GnRH-Ⅱ对子宫内膜异位症患者离体培养的子宫内膜间质细胞分泌VEGF的影响

目的:检测体外培养的子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)患者在位和异位内膜间质细胞分泌的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的浓度,并观察不同浓度的II型促性腺激素释放激素(GnRH-Ⅱ)对在位和异位内膜间质细胞分泌VEGF的影响。方法:分别给予原代培养的EMs患者在位与异位子宫内膜间质细胞不同浓度(1×10-10～1×10-6mol/L)的GnRH-Ⅱ处理,不加GnRH-Ⅱ组作为对照,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养液中VEGF浓度并进行比较。结果:体外培养的EMs患者异位子宫内膜间质细胞分泌VEGF,培养48 h后分泌量与在位子宫内膜间质细胞比较差异无统计学意义(P(0.05)。1×10-10～1×10-6mol/L的GnRH-Ⅱ可呈浓度依赖性地抑制体外培养的在位和异位子宫内膜间质细胞分泌VEGF(P<0.01),且对异位子宫内膜间质细胞的抑制作用强于在位(P<0.01)。结论:EMs患者的异位子宫内膜间质细胞分泌VEGF的能力与在位子宫内膜的相近,这对EMs的形成和发展可能起重要作用。GnRH-Ⅱ对EMs患者体外培养的异位子宫内膜间质细胞VEGF的分泌有明显的抑制作用,且作用明显强于对在位内膜间质细胞的。

斑马鱼GnRH-Ⅱ基因的生物信息学分析

从斑马鱼脑组织提取总RNA,应用RT-PCR方法克隆GnRH-ⅡcDNA,其长度为589bp,编码的GnRH-Ⅱ前体为86个氨基酸残基。利用生物信息学方法对克隆得到的斑马鱼GnRH-Ⅱ基因序列、编码蛋白及其理化性质进行分析,并预测其编码蛋白的结构与功能,构建其同源基因的系统进化树。

GnRH-PE Ⅱ-luffinS重组嵌合毒素的制备与细胞毒性检测

目的:制备以Ⅰ型促性腺激素释放激素(GnRH Ⅰ)为导向部分,以绿脓杆菌外毒素的结构域Ⅱ(PEⅡ)为转膜区,以丝瓜毒素luffinS2为毒性部分的重组嵌合毒素GnRH-PEⅡ-luffinS,体外实验检测其对肿瘤细胞的杀伤作用。方法:重叠PCR法扩增GnRH-PEⅡ-luffinS的基因,克隆至表达载体pET32a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),挑取阳性克隆诱导表达,产物用Ni-NTA亲和层析柱纯化。纯化蛋白经重组肠激酶(rEK)切割去除Trx融合蛋白,XTT法检测重组毒素对HeLa,A549,HepG-2,SP2/0和鸡胚成纤维细胞(CEF)的体外细胞毒作用。结果:成功构建了GnRH-PEⅡ-luffinS的表达质粒,并在大肠杆菌中获得表达,纯化后的纯度为94%。GnRH-PEⅡ-luffinS对HeLa,A549,HepG-2和SP2/0的IC50分别为13.50μg/ml,13.74μg/ml,16.79μg/ml和26.07μg/ml,而对CEF无作用。结论:重组嵌合毒素GnRH-PEⅡ-luffinS对肿瘤细胞有较强的杀伤作用。

GnRH Ⅱ与GnRH Ⅰ对子宫内膜异位症患者间质细胞分泌VEGF作用的比较(英文)

