯化,高效凝胶渗透色谱法(high performance gel permeation chromatography,HPGPC)、红外光谱法(infrared spectroscopy,IR)、气相色谱法(gas chromatography,GC)和气相-质谱法(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)分析其结构,采用H^3-胸腺嘧啶核苷掺入法(H^3-Td R)测定其对小鼠淋巴细胞增殖的影响。结果胀果甘草根及根茎经水提醇沉、离子交换柱层析和凝胶柱层析分离纯化后,得到3种相对分子量大于2.0×10~6 Da的均一酸性多糖组分Gi P-B1、Gi P-C1和Gi P-D1。结构和免疫活性的研究结果表明,这3种多糖组分均是由阿拉伯糖(Ara)、鼠李糖(Rha)、半乳糖(Gal)、半乳糖醛酸(Gal A)以不同摩尔比组成的酸性杂多糖,多糖的主链均由1,4-Galp A和1,2-Rhap残基构成,支链由1,5-连接的Araf和1,3-连接的Galp构成,支链分支点位于Rhap残基的O-4位。3种多糖在体外对小鼠脾细胞增殖均有促进作用,与空白对照组均有显著性差异(P<0.05),其中糖醛酸含量最高的Gi P-D1促脾细胞增殖作用最高。结论从胀果甘草中分离纯化的3种酸性多糖为均一组分,具有一定的免疫增强活性。

胀果香豆素甲的结构鉴定

胀果香豆素甲的结构鉴定邹坤，张如意，杨宪赋（北京医科大学植化教研室北京１０００８３）胀果甘草（ＧｌｙｃｇｒｒｈｉｚａｉｎｆｌａｔａＢａｔ）产于我国西北部，已收载于中国药典加以利用。其中的一些化学成分有很好的抗氧化活性（１），我们从其根茎的９５％乙醇提...

新疆胀果甘草多糖对小鼠免疫功能促进作用研究

研究胀果甘草多糖对小鼠免疫功能的调节作用。用环磷酰胺(CTX)饲喂小鼠制造免疫功能抑制的动物模型,以生理盐水作为正常对照。给模型小鼠分别饲喂低、中、高剂量多糖溶液,连续7 d,饲喂多糖溶液质量分数分别为80、160、320 mg/kg。通过计算胸腺指数和脾脏指数,检测腹腔巨噬细胞吞噬活性和血清溶血素等实验,对胀果甘草多糖的免疫活性进行研究。3项免疫指标均显示,胀果甘草多糖对小鼠的特异性免疫、非特异性免疫有正向调节作用,且有剂量效果关系。