半滑舌鳎(Cynoglossussemilaevis)gnrh2基因克隆、组织分布及卵巢成熟过程中表达分析

为了研究下丘脑神经肽促性腺激素释放激素(Gonadotropin-releasing hormone 2,GnRH2)在半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)卵巢成熟过程中的生理作用,本研究通过RT-PCR及RACE方法获得了半滑舌鳎GnRH2全长cDNA序列;通过实时荧光定量PCR(qPCR)对gnrh2 mRNA的组织分布以及卵巢成熟过程中的时空表达特性进行了分析。结果显示,半滑舌鳎GnRH2全长c DNA序列为538 bp(不包括polyA尾),其中,5'非编码区(Untranslated region,UTR)为154 bp,3'UTR为126 bp,开放阅读框(Open reading frame,ORF)为258 bp,编码85个氨基酸的前体多肽,其分子量及等电点分别为9.69 k Da和8.55。GnRH2前体多肽由信号肽、GnRH2十肽、酶切位点(GKR)以及GnRH相关肽共4部分组成。序列比对分析发现,GnRH2在鱼类中同源性极高,尤其是十肽(QHWSHGWYPG)在所有硬骨鱼类中完全相同。半滑舌鳎GnRH2与鲈形目同源性最高(89.41%–90.59%),其次为鲽形目、鲑形目和鲀形目(78.82%–85.88%),与鲤形目同源性最低(61.18%–71.76%)。gnrh2 mRNA主要在脑中表达,在垂体及其他外周组织中表达量极低。此外,组织学分析显示,半滑舌鳎卵巢发育共分为5个时期(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ期)。在卵巢成熟过程中,脑gnrh2 mRNA表达量在卵黄生成期(Ⅲ期)显著性增加,达到峰值;随后表达量急剧下降,在成熟期(Ⅴ期)达到最小值;在排卵后期(Ⅵ期)又显著性增加。然而,在卵巢成熟过程中,垂体gnrh2 mRNA表达量在卵黄生成后期(Ⅳ期)显著性降低,随后在成熟期(Ⅴ期)有所增加,但在排卵后期(Ⅵ期)又急剧下降。上述研究结果表明,脑GnRH2可能参与了半滑舌鳎卵巢发育过程。

威宁鸡GnRH1、GnRH2基因SNPs鉴定及其与蛋品质性状的关联研究

为系统挖掘鸡促性腺激素释放激素1(Gonadotropin Releasing Hormone1,GnRH1)、促性腺激素释放激素2(Gonadotropin Releasing Hormone2,GnRH2)基因多态性位点,探析GnRH1、GnRH2基因变异对鸡蛋品质性状的遗传效应,本实验以威宁鸡为素材,采用直接测序技术对GnRH1、GnRH2基因单核苷酸多态性(SNPs)进行鉴定并分析。结果表明:威宁鸡GnRH1基因并未发现SNPs突变位点;GnRH2基因SNPs位点分别为外显子1的g.11 G>C错义突变,精氨酸变为脯氨酸,内含子1的g.237 T>C突变和g.259 T>C突变,内含子2的g.1191 A>G突变,内含子4的g.3535 G>T突变;外显子6的g.4090 T>C错义突变,苯丙氨酸变为丝氨酸;6个突变位点中g.4090 T>C位点为低度多态,其余均为中度多态;SNPS位点卡方(χ^(2))结果显示,g.1191 A>G和g.3535 G>T位点偏离Hardy-Weinberg平衡(P<0.05)。关联性分析结果表明,g.259 T>C位点和g.1191 A>G位点分别对威宁鸡的蛋壳厚度、蛋壳强度影响达到显著水平,两位点的TT基因型有利于改善蛋壳厚度,AG基因型有利于改善蛋壳强度。因此,GnRH2基因g.259 T>C位点和g.1191 A>G位点有望作为威宁鸡蛋品质性状相关的关键位点和分子标记。