β3GnT2、β3GnT8真核表达载体的构建及胃癌AGS、胶质瘤U251细胞株中β3GnT8 cDNA SNP的分布

目的β3GriT2和β3GriT8的克隆及真核表达载体的构建。方法RT-PCR法检测β3GnT2、β3GnT8在胃癌、胶质瘤、乳腺癌三类癌细胞株中的表达；PCR扩增带酶切位点β3GnT2、β3GnT8全长编码片段并构建真核表达载体βEGFP-C1-B3GnT2，βEGFP-C1-β3GnT8。结果β3GnT2、β3GnT8在上述癌细胞株中均有表达；带酶切位点β3GnT2、β3GnT8全长编码片段成功扩增并连接至pEGFP-C1载体上；胃癌AGS、胶质瘤U25l细胞株中β3GnT8 cDNA经测序鉴定存在4个一致的SNP位点。结论母βGnT2、β3GnT8共同表达于多种癌细胞株中；成功克隆β3GnT2、β3GnY8全长编码片段并构建真核表达载体βEGFP-C1-β3GnT2、βEGFP-C1-β3GnT8；发现胃癌AGS、胶质瘤U251细胞株中β3GnT8 cDNA SNP位点4个，为进一步的功能研究奠定了基础。

昆虫细胞中共表达人糖基转移酶对重组蛋白SEAP表达的影响

杆状病毒-昆虫细胞表达系统有表达量高及蛋白翻译后修饰较完善等特点,但与哺乳动物相比其缺乏几种关键的糖基转移酶.许多研究表明将哺乳动物的糖基转移酶基因转入昆虫细胞中,能使得昆虫细胞表达蛋白的修饰得到有效改善.本研究通过RT-PCR克隆了人Ⅱ型N-乙酰葡萄糖胺转移酶(β-1,2-N-acetylglucosaminyltransferaseⅡ)和Ⅰ型β-1,4-半乳糖基转移酶(β-1,4-galactosyltransferase)基因,并将它们分别插入重组杆状病毒上,获得了表达GnT2和β4GalT1的重组杆状病毒.以具有糖基化修饰位点的人分泌型碱性磷酸酶(Secreted Alkaline Phosphatase,SEAP)为对象,将表达糖基转移酶的重组杆状病毒和表达SEAP的重组杆状病毒共感染细胞,Western blot分析结果表明共感染时所表达的SEAP蛋白条带分子量明显大于其单独表达时的分子量.结果表明重组病毒共感染对杆状病毒-昆虫细胞表达的SEAP有修饰作用.