目的:测定GnRH Ⅱ与GnRH Ⅰ对子宫内膜异位症(EMs)患者离体培养子宫内膜间质细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)的影响,探讨GnRH Ⅱ对EMs患者可能的作用。方法:给予原代培养的EMs患者在位及异位子宫内膜间质细胞不同浓度的GnRH Ⅱ,GnRH Ⅰ类似物(戈舍瑞林,goserelin)处理,同时设对照组(不加GnRH),采用酶联免疫吸附法(ELⅠSA)测定培养液中VEGF浓度,并进行比较。结果:EMs患者离体培养的异位子宫内膜间质细胞经48 h培养,能分泌VEGF,分泌量与在位子宫内膜间质细胞的相近,两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。不同浓度的GnRH Ⅱ对EMs患者离体培养的在位和异位子宫内膜间质细胞VEGF的分泌有明显的抑制作用,呈剂量依赖性(P<0.05),且较GnRH Ⅰ类似物(戈舍瑞林)的作用更强(P<0.05)。不同浓度的GnRH Ⅱ对EMs患者离体培养的异位子宫内膜间质细胞VEGF分泌的抑制作用明显强于在位(P<0.05)。结论:EMs患者的异位子宫内膜间质细胞具有分泌VEGF的功能,分泌量与在位子宫内膜的相近,这对EMs的形成和发展可能起重要作用。Gn-RH Ⅱ呈剂量依赖性地抑制异位内膜间质细胞分泌VEGF,其抑制作用明显强于在位,且GnRH Ⅱ明显强于GnRH Ⅰ,为寻找EMs抗血管形成方面的新药治疗提供了新的依据。

同源GnRH对无血清培养鸡卵泡颗粒细胞孕酮分泌的作用

选用产蛋规律的鸡，在一个产蛋序列中，排卵前１～３ｈ剖腹收集各级卵泡，分离颗粒层建立卵泡颗粒细胞无血清单层贴壁培养模型。在此基础上，用不同剂量鸡促性腺激素释放激素（ＧｎＲＨ－Ⅱ）单独处理或与羊ＬＨ（ｏＬＨ）协同处理，并使用ＧｎＲＨ－Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ（ＧＡ），以观察ＧｎＲＨ－Ⅱ对颗粒细胞孕酮分泌的影响。研究获得了以下结果：（１）ＧｎＲＨ－Ⅱ对鸡不同卵抱（Ｆ１、Ｆ３、Ｆ５）颗粒细胞孕酮分泌均有促进作用，并呈现剂量－反应关系；（２）ＧｎＲＨ－对ｏＬＨ促鸡卵泡颗粒细胞孕酮的分泌有明显的协同作用；（３）ＧｎＲＨ拮抗物使ＧｎＲＨ－Ⅱ的促卵泡颗粒细胞孕酮分泌作用受到阻断。

体外无血清培养的鸡卵泡细胞GnRH样肽分泌的研究

本实验通过12 5Ⅰ标记的鸡GnRH与同源血清 (抗体 )反应 ,建立了鸡GnRH放射免疫分析法 (RIA) ,并用以检测体外无血清培养的鸡卵泡细胞 ,证明卵泡膜细胞 (TC)和颗粒细胞 (GC)培养液中均存在GnRH Ⅱ样肽物质。并发现TC细胞培养液中的GnRH Ⅱ样肽含量在 72h内随培养时间加长而增多 ,而GC细胞培养液中GnRH样肽含量变化不明显。实验结果表明鸡卵泡细胞能产生GnRH

同源GnRH对鸡卵泡颗粒细胞增殖的影响

在建立鸡卵泡颗粒细胞无血清单层贴壁培养模型的基础上,用鸡促性腺激素释放激素(GnRH-Ⅱ)单独处理,或同时加入 GnRH 拮抗物(GA)或与羊 LH(oLH)协同处理,继续培养48 h 之后,用胰蛋白酶分别消化成单个细胞然后计数。获得结果是:GnRH-Ⅱ能刺激颗粒细胞增殖,同时加入 GA 能阻断 GnRH-Ⅱ的效果;单独加入 oLH 处理能刺激细胞增殖,在加入GnRH-Ⅱ,同时再加入 oLH 处理,其细胞增殖数明显低于单独用 oLH 处理的细胞增殖数目。

Ⅱ型GnRH及其受体系统研究进展

近年来,下丘脑GnRH(GnRHⅠ)的类似物已在性激素依赖性疾病和生殖辅助治疗上得到广泛应用,而对Ⅱ型GnRH及其受体系统的研究则刚刚起步。Ⅱ型GnRH在进化过程中保守了5亿年,可能在性激素分泌、生殖行为调节以及性器官功能调节方面具有重要作用,很可能是最早形成的调节生殖的GnRH。克隆Ⅱ型GnRH受体将有助于阐明这一系统的功能并促进临床应用,而阐明人类Ⅱ型GnRH受体的功能则具有更重要的意义。本文就Ⅱ型GnRH及其受体的结构、分布、信号转导途径及其可能功能作一综述。